大黄鱼倍性检测研究

于2001—2004年对人工诱导大黄鱼的不同发育阶段和不同组织进行倍性检测，胚胎眼泡期采用染色体计数法测定，鱼苗和成鱼阶段用流式细胞法，结果表明，胚胎染色体数目2n=48条为二倍体，3n=72条为三倍体．采用流式细胞法测定鱼苗和成鱼个体时，若受测样品的DNA相对含量值与已知对照组二倍体的比值约为1．5：1，其个体为三倍体；比值约为1：1，则为二倍体，无论用肌肉或尾鳍组织，皆可检测出其个体的倍性。     

双壳类贝类活体倍性快速检测技术

贝类多倍体技术在细胞 染色体育种技术体系中占有重要地位 ,而倍性的鉴定是多倍体育种中的一个重要环节。以往人们主要用细胞染色体计数技术进行倍性的检测［４］。但该技术操作复杂 ,技术要求高且不稳定 ,耗时长 ,而且在大多情况下还要杀死取样对象或对其造成较大的生理伤害。由于在杂交多倍体育种中四倍体的珍贵性 ,需要保持其健康存活状态。因此 ,其快速的活体倍性检测技术的重要性尤显突出。Ａｌｌｅｎ等１９８３年用流式细胞法 (ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ)测定了经人工三倍体诱导的鱼类和贝类的倍性 ,取得了较好的结果。周岭华等［…     

环境样品中甲基汞的检测方法综述

综述了常用的环境样品中甲基汞的检测方法和检测步骤,认为在实际的甲基汞检测过程中,选择或评价所选用检测方法的原则通常是,在确保检测限的基础上,首选考虑检测结果的精确度如何,而快捷方便、经济实惠的检测技术也是现实运用中的实际需要。作为定量检测,GC分别与AAS、AES、AFS的联用是目前较常用的技术,而与ICP-MS或ID-ICPMS的联用,在今后的实际检测中将得到更广泛的运用。生物传感器检测到的汞一般是生物可利用的汞,降低其检测限并将其作为对污染水体与沉积物检测的重要方法,也是今后研究的重点。总之,在人类对环境安全和身体健康日益重视的今天,发展高灵敏度、高准确度、快速方便和低成本的检测技术是未来甲基汞检测的重要发展方向。     

利用流式细胞计进行虾类倍性检测的研究

在生物有机体中,一个细胞核中含的ＤＮＡ总量对于某种类有机体是一定的。利用流式细胞计测量细胞中的ＤＮＡ含量,可以和来鉴别有机体的倍性,本文处次报道了用流式细胞计测定中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）,日本对虾（Ｐ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）和刀额新对虾（Ｍｅｔａｐｅｎａｅｕｓｅｎｓｉｓ）倍性的结果。     

用于单一藻细胞PCR扩增反应的样品保存方法比较

用室内培养的塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense ATHK藻株)作为实验对象,分别选择了5%福尔马林固定后常温保存、95%乙醇固定后常温保存、-20℃冷冻保存、鲁哥氏液(Lugols solution)固定后常温保存等方法,在5,15,30,60 d后对保存的样品进行单细胞PCR反应,并与新鲜样品进行比较。实验结果表明,用95%乙醇保存、-20℃冷冻保存、鲁哥氏液保存的样品在60 d后仍可扩增出目标条带,与新鲜样品没有差别,但是样品中的藻细胞形态有一些改变;而以5%福尔马林固定保存的样品只能在5 d后扩增出目标条带,但藻细胞形态比较完好。因此,对用于单细胞PCR实验的微藻样品,短期内(不多于5 d)可以采用福尔马林保存,而需要长期保存的样品,应当采用乙醇或鲁哥氏液固定,或者采用-20℃冷冻保存的方法。     

日本沼虾染色体倍性检测技术的研究

用流式细胞仪分别对日本沼虾(Macrobrachiumnipponense)正常二倍体的体细胞和四倍阶段体胚胎的DNA相对含量和细胞频率进行了测定,以研究日本沼虾染色体倍性检测技术。以日本沼虾正常二倍体的体细胞液进样所得直方图为标准,用对细胞松弛素B人工诱导的日本沼虾四倍体胚胎进行DNA相对含量和细胞频率的测定,测试结果以直方图表示,并用染色体涂片镜检结果进行倍性核对。结果表明,日本沼虾二倍体和四倍体的DNA相对含量有显著差异,四倍体日本沼虾的DNA相对含量是二倍体的2倍。用流式细胞仪法检测日本沼虾倍性,方法简单、测试速度快、结果可靠。     

