酶解褐藻胶寡糖的HPCE分析方法研究

采用高效毛细管电泳法（HPCE）对酶解褐藻胶寡糖进行了分离分析,考察了缓冲液浓度、pH、电压及温度等参数对寡糖分离的影响.实验结果表明在pH=2.5,100mmol/L 磷酸盐缓冲液中,运行电压20kV,电泳由负极到正极,温度30℃,235nm紫外检测条件下,酶解褐藻胶寡糖获得了高效分离.     

运用酶法降解褐藻胶研究糖链序列结构的展望

多糖是一种生命的基础物质 ,其功能和作用日益受到重视 ,糖生物学与糖工程的研究必将成为基因工程、蛋白质工程及糖链结构分析技术之后新的研究热点。探讨多糖的研究方法、解决糖链的测序问题成为该研究领域的关键。褐藻胶是一种重要的海藻工业产品 ,是由古罗糖醛酸 (G)和甘露糖醛酸 (M)组成的一种典型的多糖类 ,广泛应用于工业、农业、医药、食品等各个领域。研究发现 ,不同的褐藻酸酶可以作用于褐藻酸的不同位点 ,形成不同的糖片段或寡糖 ,经过分离、纯化 ,应用电泳、色谱、质谱、核磁共振等方法可以确定糖链的结构、组成及取代基的位置…     

两种方法制备壳寡糖平均分子质量与氨基含量分析

采用氧化降解和酶降解两种方法制备壳寡糖.并对降解产物的氨基质量分数变化,平均分子质量进行了分析和测定.结果表明,氧化降解法降解速率快,降解产物的平均分子质量都低于2 ku,但降解产物的氨基质量分数均有部分损失;酶法降解产物的氨基含量基本没有损失,但酶法降解的时间较长,得到的产物平均分子质量较高.分别采用木瓜蛋白酶和纤维素酶时壳聚糖进行降解,经过24 h降解,平均分子质量从630 ku分别降至43 ku和25 ku左右,表明纤维素酶的水解能力强于木瓜蛋白酶.     

壳寡糖及其全乙酰化衍生物的制备及结构表征

探讨了壳寡糖及全乙酰壳寡糖的制备方法,通过正交实验考察了原料、温度、时间对降解产物的影响.制备了八种寡糖（八乙酰壳二糖、十一乙酰壳三糖、十四乙酰壳四糖和十七乙酰壳五糖,以及N,N′-二乙酰壳二糖、N,N′,N″-三乙酰壳三糖、N,N′,N″,N′′′四乙酰壳四糖和N,N′,N″,N′′′,N′′′′-五乙酰壳五糖）,并通过IR、NMR及MS等确定了其化学结构.     

一个新的来自于弧菌QD-5并具有Poly-G内切功能的褐藻胶裂解酶的克隆和性质表征

Seven bacterial clones with alginate-utilizing activity were isolated from rotten kelp. By activity test, the Vibrio sp.QD-5 with the potential alginate-degrading capability was chosen to carry out the draft genome sequencing, and the result showed that the Vibrio sp. QD-5 containing an alginate lyase gene cluster. One of these genes, aly-IV,was cloned and characterized for the first time. After overexpression, Aly-IV, with a molecular mass of about62 kDa and a theoretical isoelectric point(pI) of 5.12, was purified to a specific activity of 1 256.78 U/mg and showed highest activity at 35°C in the Tris-HCl buffer at pH of 8.9. Moreover, the enzyme activity was enhanced by the metal ions of Na~+, K~+ and Mg~(2+) under certain concentration. Aly-IV degraded favorably polyG blocks in an endo-type, yielding monomer and dimer as the main products. Due to its high substrate specificity, Aly-IV could be used as a potential tool for production of polyG oligosaccharides with low degree of polymerization(DP) and for determining the fine structure of alginate.     

海藻胶低聚寡糖的化学氧化制备纯化技术及保水理化性质分析

海藻胶低聚寡糖是从马尾藻等藻类中提取出来的一种多糖类物质,具有抗氧化及保水等生物活性。本文采用氧化降解技术对海藻胶低聚寡糖的制备工艺进行了研究,通过对氧化过程中氧化剂浓度、反应温度、反应时间等进行研究,结果表明:当氧化剂H2O2添加浓度控制在6%左右,温度控制在60°C,时间控制在8h时,海藻胶降解为低聚寡糖的产率最高,达到60%左右。进一步对海藻胶低聚寡糖进行纯化,结果表明当温度控制在27°C,时间在2h时,分子量为6000—8000Da海藻胶低聚寡糖分离效率最高,达到70%以上,并对6000—8000Da海藻胶低聚寡糖的保水理化性能进行分析,结果表明6000—8000Da海藻胶低聚寡糖具有良好的保水性能。本研究可为开发一种安全、高效、节能、环保,适用于鱿鱼和虾仁等的生物保水剂提供理论基础。     

κ-卡拉胶固相酸降解及其寡糖结构分析

以κ-卡拉胶为原料,采用正交实验法建立了1种固相酸降解制备κ-卡拉胶寡糖方法。结果表明,当阳离子交换树脂(732#)用量为100 mg/mL、κ-卡拉胶的质量浓度为3%时,在60℃下降解3 h后,寡糖分布宽度较窄,经PAGE和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)分析,表明所得寡糖为聚合度小于25的系列奇数寡糖。     

牛肺肝素寡糖的制备

利用肝素酶 (Heparinase I,EC4 .2 .2 .7)对牛肺肝素进行控制酶解 ,混合寡糖经超滤、凝胶渗透色谱和高压液相色谱技术分离制备后 ,得到聚合度为 2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 ,14和 2 0的寡糖纯品。各寡糖纯度采用毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检验 ,寡糖结构采用核磁共振氢谱证实。     

