虎纹蛙性腺发育的细胞学研究

通过组织切片对虎纹蛙性腺发育过程进行研究，根据其细胞学特征，雌性虎纹蛙的性腺发育过程分为卵原细胞期、初级卵泡期、生长卵泡期和成熟卵泡期；在第一个性周期内，从卵原细胞到成熟卵泡整个发育阶段需要2a。雄性虎纹蛙的生殖细胞成簇排列，性腺发育分为精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞以及精子形成5个阶段；性成熟期为1a。并报道了虎纹蛙的镶嵌型性腺。     

以江蓠为栖息环境养殖的双齿围沙蚕性腺发育

研究以江蓠为养殖基质的双齿围沙蚕的配子发生及性腺发育。结果表明:1)根据双齿围沙蚕卵细胞形态特征、内部结构、卵径大小,卵母细胞的发生可划分为第Ⅰ时相(卵原细胞)、第Ⅱ时相(小生长期初级卵母细胞)、第Ⅲ时相(大生长期初级卵母细胞,卵黄形成前期、卵黄形成中期、卵黄形成后期)和第Ⅳ时相(成熟卵母细胞,胶膜形成前期、胶膜形成后期)等4时相;根据各时相卵子的数量变化及体腔中其他结构的形态变化,将雌性性腺分为Ⅰ期卵巢、Ⅱ卵巢、Ⅲ卵巢、Ⅳ卵巢和Ⅴ期卵巢等5个阶段。2)根据双齿围沙蚕体腔内精母细胞的大小、形态和所处的位置,将双齿围沙蚕的精子发生划分为精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子;根据各时相精子的形态和数量变化以及体腔中其他组织器官的形态变化,将双齿围沙蚕的雄性性腺划分为Ⅰ期精巢、Ⅱ期精巢、Ⅲ期精巢、Ⅳ期精巢和V期精巢等5个阶段。3)Ⅰ-Ⅳ期的性腺主要包含对应时相的生殖细胞,同时,也存在有少量其他时相的生殖细胞,生殖细胞的发育速度并不完全一致。     

扁平钳蛤性腺发育的组织学研究

通过石蜡切片对扁平钳蛤进行性腺发育组织学观察,结果表明,扁平钳蛤雌雄性腺的发育都可分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期5个时期。增殖期为滤泡形成期,出现了精原细胞和卵原细胞,贴近滤泡壁分布;在生长期,性腺面积、滤泡数目和生殖细胞数目都明显增大,卵母细胞和精母细胞形成;成熟期雌性滤泡内充满卵细胞,其生发泡透亮,核仁清晰可见,雄性滤泡内充满着蓝紫色的精子,精子尾部聚集在滤泡中央,呈鲜红色;排放期滤泡破损,卵细胞和精子排放,性腺面积减小;休止期滤泡腔萎缩,基本无生殖细胞残留。扁平钳蛤生殖周期为一年,5—6月处于性腺发育增殖期;7—10月性腺进入繁殖期,包括生长期、成熟期和排放期;11月进入休止期;其他月份性腺基本不发育。     

红鳍笛鲷(Lutjanus erythopterus)精巢发育的组织学研究

为掌握红鳍笛鲷的繁殖特性,通过石蜡切片、苏木精-伊红染色对红笛鲷精巢的发育进行组织学研究。结果表明,红鳍笛鲷的精巢属于叶状精巢,精子发生过程与其他脊椎动物一样,包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细、精子细胞和精子形成。精巢的生长发育过程的组织学结构共分为5期:3~4月龄精巢为第Ⅰ期精巢,精原细胞无定向分散在结缔组织之间;5~6月龄精巢为第Ⅱ期精巢,精原细胞成束分布,形成曲细精管的雏形;6~9月龄精巢为第Ⅲ期精巢,曲细精管出现管腔,曲细精管的管壁由精原细胞和大量初级精母细胞和次级精母细胞及少数精子细胞构成;10月龄精巢为第Ⅳ期精巢,曲细精管内除了精原细胞和初级精母细胞外、还形成了次级精母细胞和精子细胞,同时,管腔中出现极少量的精子;16月龄精巢为第Ⅴ期精巢,外观呈椭圆形的圆柱状,曲细精管的管腔和壶腹中充满成熟的精子。     