用于单-藻细胞PCR扩增反应的样品保存方法比较

用室内培养的塔玛亚历山大藻（Alezandrium tamarense ATHK藻株）作为实验对象,分别选择了5％福尔马林固定后常温保存、95％乙醇固定后常温保存、-20℃冷冻保存、鲁哥氏液（Lugol’s solution）固定后常温保存等方法,在5,15,30,60d后对保存的样品进行单细胞PCR反应,并与新鲜样品进行比较。实验结果表明,用95％乙醇保存、-20℃冷冻保存、鲁哥氏液保存的样品在60d后仍可扩增出目标条带,与新鲜样品没有差别,但是样品中的藻细胞形态有一些改变;而以5％福尔马林固定保存的样品只能在5d后扩增出目标条带,但藻细胞形态比较完好。因此,对用于单细胞PCR实验的微藻样品,短期内（不多于5d）可以采用福尔马林保存,而需要长期保存的样品,应当采用乙醇或鲁哥氏液固定,或者采用-20℃冷冻保存的方法。     

凡纳滨对虾血细胞体外免疫活性保存技术的研究

研究了凡纳滨对虾血细胞的体外免疫活性保存技术。结果表明:4种保存液(CM、AC、MBHSS、M199)对凡纳滨对虾血细胞数量、存活率和酚氧化酶原级联系统胞吐影响显著(P0.05),随着孵育时间的延长,4种保存液各处理组血细胞数量、存活率和丝氨酸蛋白酶原、酚氧化酶原活力逐渐下降,而酚氧化酶活力逐渐升高。在60min内CM处理组血细胞数量、存活率显著高于MBHSS和M199处理组,而CM与AC处理组在40min内无显著性差异,60min时CM处理组血细胞存活率明显高于AC处理组,而血细胞数量无显著差异;在0~20min内CM处理组丝氨酸蛋白酶原、酚氧化酶原活力均高于其它处理组,释放的酚氧化酶活力则低于其它处理组,而在40~60min内CM处理组与其它处理组各指标差异显著。同时在0~40min内CM处理组各指标无明显变化,60min时差异显著。由此可见,CM缓冲液可作为凡纳滨对虾血细胞体外免疫活性的保存液,而且体外实验应在40min内完成。     

对虾白斑综合症病毒的诊断和检测

对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus，WSSV）也叫白斑综合症杆状病毒（WSBV）、系统外胚层和中胚层杆状病毒（SEMBV）、日本对虾杆状核病毒（RV-PJ）、对虾杆状DNA病毒（PRDV）、皮下及造血组织坏死杆状病毒（HHNBV）、中国对虾杆状病毒（PCBV）、淋巴样细胞核性杆状病毒（LNBV）（陈秀男等，1994；Wongteerasupaua等，1995；Inouye 等，1994、1996；黄倢等，1995a；战文斌等，1995；陈细法等，1997），是全球对虾养殖业危害性最大的病毒之一。自1992年WSSV暴发性流行以来，造成了对虾养殖业的严重萎缩。鉴…     

不同保存方法的大黄鱼肌肉样品基因组DNA提取及RAPD分析

以－20℃冷藏、70％（V／V）乙醇、含50mmol/dm^3 EDTA的70％（V／V）乙醇和10％（V／V）福尔马林保存等方法处理大黄鱼肌肉样品，进行了DNA的提取及RAPD分析，并与新鲜样品作了对照。实验结果表明，鲜活样品以及冷冻保存、70％（V／V）乙醇以及含50mmol/dm^3EDTA的70％（V／V）乙醇保存的样品均可得到高质量的DNA，大小在21kbp左右，含量为100μm/cm^3左右。而从10％（V／V）福尔马林保存样品也能提到DNA，但其DNA得率低，约10μg/cm^3。分别以上述提取的DNA为模板进行RAPD扩增，未见有明显的差异。     

对虾养殖防病新模式初步研究

设计了一个对虾养殖防病新模式，并进行了小规模试验，获得初步成功。在４个３０～４０ｍ＾２的露天水泥池中，各放入３ｃｍ的大苗５００～７００尾（每亩约１００００尾），经９０余天的养殖，对虾成活率８０％左右，个体１０ｃｍ，平均体重８０尾／ｋｇ，饵料系数约１．５。新模式的立足点是防病，特点是设置一蓄水沉淀池，用含氯消毒剂处理养殖用水，配备充气增氧设施，选择优质配饵，合理投喂，使各种水质理化因子及生物因子尽量     

孔石莼(Ulva pertusa)LAMP-LFD快速检测方法的建立

采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法。该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示。优化后LAMP的反应条件为63°C反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min。结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性。利用该方法最低可检测到3.04×10~(–2) pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍。针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致。因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段。     

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae) 三重PCR 快速检测方法的建立与应用

参照GenBank发表的无乳链球菌sip、cpsE这两个高度保守基因设计两组特异性引物,应用已报道的无乳链球菌cpsL基因高度保守序列的引物作为阳性对照引物,经反应条件和反应体系参数优化,建立一种检测无乳链球菌的三重PCR方法,并应用本三重PCR方法检测40尾人工感染罗非鱼样本和22尾临床上收集的疑似无乳链球菌感染鱼样本。结果表明,所建立的三重PCR方法具有良好特异性,检测无乳链球菌DNA样本时出现三条扩增条带,检测其他7种供试菌株DNA则不出现出任何扩增条带,对无乳链球菌DNA样本的最低检测浓度为0.32ng/μl,最适Mg2+浓度为37.5mmol/L,整个检测过程耗时100min左右。40尾人工感染罗非鱼的肝脏、肾脏组织DNA样本阳性检出率分别为100%,22尾疑似无乳链球菌感染鱼的肝脏、肾脏组织DNA样本阳性检出率分别为72.7%,以上两批样本检测结果与常规细菌鉴定方法结果一致。     

