一株溶藻弧菌噬菌体的生理特性研究

对从湛江市水产品批发市场分离得到一株溶藻弧菌噬菌体的生理特性进行测定,结果表明:该株噬菌体噬菌斑12 h直径为1～1.5 mm,对紫外线敏感,暴露在紫外灯(20 W,30 cm)下30 min可丧失全部裂解活性;在pH8～11范围内裂解活性较强,最适pH值为11,裂解周期为65 min,对65℃以上的高温敏感,对乙醚和氯仿有较好的耐受性,对抗病毒药物阿昔洛韦敏感,最大常规稀释度为106CFU/mL,最佳感染复数为10。     

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscP基因的克隆与生物信息学分析

根据NCBI上登录的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列,设计一对克隆溶藻弧菌HY9901株Ⅲ型分泌系统"分子尺"蛋白VscP全长基因的特异性引物,PCR扩增获得基因的全长片段。结果显示,vsc P(Gen Bank登录号FR780678)开放阅读框ORF为1 206 bp,共编码401个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为44.4 ku,等电点为5.72。Signal 4.1 Server和TMHMM Server 2.0预测结果表明,VscP无信号肽与跨膜结构域。Soft Berry-Psite预测结果显示,VscP含有3个N端糖基化位点,2个cAMP及c GMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,5个蛋白激酶C磷酸化位点,9个酪蛋白激酶II磷酸化位点,2个N端豆蔻酰基化位点,1个酰胺化位点和3个微体C末端靶信号位点。运用MEGA6.0构建的VscP系统进化树显示,溶藻弧菌VscP与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)聚为一簇。应用SWISS-MODEL软件构建VscP亚基三维结构模型发现,其与鞭毛Fil K蛋白有相似构型。     

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统注射装置蛋白VscO的原核表达及免疫原性

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03株Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)注射装置蛋白VscO作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌VscO序列(NO.KJ179947),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscO基因,序列分析结果显示,该基因全长462 bp,理论分子质量为18.430ku。将vscO基因定向插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-vscO。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,可在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为22 ku的VscO融合蛋白,且该蛋白主要以包涵体形式存在。VscO蛋白表达和纯化的最优条件为:0.1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导4 h,咪唑洗脱浓度为400 mmol/L。用纯化后的融合蛋白免疫SPF级小鼠,获得高效多克隆抗体。Western-blotting结果表明,鼠抗VscO血清既能与重组VscO蛋白发生反应,也能与分离自溶藻弧菌约22 ku的天然蛋白发生反应,提示T3SS注射装置蛋白VscO可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一。     

不同感染复数下海洋蛭弧菌DA5对溶藻弧菌的控制效率

【目的】研究宿主菌密度和感染复数对海洋蛭弧菌捕食弧菌效率的影响。【方法】以溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)zouA(下称"zouA")为宿主,通过海水共培养实验研究海洋蛭弧菌菌株DA5(下称"DA5")在初始宿主密度10~3~10~8 cfu/mL下24 h的生长,评估低感染复数和高感染复数下DA5对zouA 10 d的生物控制效果。【结果】DA5捕食所需最低zouA密度约为5×10~5 cfu/mL;在zouA密度≥10~6 cfu/mL时,DA5方对其发挥控制效应,且感染复数越高捕食效率越高,即使感染复数低至0.001,一定时间后DA5亦可有效控制zouA数量。而当初始zouA密度低至10~4 cfu/mL时,DA5需在感染复数≥100条件下方可显著控制zouA。【结论】宿主密度与感染复数均影响海洋蛭弧菌DA5对溶藻弧菌的控制效果。     

溶藻弧菌免疫胶体金快速检测试纸条的制备

采用溶藻弧菌ATCC17749菌体作为抗原免疫新西兰大白兔,制备兔抗溶藻弧菌多克隆抗体;利用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金及胶体金-抗体结合物,并将其喷涂在玻璃纤维膜上冷冻干燥;在硝酸纤维素膜上包被兔抗溶藻弧菌多克隆抗体和羊抗兔IgG分别作为检测线和控制线;将处理后的玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜、样品垫及吸水纸组装成双抗夹心试纸条,并对试纸条灵敏度、特异性、稳定性进行评价。结果表明,制备的兔抗溶藻弧菌多克隆抗体的效价可达1∶512 000;胶体金溶胶的最佳制备条件为:加入1.8 mL 10 mg/mL的柠檬酸三钠,500 W微波炉中火加热10 min;试纸条检测线和质控线的抗体最佳包被量分别为8.0 mg/mL和1.0 mg/mL;试纸条检测灵敏度为1×106cfu/mL,特异性试验显示,试纸条与哈氏弧菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、美人鱼弧菌、弗氏弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等8株菌无交叉反应;稳定性试验表明,试纸在4℃干燥条件下能稳定保存5个月以上。制备的溶藻弧菌多克隆检测试纸条可灵敏、较特异地检测源自病鱼的溶藻弧菌,整个检测过程可在10 min内完成,适用于溶藻弧菌的快速检测。     

