凡纳对虾人工繁殖的初步研究

研究了海水比重的变化对凡纳对虾亲虾人工繁殖活动的影响及换水对亲虾交配率的影响。试验采用剪眼柄、强化培育、控光、换水等技术措施 ,将凡纳对虾培育成熟并使之自然交配产卵 ,孵化出无节幼体 ;亲虾的平均产卵量可达 1 6万粒左右 ,卵的受精孵化率可达 80 %以上。结果表明 :适时换水可将亲虾的交配率从 4 6 %提高到 79% ;凡纳对虾人工繁殖的适宜海水相对密度为 1 0 1 6以上。     

不同天然饵料对凡纳滨对虾亲虾性腺发育的影响

分别以双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)、杜氏枪乌贼(Loligo duvaucelii)、近江牡蛎(Ostrea riuularis)及三者的混合饵料(1∶1∶1)培育凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)亲虾至性腺发育成熟,通过分析亲虾性腺发育时间、蜕壳间期、交配率、产卵量、变态率,确定培育亲虾的优质饵料。结果表明:投喂双齿围沙蚕或混合饵料的组与投喂杜氏枪乌贼、近江牡蛎组在产卵量、卵巢发育时间、蜕壳间期、交配率、孵化率、变态率方面具有显著差异(P<0.01)。投喂双齿围沙蚕或混合饵料的亲虾平均产卵量可达21.2×104粒/尾,卵巢平均发育时间为101 h,平均蜕壳间期为218 h,平均交配率可达80%,平均孵化率可达62.99%,平均变态率可达82.44%。表明在凡纳滨对虾亲虾培育的过程中,沙蚕单独或与其他天然饵料混合投喂,较乌贼、牡蛎单独投喂对亲虾性腺发育具有更好的促进效果。     

湛江港区底泥悬浮物对凡纳滨对虾仔虾成活的影响

模拟吹填、疏浚等海上施工过程所产生的底泥悬浮物浓度的变化规律,探讨不同底泥悬浮物浓度下对凡纳滨对虾仔虾成活影响。结果表明:海水中底泥悬浮物浓度超过10mg/L,持续时间超过12h时,将对凡纳滨对虾成活率产生影响,随着悬浮物实验浓度的递加,仔虾的死亡率从13.33%增至96.67%;超过80mg/L,且持续时间超过48h,将对凡纳滨对虾产生严重影响,甚至导致全部仔虾的死亡;悬浮物对凡纳滨对虾的12h、24h、36h和48h半致死量(LC50)分别为54.56、40.29、25.8和19.18mg/L。     

蜕壳素对凡纳滨对虾生长及表观消化率的影响

研究了外源性蜕皮激素对凡纳滨对虾生长和表观消化率的影响，实验时在基础饲料中分别添加0．1％、0．2％、0．4％的两种市售蜕壳素产品，制成6种外源性脱壳素配合饲料，不添加的基础饲料作为对照组，试验在260L玻璃钢循环水养殖系统中，每个剂量组设3个重复，8周生长试验结果表明：市售蜕壳素产品能有效地促进对虾生长，试验结束时，试验组虾体增重分别较对照组增加16．8％、7．52％、5．9％、11．4％、29．07％、16．53％，但是凡纳滨对虾对饲料粗蛋白的表观消化率没有明显地提高，凡纳滨对虾对脂肪的表观消化率较低。推算凡纳滨对虾饲料中最佳蜕皮酮添加量为60mg/kg。     

不同海水相对密度对斑节对虾胚胎发育和无节幼体变态的影响

斑节对虾俗称草虾,具有个体大,生长快,食性杂,适盐范围广,耐干能力强,经济价值高等特点而深受广大养殖者的欢迎,在我国南方沿海地区广泛养殖。目前,斑节对虾的人工育苗技术已过关,但由于种种原因,大部分的对虾育苗场都依靠购买无节幼体进行育苗,由于不同海区海水相对密度有所差别,有时造成无节幼体变态率不高,即使能变态而幼体活力差,育苗存活率低。另一方面,低海水相对密度对斑节对虾培育和产卵孵化影响较大,探索适宜的孵化相对密度是十分必要的,为此,我们做了这方面的试验,供斑节对虾育苗生产者参考。１　材料和方法１…     

