罗非鱼溶菌酶活力的研究

采用试管法 (测定溶菌酶活力 )研究pH和温度对罗非鱼血清、肝、鳃中溶菌酶活力的影响 ,以确定其最适pH和最适温度 ,同时研究了溶菌酶对温度的耐受性及其在体外的抑菌效果。结果表明 ,罗非鱼血清、肝溶菌酶的最适pH是 6 3 0 ,最适温度是 2 8℃ ;鳃中溶菌酶的最适pH是 6 1 0 ,最适温度是 3 4℃。各种酶在 5 0℃保温 40min以上将被灭活 ,在 3 7℃以下活性是稳定的 ;体外抑菌试验表明罗非鱼溶菌酶对革兰氏阳性菌具有较好的抑菌效果。     

米曲霉中性蛋白酶特性的研究

研究了米曲霉中性蛋白酶的特性。结果表明，米曲霉中性蛋白酶的最佳提取方法为加入pH7．2的缓冲液研匀，置恒温（30℃）培养箱中提取30min．每10min搅动1次，最后用4层纱布过滤。酶反应最适温度为55℃，最适pH值为7．2。NaCl和EDTA对其有一定的抑制作用。酶的热稳定性好．在45℃的温度下处理24h后，酶活力仍有45．5％。米曲霉中性蛋白酶与培养物一起保存时，稳定性也较好，在4℃保存一个月后，酶活力几乎无变化。     

罗非鱼下脚料自溶条件的初步探讨

采用单因素和正交优化实验19（43）确定酶法自溶罗非鱼下脚料的最适条件，结果表明，最适自溶条件为：料液质量比1：3，反应温度50％，pH7．5，反应时间6．5h；酶解结束蛋白质回收率为81．75％。     

持续高温对吉富罗非鱼幼鱼消化酶和溶菌酶活力的影响

通过人工控温,对吉富罗非鱼（GIFT Oreorhromis niloticus）幼鱼实施34℃持续高温处理,研究持续高温对吉富罗非鱼幼鱼消化酶和溶菌酶活力的影响。结果表明：持续高温对吉富罗非鱼幼鱼消化酶活力的影响有统计学意义（P〈0．05）,对溶菌酶活力影响不具统计学意义（P〉0.05）;随着时间的推进,脂肪酶、淀粉酶活力增加,差异有统计学意义（P〈0．05）,溶菌酶活力增加,但差异无统计学意义（P〉0.05）。表明持续高温能一定程度地提高罗非鱼的消化能力和免疫功能。     

米曲霉中性蛋白酶特性的研究

研究了米曲霉中性蛋白酶的特性。结果表明,米曲霉中性蛋白酶的最佳提取方法为加入pH 7.2的缓冲液研匀,置恒温(30℃)培养箱中提取30 min,每10 min搅动1次,最后用4层纱布过滤。酶反应最适温度为55℃,最适pH值为7.2。NaCl和EDTA对其有一定的抑制作用。酶的热稳定性好,在45℃的温度下处理24 h后,酶活力仍有45.5%。米曲霉中性蛋白酶与培养物一起保存时,稳定性也较好,在4℃保存一个月后,酶活力几乎无变化。     

吉富罗非鱼最适生长水温研究

为研究不同养殖水温对吉富罗非鱼摄食和生长的影响,了解吉富罗非鱼的最适生长水温,实验设计28℃、30℃、32℃、34℃4个不同温度梯度,周期45 d。结果表明:不同水温环境下吉富罗非鱼表现出不同的生长特性,养殖在30℃水体中的罗非鱼生长速度明显高于其他温度组;水温对吉富罗非鱼的特定生长率、绝对增重率、饲料转化率、摄食率有显著影响(P<0.05),之间的相关关系可以用二次回归曲线来描述,特定生长率(SGR)与水温的关系式为rSGR=-19.255+1.3794T-0.0235T2,摄食率(FR)与水温的关系式为rFR=-22.175+1.5901T-0.026 6 T2,饲料转化率(FCR)与水温的关系式为rFCR=34.041-2.2256T+0.0382 T2;吉富罗非鱼的最适生长水温为29.3℃,最大摄食率的水温为29.9℃,最高食物转化率水温为29.1℃。     

罗非鱼下脚料自溶条件的初步探讨

采用单因素和正交优化实验L9(43)确定酶法自溶罗非鱼下脚料的最适条件,结果表明,最适自溶条件为:料液质量比1∶3,反应温度50℃,pH7.5,反应时间6.5h;酶解结束蛋白质回收率为81.75%。     

