YS-80-122海洋低温碱性蛋白酶的性质

碱性蛋白酶是一种最重要的工业用酶,广泛应用于洗涤、食品、皮革和丝绸行业.海洋低温碱性蛋白酶是一种应用我国海洋嗜极微生物黄海黄杆菌(YS-80-122)代谢产物并通过现代生物工程手段开发出的一类新型酶.通过6000转/分离心(4℃),收集(30%-65%)硫酸铵沉淀,透析后等电聚焦制备分离(12W),并经凝胶S-200过滤,获得纯品经SDS- PAGE 聚丙烯酰胺凝胶和C8 HPLC 图谱已达到电泳纯.其分子量为49,320Dal,等电点为8.5.建立酶活-温度-pH 方程与模型( r2＞0.9),可求出其最适温度为30℃,最适pH为9.5,低温(T≤30℃)和低 pH(pH≤8)对保持其稳定性有利.经试验该酶与大多数金属离子和增稠剂及表面活性剂适应性良好.Pb2 、 Ag 、Cu2 对其有抑制作用,EDTA对其有强烈抑制作用.该酶性质与以往发现碱性蛋白酶性质不同,属于一种新型海洋酶.     

产碱蛋白酶海洋弧菌的筛选 及其培养条件的研究

运用酪蛋白平板法从海水中筛选分离出一株分泌高活性碱性蛋白酶的 海洋弧菌。对其产酶最适条件进行了优化试验。结果表明：在pH8,含2%NaCl,含蛋白胨、蔗 糖和酵母膏,接种量2%,23℃,培养35h条件下,产酶活性最高。发酵液中酶的活性可达719 μ/mL。     

Zn2+和Cd2+单独及联合作用对青蛤肝胰腺消化酶活性的影响

以酶学分析的方法研究了Zn2+、Cd2+单独及联合作用(Zn2++ Cd2+)对青蛤肝胰腺蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活性的影响,实验浓度分别设置为0、10、20、40、80 mg/dm3,染毒时间为4d.实验结果表明,3种消化酶活性大小为淀粉酶＞蛋白酶＞纤维素酶.不同浓度的Zn2+对淀粉酶表现为显著的抑制作用;除40 mg/dm3浓度组的Zn2+对蛋白酶有激活作用外,其余浓度组的Zn2+对蛋白酶均有抑制作用;除10 mg/dm3浓度组Zn2+对纤维素酶有抑制作用外,其余浓度组的Zn2+对纤维素酶均有激活作用.不同浓度的Cd2+对淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶均有不同程度的抑制作用,且表现出不同的抑制趋势;不同浓度的Zn2++Cd2+对淀粉酶和蛋白酶均表现为显著的抑制作用,且随着实验设置浓度的升高抑制作用加强,而20 mg/dm3和40 mg/dm3浓度组对纤维素酶表现出激活作用,其他两个浓度(10、80 mg/dm3)则表现为抑制作用.青蛤肝胰腺消化酶活性可作为Zn2+和Cd2+污染监测的一种生物标记物.     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex- 75 ,Sephadex- 10 0凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌 (Vibriop acini) X4 B- 7菌株产生的碱性蛋白酶 ,得到电泳纯酶制品 ,并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示 :纯酶的分子量为 2 7KD,等电点 p I=8.7,最适反应 p H9.0～ 10 .5 ,最适反应温度 5 0～ 6 0℃。ED-TA对酶活力没有影响 ,高酶浓度可以降低 SDS对酶的抑制作用 ,该酶可用于解聚组蛋白。 DNA琼脂糖凝胶电泳证明 :酶对 DNA酶有降解作用 ,而对 DNA没有降解作用 ,该酶有希望应用于核酸的提取     