企鹅珍珠贝生殖细胞的发生

对不同发育阶段的企鹅珍珠贝[Ptedapenguin(Rding)]的性腺结构、生殖细胞结构与分布进行组织学观察,描述精/卵子发生过程中各级精/卵细胞的特征。结果表明:根据雌性生殖细胞形态和卵黄的变化特点,卵子发生经历卵原细胞、无卵黄初级卵母细胞、卵黄形成期卵母细胞及成熟卵子阶段;依据雄性生殖细胞大小和细胞核形态变化,精子发生经历精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子阶段,其中精原细胞存在形态上有差异的A型和B型两种类型。此外还观察到企鹅珍珠贝的性别转化现象。     

加温养殖下乌龟精巢发育的研究

通过组织切片对加温养殖下乌龟精巢的发育过程进行了研究,根据其组织学和细胞学特征,乌龟的精巢发育过程可分为精原细胞期、初级精母细胞期、补级精母细胞期、次级精母细胞期、精子细胞期以及精子5个阶段。5种生精细胞在曲细精管内有规则的排列,排列方式与哺乳动物雄性生殖细胞排列方式相似,即从基膜到管腔各级生精细胞按成熟等依次排列,雄性乌龟的性成熟年龄为1－2a,比传统养殖乌龟的性成熟年龄缩短了3－4a。     

环沟格特哈(Katelysia rimularis)的生殖周期

周年采集环沟格特蛤（Katelysiarimularis）分别测定生长指标（总重、软体部重、性腺重、肝重和软体部干重等）并用组织切片观察性腺发育的状况，以确定性腺发育的周期和时间。组织的光镜研究说明环沟格特蛤雌雄性腺发育均可分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期。在厦门吴冠镇环沟格特蛤1月开始其性腺发育,3月进入生长期，5～6月成熟，5～11月都有产卵，每年7月11月各有一次排卵高峰期。     

加温养殖下乌龟精巢发育的研究

通过组织切片对加温养殖下乌龟精巢的发育过程进行了研究 ,根据其组织学和细胞学特征 ,乌龟的精巢发育过程可分为精原细胞期、初级精母细胞期、次级精母细胞期、精子细胞期以及精子 5个阶段。 5种生精细胞在曲细精管内有规则的排列 ,排列方式与哺乳动物雄性生殖细胞排列方式相似 ,即从基膜到管腔各级生精细胞按成熟等级依次排列 ,雄性乌龟的性成熟年龄为 1～ 2 a,比传统养殖乌龟的性成熟年龄缩短了 3～ 4 a。     

环沟格特蛤（Katelysia rimularis）的生殖周期

周年采集环沟格特蛤分别测定生长指标并用组织切片观察性腺发育的状况，以确定性腺发育的周期和时间。组织的光镜研究说明环沟格特蛤雌雄性腺发育均可分为增殖期，生长期，成熟期，排放期和休止期。     

驼背鲈引种驯养及人工诱导性腺发育和繁殖

为探讨通过人工诱导获得驼背鲈成熟亲鱼的途径,在室内水池进行砣背鲈驯养研究;用口服和注射性激素、控温、控光、营养强化、模拟生态条件等方面处理驼背鲈以诱导其性腺发育。结果表明：控光和模拟生态条件下不能有效诱导性腺发育;激素、控温和营养强化相结合可诱导驼背鲈性腺发育并成熟。对其中１组诱导成熟的亲鱼（雌、雄各１尾）进行人工催产后,亲鱼自然产卵受精,孵出仔鱼２万尾。驼背鲈在驯养条件下生长较快;通过人工控制和诱导可达到性腺发育和成熟,性腺发育速度较快。     

驼背鲈引种驯养及人工诱导性腺发育和繁殖

为探讨通过人工诱导获得驼背鲈成熟亲鱼的途径,在室内水池进行驼背鲈驯养研究;用口服和注射性激素、控温、控光、营养强化、模拟生态条件等方法处理驼背鲈以诱导其性腺发育。结果表明,控光和模拟生态条件不能有效诱导性腺发育;激素、控温和营养强化相结合可诱导驼背鲈性腺发育并成熟。对其中１ 组诱导成熟的亲鱼（雌、雄各１ 尾）进行人工催产后,亲鱼自然产卵受精,孵出仔鱼２ 万尾。驼背鲈在驯养条件下生长较快;通过人工控制和诱导可达到性腺发育和成熟,性腺发育速度较快。     