鱼塘产斑节对虾（Penaeus monodon）催熟繁殖技术研究

以综合催熟措施和移植精荚手术相结合的技术方法、解决了鱼塘产斑节对虾催熟效应期长,产卵率低,易蜕壳失去精荚等难题。使用２７８尾雌虾,催熟率达９０％以上,在４０ｄ内共产卵６０８层次,卵量１８５３０万粒,孵出无节幼体１１９９８万尾,平均孵化率６４．７％,平均每尾雌虾孵出无节幼体４３．１万尾,育成商品虾苗１０２８．５万尾,育苗平均成活率１３．６％,试养成活率５７．１％。     

植酸酶对凡纳滨对虾生长性能和体成分的影响

在凡纳滨对虾饲料中添加不同量微生物植酸酶（0，500，1000，2000U／k），观察虾的存活率、增重率、饲料系数及虾体和虾壳成分，研究饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾生长性能的影响。结果表明：饲养8周后，饲料中添加500-2000U／kg植酸酶对凡纳滨对虾增重率、存活率和饲料利用元显著影响（P〉0．05）；植酸酶添加各组与对照组虾体的水分、粗蛋白、脂肪、灰分、总钙和总磷含量差异不显著；虾壳中粗灰分和钙含量在500和1000U／k组显著高于对照组和2000U／kg组（P〈0．05），虾壳磷含量在各饲料组间差异不显著。血清磷浓度在对照组和2000U／kg组显著高于500U／kg组（P〈0．05），血清钙浓度在组间差异不显著，血清碱性磷酸酶活性以对照组最高，显著高于500和1000U／kg组。结果说明，在特定试验条件下，饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾幼虾的虾壳和血清成分有显著影响（P〈0．05），对幼虾生长性能影响不显著（P〉0．05）。     

眼柄粗提物对凡纳滨对虾性分化的影响

采用生化方法制备凡纳滨对虾[Litopenaeus(Penaeus)vannamei)]眼柄粗提物,用活体注射法研究不同粗提物剂量对去眼柄凡纳滨对虾卵母细胞直径大小的影响,以检验其性腺抑制素(Gonadinhibiting hormone,GIH)的生物活性;在凡纳滨对虾仔虾后17、22和27 d,分别以不同浓度眼柄粗提物浸泡24 h,结果显示:除0.001个眼柄/mL的GIH浓度外,0.01、0.1和1个眼柄/mL组均显著降低凡纳滨对虾卵母细胞直径(P﹤0.05);浸泡处理后,仔虾后17 d GIH处理组凡纳滨对虾雌性率达70.1%～80.1%;仔虾后22 d GIH处理组雌性率达65.8%～71.7%,各浓度GIH处理组雌性率比对照组(雌雄比例约为1:1)显著提高(P﹤0.05);仔虾后27 d,0.01和1个眼柄/mL处理组雌性率(约58%)略高于对照组,但0.1个眼柄/mL处理组雌性率(73.1%)与对照组相比显著提高(P﹤0.05)。结果表明较低浓度的眼柄粗提物可明显诱导凡纳滨对虾雌性化,在仔虾后22 d前处理效果最佳。     

大黄对凡纳滨对虾生长和非特异性免疫指标的影响

在凡纳滨对虾饲料中分别添加大黄0、0.5、1.0、5.0、10.0和20.0g/kg,研究大黄对凡纳滨对虾(初始体重为0.34±0.004g)生长及非特异性免疫指标的影响。结果表明,大黄对凡纳滨对虾成活率、增重率、特定生长率、饲料系数、蛋白质效率和蛋白质累积率的影响不显著(P>0.05),对全虾和尾肌肉的灰分、脂肪和粗蛋白含量影响显著,全虾的粗蛋白和粗脂肪含量以1.0g/kg组最高(P<0.05),对凡纳滨对虾血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶以及血清总蛋白量等的影响显著,溶菌酶活性以1.0g/kg组最高(P<0.05);细菌感染实验中以1.0g/kg组存活率最高(P<0.05)。以非特异性免疫反应指标及感染实验存活率为指标,凡纳滨对虾饲料中大黄的适宜添加量为1.0g/kg。     