49味中药及其复方与抗生素对溶藻弧菌的体外抑菌作用

【目的】筛选对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)有抑菌作用的中草药及其复方以及抗生素。【方法】采用改良的牛津杯法对诃子、白芍、甘草等49种单味中药进行溶藻弧菌体外抑菌试验,以体外抗菌活性较好的22种药物,按中药配伍规则组成二联、三联复方,采用生药质量浓度分别为60、240 mg/mL的中药进行中药复方体外抑菌试验。用抗生素对溶藻弧菌进行药敏试验。【结果】当单种中药体外抑菌药物质量浓度为240 mg/mL时,诃子、乌梅、醋五味子等对溶藻弧菌抑菌作用明显,为极敏感。在二联中药体外抑菌试验中,当中药质量浓度为60mg/m L时,诃子、乌梅组成复方中药等8种复方对溶藻弧菌协同抑菌作用明显,为极敏感,药物质量浓度在240mg/m L时,诃子与白芍等14种双联中药的协同抑菌作用明显,为极敏感。在三联中药体外抑菌试验中,在药物质量浓度60 mg/mL时,诃子、乌梅、蒲公英等组成24种复方中药按质量比1∶1∶1的抑菌效果极为敏感,药物质量浓度在240mg/m L时,黄芩、诃子、黄芪等22复方中药按质量比1∶1∶1对的抑菌作用明显,为极敏感。溶藻弧菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、土霉素及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑4种药物高度敏感。【结论】18种单味中药对溶藻弧菌有抑制作用,黄芩、诃子、黄芪等24个三联复方中药药效较强,多个抑菌作用效果良好的三联复方中药可用于鱼病防治研究。     

溶藻弧菌dtd基因的克隆及原核表达条件优化

根据NCBI数据库中已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列合成一对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR技术)扩增溶藻弧菌HY9001菌株dtd基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a构建重组表达质粒pET-DTD,并对其进行诱导温度、诱导时间、诱导IPTG浓度等条件的优化,最后探究其纯化时最佳咪唑洗脱浓度。结果表明:DTD蛋白成功表达,且其以包涵体的形式存在,在诱导温度37℃、IPTG浓度0.1 mmol/L条件下诱导5 h表达量最高,纯化最佳咪唑洗脱浓度为150 mmol/L。     

溶藻弧菌胞外产物注射赤点石斑鱼后的组织病理学观察

在注射溶藻弧菌胞外产物(ECP)48 h后,石斑鱼Epinephelus akaara出现死亡,临床症状表现为:运动迟缓,体色变深,腹部膨大,腹腔有明显的积水,肝脏出血有花斑,肾脏和脾脏肿大。病理组织切片观察发现:肝细胞坏死,解体,界限模糊,细胞核变形、裂解甚至消失;肝脏出血,肝索中有红细胞浸润,有的红细胞变形甚至破裂;肾小管上皮细胞脱落、坏死;肠粘膜上皮细胞脱落、坏死,微绒毛不整齐,模糊不清,脱落;脾窦和脾索不清晰,分界不清,且在脾窦和脾索中分布着大量的、形态不规则的红细胞。此外,还发现在肝脏、脾脏、肾脏、肠壁肌层、心肌和鳃等组织中存在一种相同结构,该结构有平滑肌环绕,管腔内壁衬以扁平上皮细胞,管腔中含有一团染成紫红色的物质,经推断为小动脉透明样变性,而在正常的组织切片中,均无此结构。     

光催化降解含乐果废水的研究

以半导体TiO2和自制复合型半导体Fe2O3/TiO2为催化剂对光催化降解乐果废水进行了研究.研究表明复合型光催化剂在可见光照下以及紫外光照下的活性都较好;而半导体TiO2只在紫外光照下才能降解乐果.控制催化剂TiO2的用量能提高对乐果的降解率.     