泰国虎纹蛙与中国虎纹蛙早期胚胎发育比较研究

比较了泰国虎纹蛙与中国虎纹蛙在控温条件下的胚胎发育过程。结果表明:两亚种蛙在右鳃封闭期与鳃盖完成期之间有明显的"角质颌出现"的特征,因而在传统分期的基础上增加了一个"角质颌出现期",从而将两者自受精卵开始到鳃盖完成期为止划分为26个时期;两亚种蛙大部分发育时期外形特征基本相同,但八细胞期细胞的排列方式,两亚种蛙神经褶期的神经沟形状、纤毛出现期的神经褶棱高度等均不同;泰国虎纹蛙的发育速度较快,自受精卵期到鳃盖完成期共耗时70.4h,中国虎纹蛙在相同的条件下则需92.5h,但在四细胞期、八细胞期、神经管期和尾芽期,泰国虎纹蛙的发育速度却较中国虎纹蛙慢。     

鲫(♀)鲤(♂)杂交F_1代精巢细胞学研究

用石蜡切片技术、电镜方法研究了鲫（♀）鲤（♂）杂交Ｆ１代精巢的细胞组织。结果显示雄性个体的生殖腺具有三种不同的类型：（１）完全能育型,个体能形成正常的精子。Ⅰ期精巢只有分散排列的精原细胞;Ⅱ期精巢精原细胞排列成束,有管无腔;Ⅲ期精巢由精原细胞和由它分化而成的初级精母细胞组成精细小管;Ⅳ期精巢内有精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞;Ⅴ期出现了由精子细胞变态而成的成熟精子。正常的精子由头、颈、尾构成。（２）不完全能育型。有少数精子细胞可以通过变态形成正常的精子,大多数生精细胞从精母细胞到形成精子是异常的,如核物质不规则浓缩、染色体不等分离。（３）完全不育型,包括有两性嵌合体和非两性嵌合体,都不能产生成熟的精子。     

鲫（♀）鲤（♂）杂交F1代精巢细胞学研究

用石蜡切片技术,电镜方法研究了鲫（♀）鲤（♂）杂交Ｆ１代精巢的细胞组织。结果显示雄性个体的生殖腺具有三种不同的类型：（１）完全有型,个体能形成正常的精子,１期精巢只有分散排列的精原细胞;Ⅱ期精巢精原细胞排列成束,有管无腔;Ⅲ期 巢由精原细胞和由它分化而成的初级精母细胞组成精细小管;Ⅳ期精巢内有精原细胞、初级精母细胞、次级精细细胞、精子细胞、Ⅴ期出现了由精子细胞变态而成的成熟精子。正常的精子由头、颈     

半滑舌鳎gata5基因的克隆及表达分析

【目的】研究半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)gata5基因(csgata5)的序列特征及该基因在半滑舌鳎性腺分化、成熟过程中的表达模式。【方法】通过克隆获得csgata5编码区序列,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测csgata5 mRNA在不同类型性腺、胚胎和性腺发育中的表达模式,借助原位杂交技术定位csgata5 mRNA表达的细胞类型。【结果】克隆获得csgata5 cDNA序列1 777 bp,包含1 167 bp的编码区(Coding sequence,CDS),262 bp的5′UTR和348 bp的3′UTR区,预测csgata5编码388个氨基酸残基(aa),分子质量为41.9 ku,等电点为8.90,在C端含有两个典型的GATA锌指结构域;基因组分析显示csgata5位于半滑舌鳎10号染色体上,包含7个外显子和6个内含子区。RT-qPCR分析显示csgata5 mRNA在2龄雄鱼和伪雄鱼精巢中表达高于卵巢;csgata5m RNA主要定位在卵母细胞、精原细胞和精子中。胚胎发育过程中,csgata5m RNA表达在1细胞期至囊胚期呈下降趋势,之后上升,至原肠胚期达到峰值,随后降低并维持较低水平至孵化出膜。在精巢发育过程中,csgata5m RNA表达水平呈升高趋势,在1龄达到检测的峰值;在卵巢发育过程中,csgata5m RNA表达趋势类似精巢,表达水平低于同期精巢。【结论】csgata5参与半滑舌鳎原肠胚期的组织器官分化,具有促进原始生殖细胞向雄性生殖细胞分化及雄性生殖细胞发育的作用。     