鲢鱼降血压肽的酶解条件

以鲢鱼蛋白为原料，采用5种不同复合蛋白酶（P1，P2，P3，P4，P5）进行酶解。综合研究了复合生物酶酶量、酶解时间、pH、酶解温度等对鲢鱼蛋白酶解降血压肽ACE活性抑制效果的影响。结果表明。复合酶P1酶解降血压肽对ACE抑制率经体外检测为88．08％。具有最佳的酶解效果。对应最佳条件为：酶量25IU／mL，酶解时间2h，pH 7．0，酶解温度60℃。     

常用剂量氟苯尼考在罗非鱼肝脏和肾脏中的消除规律及组织学影响

在水温28℃条件下,以12 mg/kg剂量对罗非鱼单次口服给药,采用HPLC方法测定不同时间实验鱼肝脏和肾脏中的药物水平,分析氟苯尼考在罗非鱼肝、肾组织的吸收及消除规律。结果显示,肝脏和肾脏中的药动学参数均符合药动学一室模型,肝脏的药物消除速度快于肾脏,消除半衰期T1/2β分别为4.89 h和15.93 h;药物在肝脏的Tmax为5.43 h,吸收峰值为4.84μg/g;59 h后肝、肾组织中的药物含量均低于0.8μg/g。取12 mg/kg剂量连续给药7 d的实验鱼肝、肾组织,进行组织学观察,结果显示,给药组罗非鱼的肝、肾组织均未出现病理性变化。此外,氟苯尼考对6株罗非鱼常见病原菌的体外抑菌实验中,最小抑菌浓度(MIC)均≤4 mg/L,表明常用剂量氟苯尼考在罗非鱼体内消除快、残留少且不造成组织损伤,对常见病原菌具有良好的抑菌效果。     

苯酚对奥尼罗非鱼非特异性免疫指标的影响

采用水体中常见污染物——苯酚对奥尼罗非鱼进行刺激,研究不同浓度苯酚对奥尼罗非鱼非特异性免疫功能的影响。奥尼罗非鱼分别暴露于0.005、0.025、0.125、0.625、3.125 mg/L等5个浓度的苯酚中8周,每两周采集抗凝血液和血清,用于检测非特异性免疫指标。结果表明:暴露于低浓度苯酚组(0.005 mg/L和0.025 mg/L)的奥尼罗非鱼NBT(氯化硝基四氮唑蓝)阳性细胞数等非特异性免疫指标相对于对照组无显著性差异(P>0.05),中浓度苯酚组(0.125 mg/L和0.625 mg/L)和高浓度苯酚组(3.125mg/L)对罗非鱼非特异性免疫指标的影响存在显著的时间效应和剂量效应(P<0.05),可减少NBT阳性细胞数、抑制超氧化物歧化酶活力和抗菌活力;促使溶菌酶活力和溶菌酶含量先升后降。表明中高浓度苯酚组对奥尼罗非鱼具有明显的免疫毒性。     

不同土地覆盖类型上植被生长的最适温度

生态过程模型已成为探测陆地植被对气候变化响应的重要手段之一,最适温度作为模型模拟过程中的一个重要参数,其准确性对模型模拟结果有重要影响。本研究以2001-2010年MODIS-NDVI、2001-2010年气象台站温度数据,以及2000年土地覆盖数据,结合前人研究的成果,将最适温度定义为适宜植物生长温度上下限之间所有月均温度的均值,并从植被类型角度出发,探讨不同植物生长的最适温度,以期为生态过程模型的改进提供参数优化方案。研究表明,不同植被类型植被生长的最适温度存在较大差异。常绿针叶林、常绿阔叶林、落叶针叶林、落叶阔叶林、混交林、灌丛、草地、农田和建设用地的最适温度,依次为22.4℃、23.4℃、14.1℃、19.5℃、20.7℃、22.6℃、15.4℃、24.8℃和25.6℃。     