疑患EMS/AHPNS对虾中检出黄头病毒的一种新株型

对2012—2013年从河北、福建和广东3个对虾养殖场采集的12份发生疑似早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死综合征(EMS/AHPNS)的样品,采用组织病理学方法、套式RT-PCR检测方法以及快速灵敏检测试剂盒进行了检测。三地来源的养殖对虾样品症状均表现为肝胰腺颜色变淡,部分出现萎缩,空肠空胃,腹节肌肉略微白浊;组织病理切片结果表明,患病对虾肝胰腺血细胞浸润,肝胰腺盲管上皮细胞脱落,继发性细菌感染,淋巴器官和血淋巴细胞内存在核固缩、破裂和细胞质包涵体。按世界动物卫生组织(OIE)手册的套式RT-PCR方法检测,结果显示,黄头病毒(Yellow head virus,YHV)目的产物的阳性样品检出率为66.7%,该方法对这些样品的灵敏度可能很低。目的产物测序后经NCBI Blast,与已报道的YHV相似性为76.5%—89%;系统发育树显示这3个来源的样品位于同一个分支,与已知的YHV/鳃联病毒(gill-associated virus,GAV)株均不相同,其亲缘关系与YHV较近,而与GAV较远。用新研发的YHV快速高灵敏检测试剂盒检测,结果表明,所有样品均为YHV强阳性。以上表明患AHPNS的养殖对虾中存在一种YHV的新株型的感染,这也是我国首次检测到YHV的感染。     

人工养虾池生态系统结构特点及其控制对策

为养殖对虾而修筑的大大小小的养虾池都是一相对独立的生态系统。在池内生态条件适于对虾正常要求的情况下，对虾可以在其中生存、生长。如果生态条件逐步恶化，非但影响对虾的正常生活、生长，严重时甚至导致全部对虾死亡。粗放式的养殖，其影响也相对小些，高密度养殖情况下潜在的危险较大，对养殖池的环境状况要特别注意。ｌ人工养虾生态系统的基本特点１·１人工养殖池是一个结构简单的生态系统。在池内除放养的对虾（有时混养贝类等）外自然存在的生物通常是浮游植物和浮游动物，食物链大体上是二个层次（对虾靠投饵喂养例外）。养虾池…     

地下金属管道防腐层破损处的直流电法探测

地下金属管道防腐绝缘层的探测是目前管网工程中提出的一个实际问题,探测手段主要包括Person法、电位测试法和密间隔电位测试技术等,但对探测的方法和原理少见报道。详细地介绍了应用直流电法探测地下金属管道防腐绝缘层破损位置的正演模拟和反演过程,通过编写计算程序和综合分析,认为利用直流电法可以探测到地下金属管道防腐层破损的具体位置。     

虾池小型底栖动物的数量研究

提出１９８７年５月至１０月在黄岛养虾池对虾生长周期内对小型底栖动物数量逐月调查。指出：小型底栖动物总平均密度为１０９２．４ｉｎｄｓ·１０ｃｍ－２，自由生活海洋线虫和底栖桡足类是主要类群，其总平均密度分别为４６６．９和４５７．９ｉｎｄｓ·１０ｃｍ－２。８９．７％的小型底栖动物分布在沉积物表层２ｃｍ内。结果指明小型底栖动物被对虾捕食，并提出了捕食模式。     

厦门潘涂虾池及其附近内湾各态氮的季节性变化特征

1996年6月至1997年2月，对厦门市潘涂垦区两口虾池及附近内湾不同形态氮的含量与动态进行调查。结果显示虾池的可溶性有机氮（DON）含量明显高于邻近内湾，颗粒有机氮（PN）多数时间也高于内湾，而邻近内湾可溶性无机氮（DIN）含量则明显比池内的高。虾池中的氮主要以DON形态存在（59．76％），DIN，PN含量较少（9．37％和20．87％）；邻近内湾则是以DIN为主（59．97％），其次为DON（29．55％），PN所占比例最小（10．48％）。吓池与邻近内湾不同形态氮的季节变化也存在一定差异。     

96孔酶标板法测定中国对虾血淋巴上清液抗菌活力和酚氧化酶活性的初步研究

用96孔酶标板法测量单尾中国对虾血淋巴上清液抗菌（Uα）应力和过氧化酶活性。实验表明，该法具有以下优点：1）可测定大批单尾对虾血淋巴上清液的抗菌活力，酚氧化酶活性；2）所需对虾血淋巴上清液微量化；3）用酶标仪读取酶的活性，减少了不同试验者人为读数时的误差；4）重复性高。