对虾病毒病暴发前期病毒和弧菌相互作用关系

模拟天然继发感染研究对虾病毒病暴发前期病毒和弧菌的关系。结果显示 ,弧菌先感染再病毒感染组比病毒先感染再弧菌感染组死亡率高、死亡快、生长慢、免疫功能低下。表明弧菌的潜伏感染对病毒的增殖有利 ,而病毒的潜伏感染对弧菌的继发感染没有明显的促进作用。说明病毒性流行病的暴发前期可能是由弧菌先感染 ,使对虾体内环境发生变化而助长病毒感染 ,其中对虾的免疫力下降是关键     

溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用

从患病凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内提取白斑综合征病毒(WSSV),PCR证实WSSV毒性,将病毒粗提液稀释10-2、10-3、10-4和10-5倍,攻毒实验表明,最佳攻毒剂量为10-4倍稀释液。对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05、0.10、0.15 mg/m L的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)肽聚糖,免疫24 h后感染WSSV,测定其免疫保护率和肝胰腺的免疫学指标,探讨溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾抗WSSV的影响。结果表明:对虾的保护率随着肽聚糖的浓度增大而增大,与对照组相比,0.05、0.10、0.15 mg/m L组的保护率分别为36.67%、46.67%、56.67%;实验组凡纳滨对虾肝胰腺中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合成酶(NOS)活力与对照组相比的差异有统计学意义(P0.01)。溶藻弧菌肽聚糖可有效增强凡纳滨对虾自身的非特殊性免疫能力,提高抗WSSV的能力。     

凡纳滨对虾和斑节对虾对WSSV敏感性的比较

用6.0×104拷贝、1.2×104拷贝和6.0×103拷贝3种剂量白斑综合症病毒(WSSV)对凡纳滨对虾和斑节对虾进行人工注射感染,比较了两种对虾对WSSV敏感性的差异。结果表明,凡纳滨对虾死亡时间随病毒剂量降低而延长,斑节对虾死亡时间没有明显差异;随病毒剂量的降低,凡纳滨对虾人工注射感染后病毒复制高峰时间显著延长,斑节对虾感染后病毒复制高峰时间相同,WSSV在凡纳滨对虾体内比在斑节对虾体内复制慢。对虾携带WSSV数量最低为3.3×107拷贝.g-1,最高为4.3×108拷贝.g-1。凡纳滨对虾比斑节对虾对WSSV的抵抗性更强。     

溶藻弧菌肽聚糖和vp28-siRNA对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用

对感染白斑综合征病毒(WSSV)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05和0.10μg/μL的vp28-si RNA,干扰效果实验表明,si RNA最佳浓度为0.10μg/μL。凡纳滨对虾感染WSSV 24 h时注射0.10μg/μL的vp28-si RNA,检测免疫后不同时间点的干扰效果。结果表明:在注射vp28-si RNA 6 h后,实验组与对照组WSSV病毒拷贝数差异有统计学意义(P0.05);在48 h时实验组病毒拷贝数急剧下降,对照组则保持较高水平,可较好干扰WSSV病毒复制,干扰效果持续120 h,对凡纳滨对虾的保护率为40%。凡纳滨对虾用0.10 mg/m L肽聚糖(Peptidoglycan)免疫24 h后感染WSSV,检测6、12、24 h注射vp28-si RNA的保护率。结果显示:6 h注射组的保护率为80%,12 h注射组为63.33%,24 h注射组为56.67%。凡纳滨对虾在肽聚糖和vp28-si RNA作用后,可增加其对WSSV抗感染作用,降低死亡率,干扰时间越早,对对虾的保护率越高。     

溶藻弧菌疫苗对凡纳滨对虾免疫功能的影响

应用溶藻弧菌疫苗饲喂凡纳滨对虾,测定了弧菌疫苗对凡纳滨对虾免疫指标的影响以及 疫苗的免疫保护作用。结果发现,投喂弧菌疫苗后,溶菌活力在12～20d内迅速增强,在20d时 活力达到最高,VF1组高于VF2和VF3组,但VF2和VF3之间差异不显著;凝集效价在投喂后的 第8天开始升高,在14d时达到最高,实验组的凝集活力均高于对照组,但实验组之间无明显的差 异;而超氧化物歧化酶(SOD)活力和溶血活力变化不明显。以每克饲料含疫苗细胞1.0×109、 1.0×108和1.0×107个的浓度投喂,对凡纳滨对虾的免疫保护率分别为66.7%、46.7%和13.3%。 可见弧菌疫苗对凡纳滨对虾的免疫保护率随疫苗浓度的增大而升高。     