温度和盐度对吉富罗非鱼幼鱼肠道两种抗氧化酶活力的联合效应

采用中心组合设计和响应曲面法研究温度(12~34℃)和盐度(0~26)对吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)幼鱼(体长4.20±0.10 cm,体质量2.42±0.15 g)肠道超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalane,CAT)的联合效应。结果表明:1)温度对吉富罗非鱼幼鱼肠道SOD和CAT活力的线性效应和累积效应均极显著(P<0.01);盐度对吉富罗非鱼幼鱼肠道SOD活力线性效应显著(P<0.05),累积效应极显著(P<0.01);盐度对吉富罗非鱼幼鱼肠道CAT活力线性效应不显著(P>0.05),累积效应极显著(P<0.01);温度和盐度对SOD活力的互作效应极显著(P<0.01),对CAT活力的互作效应不显著(P>0.05)。2)响应曲面法分析表明,随着温度和盐度的增大,两种抗氧化酶的活力均呈先减小后增大的趋势。3)建立两种抗氧化酶活力与温度、盐度间关系的模型方程(SOD:决定系数R2=0.992 9,预测决定系数R2Pred.=0.939 2,P<0.01;CAT:决定系数R2=0.948 5,预测决定系数R2Pred.=0.647 1,P<0.01),两模型方程可用于预测吉富罗非鱼幼鱼肠道SOD和CAT的活力。4)优化结果显示,温度为24.15℃,盐度为11.75时,SOD活力最小值为9.80 U/mg,CAT活力最小值为9.28 U/mg,满意度函数值高达0.961。     

几种因子对鞍带石斑鱼精子活力的影响

研究不同梯度的盐度、pH、温度及低温保存时间对鞍带石斑鱼精子活力的影响。结果表明:鞍带石斑鱼精子活力的适宜盐度范围为27.5～35.0,最适盐度为32.5,此时精子的快速运动时间和寿命分别为13.2min和14.8min;最适pH为8.5,精子的快速运动时间及寿命最长,分别达12.7min和17.3min;温度范围为27～31℃,以29℃时快速运动时间最长,达16.6min;在0～4℃冰箱保存6h后鞍带石斑鱼精子活力未显著降低,其中保存前精子快速运动时间为18.4min,保存6h后为18.2min,保存120h后仍有活力,精子快速运动时间为2.3min,精子激活率为3.3%。以x为保存时间,快速运动时间y和寿命y′符合线性方程y=-0.8334x+19.164(R2=0.9856),y′=-1.1358x+27.8(R2=0.9573)。     

鲢鱼降血压肽的酶解条件

以鲢鱼蛋白为原料,采用5种不同复合蛋白酶(P1,P2,P3,P4,P5)进行酶解,综合研究了复合生物酶酶量、酶解时间、pH、酶解温度等对鲢鱼蛋白酶解降血压肽ACE活性抑制效果的影响。结果表明,复合酶P1酶解降血压肽对ACE抑制率经体外检测为88.08%,具有最佳的酶解效果。对应最佳条件为:酶量25 IU/mL,酶解时间2 h,pH7.0,酶解温度60℃。     

曼氏无针乌贼幼体生态因子耐受性的研究

研究了温度、盐度、pH值的变化对曼氏无针乌贼幼体成活率和活力的影响。结果表明，曼氏无针乌贼幼体的生存盐度为11．73～31．43，适宜盐度为19．61～26．18；生存水温为14～30℃，适宜水温为22～28℃；生存pH值为6．0～9．5，适宜pH值为7．5～8．5。说明环境因子变化对幼体存活有较大影响。乌贼幼体对渐变的适应性强，幼体成活率渐变大于突变，但温、盐度的耐受值宽度并未增大。     

木瓜蛋白酶在制取青鳞鱼可溶性蛋白中的应用

研究了木瓜蛋白酶的酶解温度，酶浓度，酶解时间，加水量，pH值对青鳞鱼可溶性蛋白得率的影响，探讨了α－氨态氮含量与青鳞鱼与可溶性蛋白得率的关系。结果表明：温度小于50℃，随着酶解温度的提高，酶浓度的增加，酶解时间的延长青鳞鱼可溶性蛋白得率及α－氨态氮的含量均增加，α＝氨态氮含量增加比可溶性蛋白得率的增加明显；加水量的增加，可溶性蛋白得率增加；pH值对水解效果及可溶性蛋白得率影响不大。综合考虑，最佳水解条件为：温度50℃，酶浓度为1500u/g，酶解时间80min,m原料：m水＝1：2，pH6.8。酶解所得可溶性蛋白经氨基酸分析仪检测,其氨基酸总量为49.47mg/mL，必需氨基酸占氨基酸总量的41．0％，游离氨基酸含量为6.3mg/mL，肽含量为87．2％。     