产淀粉酶的海洋曲霉菌的分离及酶学特性初步研究

从乐清湾红树林中分离获得2株产淀粉酶的真菌,经初步鉴定为曲霉属菌株,暂命名为曲霉5#和曲霉34#。对它们的生长温度、固体发酵时的产酶条件以及淀粉酶特性进行了初步研究。该研究结果表明,曲霉5#和曲霉34#的最适生长温度分别为30~35℃和25~30℃,最高生长温度分别为40℃和35℃,在10℃下均能生长。对两株菌进行固体发酵时其最佳培养时间为96 h。两株菌所产淀粉酶的最适pH值为7.0,最适反应温度为40℃;淀粉酶在50℃下仍能保持活力,60℃下酶活力开始下降,80℃时酶几乎失活;离子对淀粉酶的激活或抑制作用也相似。     

海洋Pseudomonasaeruginosasp.DES-3的鉴定以及基因ap02对其产蛋白酶的影响研究

海洋是地球上最大的生态系统,其多样独特的生态环境造就了其有别于其他环境的微生物资源。本研究利用蛋白酶的活性筛选策略,从辽宁省营口市某海洋淤泥中分离得到一株产蛋白酶的优势菌株DES-3。通过微生物形态学特征、生理生化性质和16SrDNA基因鉴定以及系统发育进化关系的分析,将该菌株鉴定为铜绿假单胞菌属,命名为Pseudomonas aeruginosa sp.DES-3。其胞外蛋白酶的最适反应温度和最适pH分别为55℃和9.0。将来自于碱性污染土壤宏基因组文库的编码碱性蛋白酶基因ap02与广宿主表达载体pBBR1MCS-5连接,转化至野生型菌株P.aeruginosasp.DES-3细胞中,成功构建了基因工程菌株P.aeruginosasp.DES-3/pBBR1MCS-5-ap02。基因工程菌株的最适反应温度为60℃,较野生型菌株提高了5℃。本研究构建基因工程菌株的策略可为菌株的改造和相应工业应用提供一定的技术参考。     

产碱性纤维素酶海洋细菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

用CMC平板筛选方法,从青岛近海海域海水中分离出一株产碱性纤维素酶的海洋菌株QM11,经16S rDNA鉴定,该菌株为Cytophaga fucicola.对该菌的生物学特性研究表明,其最适生长温度为27℃,生长温度范围为4～48℃,为耐冷菌;在pH7.0～8.0、含3.0%NaC1的培养基条件下,最适宜菌株生长和产酶;QM11所产碱性纤维素酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为9.0,在碱性条件下具有较高的酶活性和较好的稳定性.Mn2+、Fe3+对酶反应具有促进作用,Cu2+、Pb2+对酶反应具有抑制作用.     

海洋真菌LD8岩藻多糖酶的固态发酵条件研究

对海洋真菌LD8岩藻多糖酶的固态发酵条件进行了研究,主要内容包括氮源、诱导物、起始pH、人工海水盐浓度及温度等。固态发酵最佳培养基组成：麸皮7．5g,葡萄糖0．1g,海带粉0．5g,NaNO3为0．04g;最佳培养条件为培养温度28℃,起始pH6．0。在28℃培养48h,酶活力可达13．6IU/g干培养基,比活力为0．93IU／mg蛋白质。另外对岩藻多糖酶酶学性质进行了研究。     

一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析

从海洋球石藻Emiliania huxleyi病毒EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶(Sp)基因(GenBank登录号:KC161207),对该基因的开放阅读框(ORF)进行系统的生物信息学分析,并在大肠杆菌中融合表达,通过亲和层析法获得了纯化的重组Sp。结果表明:EhV99B1-Sp基因的ORF为1 110bp,编码368个氨基酸,蛋白相对分子质量为39.5kDa;该基因片段与GenBank中EhV86-Sp的同源性很高,核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为95%和97%,而与其他物种Sp序列的同源性仅为28%~32%,说明其可能是丝氨酸蛋白酶家族中的一个新成员;预测的二级结构特征显示EhV99B1-Sp的蛋白结构域中具有典型的LTAGHC(组氨酸活性位点区域)和AICNGDSGGPLF(丝氨酸活性位点区域)两个丝氨酸蛋白酶催化活性位点的氨基酸基序,是一个两次跨膜蛋白;将该基因在大肠杆菌中进行低温诱导表达,得到分子量为60kDa的重组蛋白,经鲤鱼肌肉丝氨酸蛋白酶(MBSP)抗体检测证实为Sp,且重组蛋白在大肠杆菌细胞中具有明显的生物学活性。本研究结果为进一步探讨EhV99B1-Sp在病毒与宿主相互作用过程中的调节作用及其功能与应用奠定基础。     