溶藻弧菌asp基因在大肠杆菌中表达活性研究及条件优化

为进一步研究溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶(ASP)蛋白生物学活性和功能,将构建的pET23d-asp在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行纯化分析,并优化表达条件。结果表明:在咪唑洗脱缓冲液浓度为100 mmol/L时,表达的可溶性ASP被大量洗脱,纯化的ASP相对分子质量约为42 000,具有蛋白活性;在诱导温度28℃、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度1 mmol/L及诱导时间16 h时,表达的活性ASP蛋白最多。     

溶藻弧菌胞外产物注射赤点石斑鱼后的组织病理学观察

在注射溶藻弧菌胞外产物（ECP）48h后，石斑鱼Epinephelus akaara出现死亡．临床痱状表现为；运动迟缓．体色变深．腹部膨大．腹腔有明显的积水．肝脏出血有花斑．肾脏和脾脏肿大。病理组织切片观察发现：肝细胞坏死，解体．界限模糊．细胞核变形、裂解甚至消失；肝脏出血．肝索中有红细胞浸润．有的红细胞变形甚至破裂；肾小管上皮细胞脱落、坏死；肠粘膜上皮细胞脱落、坏死．微绒毛不整齐．模糊不清．脱落；脾窦和脾索不清晰．分界不清．且在脾窦和脾索中分布着大量的、形态不规则的红细胞。此外．还发现在肝脏、脾脏、肾脏、肠壁肌层、心肌和鳃等组织中存在一种相同结构，该结构有平滑肌环绕．管腔内壁衬以扁平上皮细胞．管腔中含有一团染成紫红色的物质．经推断为小动脉透明样变性．而在正常的组织切片中．均无此结构。     

Synthesis of three-dimensional agaric-like biomorphic TiO2 by a facile method with Coscinodiscus sp. frustule

The paper aims to expand the application of natural marine algae.Marine diatoms,which have intricate frustule structures,can serve as bio-template for preparing three-dimensional materials.A simple and effective approach to synthesize the corrugated agaric-like biomorphic TiO 2 templated with frustule of Coscinodiscus sp.is reported.In the sol-gel preparation process,the titania-coating on the frustule is prepared through the deposition and condensation with the aid of acetylacetone(acac) as a controlling agent to make the precursor Ti(BuO) 4 hydrolyze slowly.The as-prepared titania-coated frustule and biomorphic TiO 2 is characterized by scanning electron microscopy(SEM) attached with energy dispersive X-ray spectrometer(EMAX) and X-ray diffraction(XRD).The microstructure of the corresponding titania nanoparticles appears to be sphere with the diameters distributed around 10 20 nm.The templating process is repeated for three cycles.Subsequently,the three-dimensional freestanding corrugated agaric-like biomorphic TiO 2 structure is obtained by a selective removal in the NaOH solution.As far as we known,the 3D freestanding corrugated agaric-like biomorphic TiO 2 with greatly increased surface area is obtained for the first time.     

Study on the Fabrication of Ag Doped ZnO-TiO2 Hybrid Photocatalyst with Excellent Photocatalytic Activity and Its Photocatalytic Decarboxylation Performance

Photocatalyst Ag/ZnO-TiO₂ was prepared by template method. The catalyst was characterized by XRD, SEM, and UVvis DRS. Rhodamine B (RhB) and target pollutants were used to evaluate the photocatalytic performance of the catalyst under 40 W UV-lamp. The photocatalytic degradation mechanism of Rhodamine B was discussed through free radical quenching experiment. The experimentalresultsshowthathexagonalZnO-TiO₂canbesuccessfullypreparedbytemplatemethod,andnanoAgparticlesare evenly...     

基于OCO-2卫星观测模拟高精度XCO2的空间分布

本文首次基于OCO-2卫星观测数据,采用高精度曲面建模（High Accuracy Surface Modeling, HASM）的方法来模拟大范围高精度的二氧化碳柱浓度（XCO₂）的空间分布。首先,探讨分析HASM方法应用于模拟OCO-2卫星观测XCO₂的空间分布的可行性。从2014年9月至2015年8月OCO-2观测的12个月的XCO₂数据中,分别随机选取其各个月90%的XCO₂数据用于空间插值,剩余10%作为精度验证点。自验证结果表明,12个月的平均绝对值误差为0.34 ppm。由此可见,HASM适用于模拟OCO-2卫星观测XCO₂的空间分布。然后,采用HASM对OCO-2在2014年9月至2015年8月的各个月观测数据进行空间插值,获取空间分辨率为0.5°×0.5°的各个月均值XCO₂的空间分布,同时基于地基观测TCCON( Total Carbon Column Observing Network)站的XCO₂数据对HASM模拟结果进行交叉验证。验证结果表明,HASM模拟的XCO₂与TCCON站对应观测数据相比,其平均绝对值误差为0.81 ppm,相关系数为0.88。因此,HASM在模拟OCO-2卫星观测的XCO₂空间分布上具有很大的优势。     