植酸酶对凡纳滨对虾生长性能和体成分的影响

在凡纳滨对虾饲料中添加不同量微生物植酸酶(0,500,1000,2000 U/kg),观察虾的存活率、增重率、饲料系数及虾体和虾壳成分,研究饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾生长性能的影响。结果表明:饲养8周后,饲料中添加500~2000 U/kg植酸酶对凡纳滨对虾增重率、存活率和饲料利用无显著影响(P>0.05);植酸酶添加各组与对照组虾体的水分、粗蛋白、脂肪、灰分、总钙和总磷含量差异不显著;虾壳中粗灰分和钙含量在500和1000 U/kg组显著高于对照组和2000 U/kg组(P<0.05),虾壳磷含量在各饲料组间差异不显著。血清磷浓度在对照组和2000 U/kg组显著高于500 U/kg组(P<0.05),血清钙浓度在组间差异不显著,血清碱性磷酸酶活性以对照组最高,显著高于500和1000 U/kg组。结果说明,在特定试验条件下,饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾幼虾的虾壳和血清成分有显著影响(P<0.05),对幼虾生长性能影响不显著(P>0.05)。     

波吉卵囊藻对凡纳滨对虾生长、抗氧化及肠道菌群的影响

【目的】研究定向培养波吉卵囊藻（Oocystis borgei）的养殖水体对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）早期生长性能、抗氧化能力及肠道微生物的影响,为波吉卵囊藻在对虾健康养殖中的应用提供基础。【方法】以消毒海水中接种波吉卵囊藻为实验组,以未接种的为对照组进行凡纳滨对虾养殖。将凡纳滨对虾幼虾随机分配到实验组及对照组养殖桶中,养殖20 d后测定对虾生长性能指标,解剖取肝胰腺和鳃测定抗氧化指标,取肠道进行微生物多样性测定和分析。【结果】1）定培波吉卵囊藻对凡纳滨对虾增重率和特定生长率无显著影响（P> 0.05）,但显著提高了对虾的肝体比（P <0.05）;2）与对照组相比,实验组对虾肝胰腺和鳃中的超氧化物歧化酶（SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC）极显著提高（P <0.01）,鳃中的谷胱甘肽（GSH）和酸性磷酸酶（ACP）活性也有显著升高（P <0.05）;3）与对照组相比,实验组对虾肠道菌群的Shannon和Chao 1指数显著降低（P <0.05）,肠道中变形菌门丰度显著降低（P <0.05）,有益菌红杆菌科丰度增加,有害...     

虾类微量元素含量的主成分分析

应用主成分分析法对湛江几种养殖对虾和海捕天然对虾的微量元素的含量进行综合评价。结果表明:虾体中微量元素含量均衡;综合排名依次为野生斑节对虾、野生凡纳滨对虾、养殖斑节对虾、养殖凡纳滨对虾,两种野生对虾的综合排名均高于养殖对虾;野生斑节对虾综合得分为1.6708,微量元素含量最均衡,营养价值最高,养殖凡纳滨对虾营养价值最低,综合得分为-1.20943。     

高蛋白棉粕替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能、非特异性免疫指标及抗病力的影响

【目的】研究高蛋白棉粕(High-protein cottonseed meal,HPCM)替代鱼粉对凡纳滨对虾幼虾生长性能、非特异性免疫酶活性及抗病力的影响。【方法】在基础饲料中分别添加质量分数0%、6.25%、9.375%、12.5%、18.75%的HPCM,分别替代饲料中质量分数0%、20%、30%、40%、50%和60%的鱼粉,配制6种等氮等能饲料,投喂初始体质量(0.38±0.01)g的健康凡纳滨对虾8周。【结果】HPCM替代鱼粉对凡纳滨对虾增重率、特定生长率、成活率、饲料系数及蛋白质效率影响均有统计学意义(P0.05),30%和40%替代组增重率和特定生长率最高,与对照组差异有统计学意义(P0.05),饲料系数最低,与对照组差异有统计学意义(P0.05),替代水平高于40%替代组时,蛋白质效率降低(P0.05);对凡纳滨对虾全虾体成分含量影响均有统计学意义(P0.05),随替代水平的增加,全虾中的水分、粗脂肪含量有升高趋势,粗蛋白含量呈先升后降趋势,粗灰分有降低趋势(P0.05);HPCM替代鱼粉对血清酚氧化酶(PO)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性以及肝胰脏中丙二醛(MDA)含量影响有统计学意义(P0.05);攻毒试验表明,随着HPCM替代鱼粉比例及攻毒时间的增加,凡纳滨对虾存活率逐渐降低(P0.05)。【结论】以对虾增重率为判据,在鱼粉质量分数为25%的凡纳滨对虾基础饲料中HPCM替代鱼粉的适宜比例为37.44%。     