红树林生境产嗜热纤维素酶芽孢杆菌的筛选及其活性分析

本研究从红树林沉积物样品中筛选获得一株具有较高纤维素酶活性的菌株ms-2,通过革兰氏染色、生理生化试验,以及16S r DNA基因片段比对鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ms-2。对其产酶性质进行研究表明该菌株所产纤维素酶为胞外酶而非膜锚定酶,该酶具有良好的嗜热性,且在弱酸条件下酶活性较高,最适宜温度和pH分别为65℃和6. 0,在此条件下最高酶活性为0. 655 7 U/cm3;另外,在浓度为1 mmol/dm3Cu2+、Mg2+、Zn2+、Fe3+和Mn2+条件下,Cu2+对酶活性无显著影响,Mg2+、Zn2+、Fe3+和Mn2+对酶活性均有不同程度的抑制作用,其中Mn2+的抑制最为明显,酶活性下降了29. 96%。由于产业应用中酶解纤维素时通常需要在55～60℃的温度下进行,研究获得的嗜热纤维素酶不仅适合这样的温度环境,还能维持较高的酶活性水平,并且对Cu2+、Mg2+、Zn2+、Fe3+较不敏感,有利于产业开发应用。     

Isolation and identification of a marine killer yeast strain YF07b and cloning of the gene encoding killer toxin from the yeast

It was found that the marine yeast strain YF07b could secrete a large amount of killer toxin against a pathogenic yeast strain WCY which could cause milky disease in Portunus trituberculatus.The marine yeast strain YF07b was identified to be Pichia anomala according to the results of routine yeast identification and 18S rDNA and ITS sequences.The gene encoding killer toxin in the marine yeast strain YF07b was amplified by PCR technology.After sequencing,the results show that an open reading frame,consisting of 1 281 bp,encoded a presumed protein of 427 amino acids.The sequence of the cloned gene was found to have 99% match with that of the gene encoding killer toxin in Pichia anomalas strain K.A signal peptide including 17 amino acids appeared in the N-terminal domain of the killer toxin.Therefore,the mature protein consisted of 410 amino acids,its molecular mass was estimated to be 47.4 ku and its isoelctronic point was 4.5.     

在海洋环境中的酵母菌分布与多样性

最近几年作者对不同海洋环境中的酵母资源、分布和多样性进行的大量研究,从中发现了22属63种1051株。并且发现这些广泛分布在海水、海泥、高盐海水、深海、各种大型海藻表面、各种海鱼体表和体内和红树林生态系统中。不同种的酵母可以产生蛋白酶、脂酶、植酸酶、菊糖酶、纤维素酶、β-1,3-葡聚酶、嗜杀因子、核黄素、铁载体等活性产物,所以这些酵母菌具有广泛的实际用途。     

三株海洋酵母投喂海湾扇贝幼贝效果的研究

以球等边金藻组成的日饵为对照组,用MY3德巴利酵母、MY32克鲁维酵母、MY33虫道酵母分别以比例25%,50%,75%,100%替代金藻组成日饵投喂海湾扇贝幼贝30d.结果显示投喂MY3比例为25%,50%2组的日均生长率分别为对照组的96%,89%;投喂MY32比例为25%,50%2组的日均生长率分别为对照组的98%,91%;投喂MY33比例为25%,50%2组的日均生长率分别为对照组的102%,98%.3株海洋酵母比例为25%,50%,75%的各组存活率都与对照组之间无明显差别.     