加氯水体有机浓集物对团头鲂血液指标的影响

本文对团头鲂 2项血液学指标 (红细胞数 RBC和血红蛋白量 Hb)的正常值进行了研究 ,同时检测了加氯水体中有机浓集物对这 2项指标的影响。结果表明 ,团头鲂血液中 RBC和 Hb的正常值受生长和水温等因素影响 ;在相同的试验条件下 ,加氯水体中的有机浓集物对团头鲂血液 RBC和 Hb有抑制作用 ,抑制率分别为 4 .3 %～ 2 6.0 %和 5.0 %～ 2 2 .5% ,表明此类物质对鱼类正常的生长代谢有一定的危害。     

通海台垂直摆受建筑载荷影响的数值模拟研究

针对通海台垂直摆NS和EW测项自2019-04出现同步趋势转折变化,计算2017~2020年NS和EW测项M₂波潮汐因子。结合监测井等地下介质结构资料,构建通海台沿垂向分层的三维有限元物理模型,定量分析不同岩石参数模型下建筑载荷对通海台NS向及EW向位移影响的差异特征。结果表明：1）2019-04后NS测项N倾变化量达到约2 750 ms,而EW测项E倾变化量达到约580 ms,NS测项趋势变化量显著大于EW测项;2）2017~2020年NS和EW测项M₂波潮汐因子较为稳定,NS测项M₂波潮汐因子在0.7左右波动,EW测项M₂波潮汐因子在0.52左右波动,数据的转折变化未能在潮汐频段引起同步变化;3）位于通海台东北部的医院建筑物载荷在通海台附近产生N向和E向位移加载,与垂直摆NS和EW测项在2019-04后出现的N倾和E倾趋势转折变化较为一致,模拟得到的N向位移量约为E向位移量的3倍。     

Enhancing effect of Fe2+ on the formaldehyde production from trimethylamine N-oxide decomposition catalyzed by the extract of Harpadon nehereus kidney

The effects of Fe2+ on the trimethylamine N-oxide (TMAO) demethylating activity of the Harpadon nehereus kidney extract were studied in this research.The activity of the kidney extract was presumably inhibited by ethylene diamine tetra-acetic acid (EDTA),which indicates that the kidney extract contains an enzyme or enzyme system with metal cations as activator.Activity of the kidney extract was enhanced significantly when Fe2+ was added into the model system in vitro.As the concentration of Fe2+ increased,the decomposing rate of TMAO increased rapidly until TMAO decomposed completely.The activity of the kidney extract was also enhanced by reductant such as ascorbic acid.Inductively Coupled Plasma-Atomic Emission Spectrometry (ICP-AES) was employed to determine the content of total iron in a number of fishery products.Significant positive correlation between the contents of total iron and endogenous formaldehyde (FA) was found,especially in marine products.     

中高渗倾斜地层与水平地层中CO2地质封存的差异性对比

CO2地质封存是减少CO2向大气排放,缓解温室效应的有效手段之一。由于构造和成岩作用,倾斜地层在自然界中普遍存在,研究倾斜地层对CO2封存量及安全性的影响具有实际意义。依托新疆准噶尔盆地阜康凹陷某CO2地质封存示范工程,采用数值模拟方法,分析了中高渗CO2储层地层倾角变化对CO2地质封存过程的影响。结果表明:CO2注入将导致近井区域地层压力显著升高;中高渗倾斜地层与水平地层相比,在地层压力分布、CO2侧向运移距离、CO2注入速率和总封存量等方面均存在明显差异。相比于水平地层,由于地层倾角的存在,倾斜地层压力呈不对称分布,CO2侧向运移距离显著加大。倾斜地层中压力传递和消散过程与水平地层差异显著,受此影响,倾斜地层与水平地层CO2的总注入量差值随时间呈非单调性变化。在注入初期,倾斜地层CO2的总注入量小于水平地层,随着注入时间延长,倾斜地层CO2的总注入量逐渐接近并超过水平地层;注入20年后,相较于水平地层,倾斜地层倾角越大越有助于增加CO2的总注入量,这一研究结果与前人基于低渗倾斜地层的研究结论正好相反。地层倾角的存在会促进CO2向浅部运移,倾角越大,CO2向浅部含水层和大气泄露的风险越大。因此,在CO2地质封存场地选址中,应充分考虑倾斜地层对封存效率及安全性的影响。