4种斑节对虾亲虾饵料蛋白质的营养价值评价

分析了沙蚕、缢蛏、拖鱿鱼胴体、花蟹蟹肉以及斑节对虾亲虾肌肉和成熟卵巢基本营养成分、氨基酸组成。通过计算4种饵料与斑节对虾亲虾肌肉和成熟卵巢的必需氨基酸比率（A／E）的比值和必需氨基酸指数（EAAI），评价4种斑节对虾亲虾饵料蛋白质的营养价值。结果表明：沙蚕、缢蛏、拖鱿鱼胴体、花蟹蟹肉以及斑节对虾（Penaeus monodon）亲虾肌肉和成熟卵巢中的粗蛋白质量分数分别为9．18％、8．14％、12．10％、17．00％、21．90％、18．60％；总氨基酸质量分数分别为7．30％、7．47％、11．70％、14．80％、19．40％、14．60％。以斑节对虾亲虾肌肉蛋白为参比，沙蚕、缢蛏、拖鱿鱼胴体以及花蟹蟹肉的必需氨基酸指数分别0．93、0．94、0．94、0．97；以斑节对虾亲虾成熟卵巢蛋白为参比，沙蚕、缢蛏、拖鱿鱼胴体以及花蟹蟹肉的必需氨基酸指数分别0．95、0．93、0．88、0．84。这说明4种亲虾饵料相对斑节对虾亲虾而言是一种优质蛋白质，能够满足亲虾蛋白需求。不过，精氨酸、组氨酸等必需氨基酸．不能完全满足亲虾需求。     

紫蛤生态的观察

对紫蛤Soletellina violacea Lamarck的生活环境、生活习性与分布等进行了观察，并研究了相对密度对紫蛤成活率的影响。结果表明，紫蛤生活在中低潮区至潮下带15-30cm的细沙底，自然分布海区的水温变化范围为9-33℃，pH值为6．9-8．6，海水相对密度的适宜范围为1．004—1．029，最适相对密度范围为1．005—1．027，以有机碎屑和硅藻为主要食料。雌雄异体，一年有二次繁殖期。鲜出肉率为59．99％，24h60℃烘干后的干出肉率为11．75％。     

抗菌肽对凡纳滨对虾生长和机体免疫的影响

基础饲料(对照组)中添加10g/kg抗菌肽制剂喂养体重0.10±0.01g、体长2.17±0.11cm的凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)30d,进行10d的水浴攻毒(鳗弧菌10~8/mL),探讨饲料中添加抗菌肽对凡纳滨虾生长、成活率、免疫保护率,以及肌肉中溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性、总抗氧化能力的影响。结果表明:饲料中添加抗菌肽可显著提高凡纳滨对虾相对增重率、成活率和对致病菌的免疫保护率(P<0.05),但对饲料系数无显著影响(P>0.05);未受外界微生物刺激时,饲料中添加抗菌肽对凡纳滨对虾总抗氧化能力有促进作用(P<0.05),受外界微生物刺激后,饲料中添加抗菌肽喂养凡纳滨对虾可提高对虾超氧化物歧化酶活性(P<0.05)和总抗氧化能力(P<0.01)。因此饲料中添加抗菌肽喂养凡纳滨对虾可提高其机体非特异性免疫。     