溶藻弧菌对凡纳滨对虾血清中一氧化氮及氧自由基的影响

对凡纳滨对虾注射浓度为1×105、1×106、1×107mL-1的溶藻弧菌悬液,在注射后4、12、24、48、72和120 h于腹血窦取血,测定其血清中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量,以及一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物岐化酶(SOD)活力。结果表明,注射溶藻弧菌后,凡纳滨对虾血清中NO含量及NOS活力显著高于对照组,且NOS活力最大值出现时间较NO早;而SOD活力先升高后下降,MDA含量在SOD活力开始下降后逐渐升高,说明一氧化氮系统对凡纳滨对虾感染的溶藻弧菌有清除作用,并能在一定程度上对损伤过程中生成的氧自由基产生作用。     

斑节对虾白斑综合症杆状病毒感染的实验模式

在建立斑节对虾实验室养殖模式的基础上．对野外采集的有白斑综合症病毒(WSSV)病典型症状的斑节对虾初步纯化其病毒．并进行WSSV的PCR检测，得到WSSV的感染用样品。对健康斑节对虾分别进行浸浴感染，投喂感染和注射感染。对感染死亡个体进行WSSA的PCR检测和细菌检测，证实WSSV感染性和致死性。浸浴感染、投喂感染和注射感染的感染量分别为4mL／L、0．2g／10g虾体、1／2稀释液0．05mL／10g虾体，死亡开始时间分别为16d、42h、28h，三种感染模式最终死亡率100％．从开始死亡到全部死亡延续时间分别为15d、82h、44h。     

斑节对虾白斑综合症杆状病毒感染的实验模式

在建立斑节对虾实验室养殖模式的基础上，对野外采集的有白斑综合症病毒（WSSV）病典型症状的斑节对虾初步纯化其病毒，并进行WSSV的PCR检测，得到WSSV的感染用样品。对健康斑节对虾分别进行浸浴感染，投喂感染和注射感染。对感染死亡个体进行WSSA的PCR检测和细菌检测，证实WSSV感染性和致死性。浸浴感染、投喂感染和注射感染的感染量分别为4mL/L、0.2g/10g虾体、1/2稀释液0.05mL/10g虾体，死亡开始时间分别为16d、42h、28h，三种感染模式最终死亡率100%，从开始死亡到全部死亡延续时间分别为15d、82h、44h。     

溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾虾青素、免疫指标及保护率的影响

从溶藻弧菌中提取肽聚糖,以0.05、0.1、0.15 mg/mL 3种浓度为注射凡纳滨对虾后,测定血淋巴中的血细胞数目、酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合成酶(NOS)的活性和虾青素的含量,探讨溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾虾青素含量、免疫指标、免疫保护率的影响。结果表明:注射不同质量浓度的溶藻弧菌肽聚糖都对血清中的血细胞数目、PO、SOD、NOS活性影响显著(p值﹤0.05),对虾青素的含量影响极显著(p值﹤0.01);虾青素的含量与血细胞数目、PO、NOS活性变化趋势无明显的相似性,与SOD活性变化有相似的变化趋势;0.05 mg/mL组的免疫保护率为40%,0.1 mg/mL组为53.33%,0.15 mg/mL组为66.67%。溶藻弧菌肽聚糖可有效地增强凡纳滨对虾非特异免疫力,提高对溶藻弧菌的抗病力,虾青素含量与SOD活性的高低变化趋势相似。     