温度对奥尼罗非鱼仔稚鱼生长、饲料利用和消化酶活力的影响

研究了温度22、25、28、31和34℃下奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus×O.aureus)仔稚鱼生长、饲料利用和消化酶活力。结果表明:1)不同温度对奥尼罗非鱼仔稚鱼生长有显著影响(P<0.05),温度为31℃时,仔稚鱼生长速度和绝对增重率最高,分别为0.08cm/d和0.035g/d;温度为22℃时最低,仅0.06cm/d和0.020g/d。2)饲料系数在28℃时最低,仅1.90;22和34℃时较高,达2.14和2.17,各组差异显著(P<0.05)。3)在仔稚鱼发育和存活率上,当温度在22～34℃时,温度越高,仔稚鱼发育越好;各组仔稚鱼的存活率介于93.7%～94.7%,差异不显著(P>0.05)。4)在消化酶活力上,胃蛋白酶、胰蛋白酶和淀粉酶活力随温度升高而升高,均在34℃时活力最高;脂肪酶活力在31℃时达到最高,22℃时活力最低。     

建立罗非鱼保鲜期实验方程及其应用性探讨

根据实验数据和采用王怡评定罗非鱼感官的评分标准，建立０℃、８℃和１５℃三个温度水平的罗非鱼保鲜期实验方程；同时．实验表明：在温度０℃～５℃下无论采用感官检定或ＴＶＢ－Ｎ，或细菌总数和Ｋ值的指标检定其鲜度，所得的结果均相同。因此．在实际应用时，以０℃温度水平下的实验方程其可靠性较大。     

尼罗罗非鱼Galectin-3基因的原核表达与条件优化

【目的】对Galectin-3蛋白进行纯化,优化诱导相关表达条件,为大量获取罗非鱼Galectin-3蛋白提供方案。【方法】根据NCBI上已公布的罗非鱼(Oreochromismossambicus)Galectin-3基因序列,设计多对带Eco RI和Xhol酶切位点的引物,筛选出良性扩增引物,对罗非鱼cDNA经进行聚合酶链式反应(PCR)扩增、限制性快切酶双酶切、T4连接酶连接等步骤,构建罗非鱼Galectin-3基因的原核表达质粒pGEX-4T-Galectin-3,将重组质粒导入大肠杆菌BL21中,进行Galectin-3重组蛋白的表达。并比较不同的诱导温度、诱导时间、IPTG浓度条件下的表达效果,对Galectin-3蛋白表达最优条件进行筛选。【结果】构建了罗非鱼Galectin-3原核表达质粒,进行Galectin-3重组蛋白后发现37℃下,0.4 mmol/L浓度的IPTG诱导5 h即可诱导Galectin-3重组蛋白高效表达。免疫印迹结果显示,经蛋白纯化柱纯化后的pGEX-4T-Galectin-3重组蛋白可与GST-Tag单克隆抗体发生特异性反应,进而表明表达的重组蛋白是罗非鱼的Galectin-3蛋白。【结论】本研究成功构建了罗非鱼Galectin-3基因的原核表达载体,并确定了Galectin-3融合蛋白最适的表达条件:37℃下,0.4 mmol/L浓度的IPTG诱导5 h。     

温度、盐度、pH和体质量对尼罗罗非鱼幼鱼窒息点的影响

利用实验生态学的方法研究不同温度(15、20、25、30和35℃)、盐度(0、5、10、15和20)、pH(5、6、7、8和9)和体质量(1.93±0.08、3.43±0.12、7.95±0.34、11.74±0.41和15.84±0.61 g)对尼罗罗非鱼幼鱼窒息点的影响,并建立温度、盐度、pH、体质量与罗非鱼窒息点间的回归方程。结果表明:温度t、盐度S、pH和体质量m对尼罗罗非鱼幼鱼窒息点有显著影响(P<0.05)。当温度、盐度、pH和体质量分别为25.28℃、3.6、8.06、6.3 g时,窒息点(DAP)最低,回归方程为DAP=0.000 9 t 2-0.045 5 t+0.726 6(R2=0.952 1),DAP=-0.000 1 S 3+0.004 2 S 2-0.023 9 S+0.111 9(R2=0.922 8),DAP=0.009 3 pH2-0.149 9 pH+0.7174(R2=0.976 8);DAP=-0.000 3 m3+0.011 1 m2-0.104 3 m+0.362 8(R2=0.948 4)。在溶氧不足情况下,温度25.28℃、盐度3.6、pH 8.06的环境条件有助于提高幼鱼耐低氧能力。