湛江地区光裸星虫的生殖细胞发育和生殖周期

采用活体观察和常规石蜡切片技术对湛江地区光裸星虫生殖周期、生殖细胞的发育及形态结构进行研究。结果表明：星虫雌雄异体，无肉眼可见生殖腺结构，原生殖细胞在体腔液中发育；雌性生殖细胞根据其卵膜的形成和卵黄积累情况可以分为4个发育阶段，小生长期、大生长期、成熟前期和成熟期；雄性生殖细胞也分为增殖期、生长期、成熟期和变态期4个阶段；成熟的生殖细胞经肾管排出体外。生殖季节为5～9月，其中7～8月为高峰期。     

不同天然饵料对凡纳滨对虾亲虾性腺发育的影响

分别以双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)、杜氏枪乌贼(Loligo duvaucelii)、近江牡蛎(Ostrea riuularis)及三者的混合饵料(1∶1∶1)培育凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)亲虾至性腺发育成熟,通过分析亲虾性腺发育时间、蜕壳间期、交配率、产卵量、变态率,确定培育亲虾的优质饵料。结果表明:投喂双齿围沙蚕或混合饵料的组与投喂杜氏枪乌贼、近江牡蛎组在产卵量、卵巢发育时间、蜕壳间期、交配率、孵化率、变态率方面具有显著差异(P<0.01)。投喂双齿围沙蚕或混合饵料的亲虾平均产卵量可达21.2×104粒/尾,卵巢平均发育时间为101 h,平均蜕壳间期为218 h,平均交配率可达80%,平均孵化率可达62.99%,平均变态率可达82.44%。表明在凡纳滨对虾亲虾培育的过程中,沙蚕单独或与其他天然饵料混合投喂,较乌贼、牡蛎单独投喂对亲虾性腺发育具有更好的促进效果。     

双棘黄姑鱼卵巢发育的周年变化

观察了双棘黄姑鱼卵巢发育的周年变化,结果表明,双棘黄姑鱼雌鱼性腺成熟系数(GSI)一年有两个峰值,分别出现在5月份(9.38%±0.32%)和10月份(7.56%±0.43%);HSI与GSI密切相关[R=0.76];卵巢发育水温在19～29℃范围,繁殖水温为24～28℃,在广东省饶平海区,双棘黄姑鱼繁殖时间在每年的5月和10月,属于春、秋二季产卵类型的鱼类。     

青鳉foxl2基因敲除突变体的构建与表型分析

【目的】建立青鳉(Oryziaslatipes)foxl2基因突变体材料,为阐释foxl2基因功能提供良好的动物模型和研究基础。【方法】利用CRISPR/Cas9技术敲除青鳉foxl2基因,建立突变体材料。观察foxl2基因突变体的第二性征、性腺等形态特征;组织学分析性腺结构与性腺中细胞类型;用定量PCR检测性腺发育相关基因的表达情况。【结果】通过CRISPR/Cas9技术成功敲除青鳉foxl2基因,建立foxl2基因缺失4个碱基的青鳉突变体。从第二性征与性腺表型上,foxl2-/-突变体均表现为生理雄性;组织切片分析发现,foxl2-/-突变体的性腺结构与野生型卵巢和野生型精巢均有显著差异,存在退化的核仁外周卵母细胞与精子,提示foxl2-/-的性腺在组织结构上类似精巢;定量PCR结果显示,foxl2-/-突变体中雄性性腺发育关键基因sox9b、gsdf、amh等的表达量升高,雌性性腺发育关键基因cyp19a1a等的表达量下降。【结论】通过CRISPR/Cas9技术成功建立青鳉foxl2基因缺失的突变体,foxl2-/-突变体有遗传雌性、生理雄性的表型特征,foxl2对维持青鳉性腺功能有重要作用。     

马氏珠母贝的术前处理试验

本试验根据马氏珠母贝手术贝的不同生理状态，分别用控制海水流量、饵料等抑制贝的生殖腺发育，或促进生殖腺发育并诱导产卵排精的方法，对手术贝进行术前处理，结果表明：手术后休养期成活率平均为９２．９％，最高的达９５．３％；育珠期成活率平均为７５．３％。最高的一组达８５．３％；平均每个贝留核数１．０６粒，最高的达１．１７粒，同时珍珠质量明显提高。用术前处理方法，产量和产值可提高５２．３％。