凡纳滨对虾miRNA-184克隆与表达分析

【目的】研究凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)miRNA-184 [microRNA-184(miR-184),记作LvmiR-184]在健康虾及染病虾中的表达,探讨其免疫功能。【方法】用茎环法克隆鉴定凡纳滨对虾LvmiR-184,通过荧光定量PCR检测LvmiR-184在对虾血淋巴、肝胰腺、鳃、肌肉、心脏、胃、肠和眼柄等8个组织中的分布。对凡纳滨对虾注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),检测LvmiR-184不同时间点的响应变化。对感染副溶血弧菌的凡纳滨对虾分别注射0.3、3.0和30.0 ng的mi R-184模拟物和抑制物,检测不同时间点对虾血细胞凋亡率。【结果与结论】LvmiR-184在所有组织中均有表达,在胃中表达量最高,其次是肌肉,鳃表达量最低。注射副溶血弧菌后1.5 h,LvmiR-184表达量显著上调;在24 h达到峰值,较对照组高8.25倍;对照组则维持在较低的水平。模拟物、抑制物注射量为30 ng时对虾血细胞凋亡率差异有统计学意义(P 0.05);与对照组凋亡率相比,注射模拟物6 h后提高62%。LvmiR-184可调控凡纳滨对虾的血细胞凋亡。     

凡纳滨对虾野田村病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立快速检测凡纳滨对虾野田村病毒的RT-PCR方法。【方法】根据GenBank中获得的凡纳滨对虾野田村病毒的基因序列,应用Oligo6.0软件设计合成1对特异性扩增引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立快速检测凡纳滨对虾野田村病毒的RT-PCR方法。用该方法对感染野田村病毒的凡纳滨对虾进行RT-PCR检测。【结果】RT-PCR可扩增出与设计相符的413 bp的特异性目的条带,而对白斑症病毒(WSSV)阳性虾、对虾杆状病毒(BP)阳性虾、传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)阳性虾、肝胰腺细小病毒(HPV)阳性虾、黄头病毒(YHV)阳性虾、传染性肌肉坏死病毒(IMNV)阳性虾、桃拉病毒(TSV)阳性虾和健康虾的扩增结果均为阴性。测序比对结果表明,该方法检测结果准确,最低可检测出约100 fg/mL的野田村病毒重组质粒DNA;用该方法对从福建、广东、海南、广西、江苏、浙江、山东等地的386份临床样品进行RT-PCR检测,共检出野田村病毒阳性样品64份。【结论】该方法可用于凡纳滨对虾野田村病毒的快速检测。     

溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾虾青素、免疫指标及保护率的影响

从溶藻弧菌中提取肽聚糖,以0.05、0.1、0.15 mg/mL 3种浓度为注射凡纳滨对虾后,测定血淋巴中的血细胞数目、酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合成酶(NOS)的活性和虾青素的含量,探讨溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾虾青素含量、免疫指标、免疫保护率的影响。结果表明:注射不同质量浓度的溶藻弧菌肽聚糖都对血清中的血细胞数目、PO、SOD、NOS活性影响显著(p值﹤0.05),对虾青素的含量影响极显著(p值﹤0.01);虾青素的含量与血细胞数目、PO、NOS活性变化趋势无明显的相似性,与SOD活性变化有相似的变化趋势;0.05 mg/mL组的免疫保护率为40%,0.1 mg/mL组为53.33%,0.15 mg/mL组为66.67%。溶藻弧菌肽聚糖可有效地增强凡纳滨对虾非特异免疫力,提高对溶藻弧菌的抗病力,虾青素含量与SOD活性的高低变化趋势相似。     

凡纳滨对虾烂尾病病原的分离鉴定及药敏分析

【目的】研究广东湛江地区凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)烂尾病主要病原及其药敏特征。【方法】从对虾病灶部位分离纯化细菌,用2株代表菌株对健康虾进行创伤浸浴感染试验,分析菌株形态特征、生理生化特征以及16S rRNA和HSP60基因序列,以哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)和坎氏弧菌(V. campbelli)溶血素基因特异引物扩增菌株基因组DNA,通过纸片扩散法测试菌株对17种药物的敏感性。【结果】从患病亲虾和养殖对虾分别分离获得编号2018B22和2018MZ1的代表菌,两株菌16Sr RNA和HSP60基因序列均与哈维氏弧菌最相似,且均可被哈维氏弧菌溶血素基因引物特异扩增,表型特征亦与哈维氏弧菌相近;两株菌均可引起凡纳滨对虾烂尾病,其中菌株2018B22的致病力较2018MZ1更强,而后者的耐药谱更广。【结论】湛江地区凡纳滨对虾烂尾病主要病原为哈维氏弧菌。