近年来海洋生物活性多肽的研究概况与展望

海洋是地球上资源最丰富的领域，海洋生物是新型肽类生物活性物质的重要来源。科学研究证明，许多海洋多肽具有抗肿瘤、抗艾滋病、抗真菌、抗病毒、防治心脑血管疾病及免疫调节等药理活性。本文简要介绍了近5a来国内外对海洋生物活性肽的研究概况，并进行了概括性展望。     

人工养殖长鳍篮子鱼消化道指数及3 种消化酶活性分布

以体质量58.51 g±21.15 g、体长13.08 cm±1.856 cm的长鳍篮子鱼(Siganus canaliculatus)为实验材料,对其消化道指数和主要消化酶活性分布进行了研究.采用常规方法测定了长鳍篮子鱼的消化道指数,其比内脏重、比肝重、比胃重,比幽门盲囊重、比肠重、比肠长分别为0.1572±0.0230、0.0166±0.0060、0.0115±0.0070、0.004 3±0.002 1、0.020 2±0.0102、2.595±0.457;体质量与体长的回归方程为Y=0.080 6X2.5457(r=0.9777,P<0.01).蛋白酶在各消化器官中的比活力顺序为幽门盲囊>肠>肝脏>胃;淀粉酶的比活力顺序为肠>幽门盲囊>胃>肝脏;脂肪酶比活力顺序为幽门盲囊>肝脏>肠>胃;肠的总蛋白酶活、总淀粉酶活、总脂肪酶活在各消化器官中都最高.肝脏、胃、肠、幽门盲囊的A/P值分别为2.15、22.65、3.81,1.96.研究表明,肠道是长鳍篮子鱼消化食物的最重要的消化器官;根据消化道指数、消化酶分布、A/P值,表明长鳍篮子鱼是偏植食性为主的杂食性鱼类.     

海洋调查船业务化运行保障关键技术进展

海洋科学的发展和海洋战略重要性的日益凸显对海洋调查船的业务化运行提出了新的要求。从国内外海洋调查船运行和关键技术两方面的发展现状和趋势出发,提出了我国"十三五"期间海洋调查船业务化运行保障关键技术的发展建议。为解决海洋调查船需求不断增大与船舶建造运行成本限制的矛盾,世界各主要海洋国家均采取措施提高调查船的使用效率,组建海洋调查船队,实行船时统一调配。另一方面,多学科多任务的海洋调查方式的发展,以及新型调查观测设备的应用,促使调查船运行保障关键技术趋向于普适性和更强的现场支持功能。据此,在我国海洋调查船业务化运行发展原则、关键技术发展方向等方面提出了建议。     

多环芳烃的海洋环境行为及其代谢产物的研究进展

多环芳烃是一类广泛存在于环境中的持久性有机污染物,具有"三致"作用.环境中多环芳烃的某些不完全代谢产物同样可能具有持久性,有些甚至比母体多环芳烃的毒性更强,有可能对环境造成更大的危害.本文介绍了近年来国内外有关多环芳烃的海洋环境行为及其代谢产物毒性方面的研究进展,并重点对代谢产物的分析方法,包括高效液相色谱、气相色谱、气相色谱-质谱联用和液相色谱-质谱联用等,进行了总结,最后对该领域的研究方向进行了展望.     

碱湖高产碱性蛋白酶菌的选育和产酶条件研究

以分离自碱湖的产碱性蛋白酶菌V．metschnikovii DL33为出发株,经紫外线、硫酸二乙酯多次复合诱变,获得一高产突变株V．Metschnikovii DL33—51,其产生的碱性蛋白酶活力是出发菌株的5．74倍,48h发酵液酶活由350U／mL提高至2010U／mL。同时对菌株DL33—51的产酶培养基和条件进行了优化,以最适产酶培养基26℃对V．metschnikovii DL33—51进行摇瓶发酵,发酵40h,酶活达3268U／mL。