对虾白斑症病毒（WSSV）部分克隆片段的序列测定及PCR扩增

对克隆的ＷＳＳＶ基因组Ｖａｂ Ｉ １．８ｋｂ片段进行序列测定,根据所测定的核酸序列,通过计算机软件分析,设计出一对ＰＣＲ引物。所设计的ＰＣＲ引物能从纯化ＷＳＳＶ及患白斑症的对虾组织中扩增出长为９２１ｂｐ的目的ＤＮＡ片段,并且能检测出０．２～０．４μｇ病虾肌肉组织中的ＷＳＳＶ。健康对虾、感染ＭＢＶ的斑节对虾仔及ＳＩＮＰＶ的扩增结果均为阴性。表明所建立的ＷＳＳＶ ＰＣＲ检测法灵敏而且特异。     

对虾白斑症病毒(WSSV)部分克隆片段的序列测定及PCR扩增

对克隆的 WSSV基因组 Xba 1.8kb片段进行序列测定 ,根据所测定的核酸序列 ,通过计算机软件分析 ,设计出一对 PCR引物。所设计的 PCR引物能从纯化 WSSV及患白斑症的对虾组织中扩增出长为 92 1bp的目的 DNA片段 ,并且能检测出 0 .2～ 0 .4μg病虾肌肉组织中的 WSSV。健康对虾、感染MBV的斑节对虾仔虾及 SINPV的扩增结果均为阴性。表明所建立的 WSSV PCR检测法灵敏而且特异。     

“克毒丹”和“虾丹特”提高斑节对虾成苗率的初步探讨

１９９３年,全球虾病大流行,使虾产量下降１２％,而我国虾病则从南到北发生了空前的大暴发,致使年产量大幅度地下降了一半以上［１］,因而养虾业遭受惨重损失。据分析,这次虾病流行的原因主要有：工农业和生活污水污染沿海,使养虾业直接受害;虾池老化,自净能力较差;对虾育苗滥用抗菌素,致病菌因而获得抗药性;更为严重的是,有多种病毒性病原侵害对虾苗种和成虾,致使对虾的抗病机能减弱,当减弱到一定的程度时,加上环境、水质、营养和细菌等不良因素,使虾病暴发,在短时间内遭受毁灭性的打击。目前,已发现的对虾病毒共１０余…     

凡纳滨对虾野田村病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立快速检测凡纳滨对虾野田村病毒的RT-PCR方法。【方法】根据GenBank中获得的凡纳滨对虾野田村病毒的基因序列,应用Oligo6.0软件设计合成1对特异性扩增引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立快速检测凡纳滨对虾野田村病毒的RT-PCR方法。用该方法对感染野田村病毒的凡纳滨对虾进行RT-PCR检测。【结果】RT-PCR可扩增出与设计相符的413 bp的特异性目的条带,而对白斑症病毒(WSSV)阳性虾、对虾杆状病毒(BP)阳性虾、传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)阳性虾、肝胰腺细小病毒(HPV)阳性虾、黄头病毒(YHV)阳性虾、传染性肌肉坏死病毒(IMNV)阳性虾、桃拉病毒(TSV)阳性虾和健康虾的扩增结果均为阴性。测序比对结果表明,该方法检测结果准确,最低可检测出约100 fg/mL的野田村病毒重组质粒DNA;用该方法对从福建、广东、海南、广西、江苏、浙江、山东等地的386份临床样品进行RT-PCR检测,共检出野田村病毒阳性样品64份。【结论】该方法可用于凡纳滨对虾野田村病毒的快速检测。     

北部湾野生长毛明对虾(Fenneropenaeus penicillatus)体重和形态性状的关系

测量北部湾86尾野生长毛明对虾体长、头胸甲长、胸高、胸宽、第一腹节宽、第一腹节高、第三腹节高、额剑上刺数、额剑下刺数和体重等10个性状,采用逐步回归法分析9个性状和体重的关系。结果表明:体长、头胸甲长、胸高、第一腹节宽、第三腹节高和额剑下刺数6个性状与体重的相关系数达到了极显著水平(P<0.01),在单独的决定系数中:头胸甲长对体重的决定系数(14.44%)最大,共同决定系数中,体长与头胸甲长最大为21.13%。通过分析,建立长毛明对虾的体长、头胸甲长、胸高、第一腹节宽、第三腹节高、额剑下刺数对体重的最优理想回归方程,为长毛明对虾选育种和保种提供理想的测度指标。