酶促反应制备壳寡糖及壳寡糖分析

用壳聚糖酶降解法对壳聚糖进行降解制备壳低聚糖,研究了温度、pH、底物浓度、脱乙酰度、反应时间对酶促反应的影响。对酶解产物进行HPLC分析,用Bio—Gel P-4柱对酶解产物进行初步分离。结果表明,壳聚糖酶降解壳聚糖的最适温度为45℃,pH为6．0,最适底物质量分数为6％,脱乙酰度越高酶解反应所得产物的数均相对分子质量越小,24h后酶解反应达到平衡,酶解产物壳寡糖水溶性极好。P-4柱分离得到聚合度20以上,10～20,10以下3种壳寡糖。     

酶法制备几丁寡糖和壳糖研究现状与进展

对用酶法制备几丁寡糖和壳寡糖研究现状与进展进行了综述。几丁质酶、壳聚糖酶、溶菌酶和 N-乙酰葡萄糖胺酶等专一性的水解酶及糖酶、蛋白酶、脂肪酶等水解酶对几丁质和壳聚糖都具有部分或完全非专一性水解作用。介绍了这些酶类的作用机理及相关微生物的种类和作用条件     

褐藻低聚糖对提高大菱鲆免疫机能的作用

研究了在养殖过程中投喂酶解制备的褐藻低聚糖对大菱鲆(Scophthalmus maximus)鱼苗免疫机能的影响,对大菱鲆鱼苗血液中的酸性磷酸酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶和头肾淋巴细胞吞噬能力进行了测定。实验发现,褐藻低聚糖能够提高大菱鲆血液中酸性磷酸酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力;头肾淋巴细胞吞噬率较对照组提高15.4%,吞噬指数则无显著差异。结果表明在大菱鲆鱼苗的养殖过程中褐藻低聚糖可作为一种非特异免疫调节剂提高大菱鲆机体的免疫能力。     

低分子质量褐藻寡糖的高效酶法制备及其抗氧化活性评价

褐藻寡糖具有多种生理活性,本研究通过酶解与分级条件的优化,获得了低分子质量褐藻寡糖的酶法制备工艺,并在体外模型上评价了不同分子质量组分的抗氧化活性。结果表明,优化后的褐藻寡糖制备条件为:底物浓度1.20%,酶底比4.35 U/mg,酶解时间4 h。进一步采用乙醇沉淀和超滤分离后,获得了重均分子质量分别为0.84、1.40、2.25和34.56 k Da的4种组分,其得率分别为50.82%、5.15%、11.48%和12.00%。各组分均具有一定的还原能力,可有效清除DPPH和羟自由基,其中低分子质量组分A的抗氧化活性最为显著,其清除羟自由基的能力与维生素C相近。     

溶液中褐藻胶低聚糖在活性炭上的吸附特性与机制研究

本文研究了不同pH、反应时间、温度、初始糖浓度条件下溶液中褐藻胶低聚糖(AOS)在活性炭上的吸附性能及其吸附动力学和热力学机制。结果表明,溶液pH对活性炭吸附AOS具有重要影响,随pH降低, AOS在活性炭上的吸附增强, pH=1时吸附量可达0.116 g/g。吸附反应在5 min内迅速发生, 60 min后达到吸附平衡。活性炭吸附AOS符合准二级吸附动力学过程。吸附热力学研究表明,吸附过程为自发的放热反应,吸附等温线符合Langmuir模型。综上,吸附过程为单分子层均相吸附,降低pH、低温有利于AOS在活性炭上的吸附。     

海藻酸裂解酶基因在毕赤酵母中的表达及重组酶性质的初步研究

褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)是一种海藻酸降解菌.本实验采用PCR的方法,以褐球固氮菌基因组DNA为模板,克隆出约1.05 kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL.重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中,获得高效分泌表达海藻酸裂解酶的毕赤酵母工程菌株.用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到43 kDa的目的蛋白,酶活力可达1 400 U/cm3左右.经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40℃,并且在20~55℃,pH2.0~11.0具有较好的稳定性.另外,10 mmol/cm3的Cu2+,Fe2+,Co2+,Mn2+和Ca2+对酶有不同程度的抑制作用.     

几种海藻功能寡糖的结构、制备、活性与应用研究进展

海洋来源的功能寡糖具有多种生物活性,如抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等,因此在医药、农业、化工及环境等领域有着广泛的应用.然而,不同聚合度、不同结构的寡糖所具有的活性差异很大,因此有必要深入研究和探讨不同种类的海洋功能寡糖的结构与功能的关系及其应用潜力.本文对几种研究较多的海藻功能寡糖的来源、制备、纯化及应用进...     

一株高效褐藻酸降解菌的筛选、鉴定及其发酵条件的优化

以褐藻酸钠为唯一碳源,从腐烂海带中筛选得到褐藻酸钠降解能力较强的菌株H4,经生理生化和16S rDNA序列分析鉴定该菌株属于交替单胞菌属(Alteromonas)。对菌株H4的发酵条件优化研究表明,H4的较优培养基组成为(w/v):褐藻酸钠0.6%、酵母粉0.5%、蛋白胨0.25%、NaCl 3%;较优培养条件为:培养温度28℃,初始pH7.5,接种量1.5%(v/v),培养时间48 h。Fe3+对交替单胞菌H4的产酶有明显的促进作用,这在其他褐藻酸裂解酶生产菌株中未见报道,而Cu2+对褐藻酸裂解酶的抑制作用高达45.78%。在优化后的培养条件下,粗酶液酶活达到146.45 U/mL,较优化前提高了39.4%。     

荷电耐污染超滤膜分离、纯化海藻酸钠的研究

采用PAN(聚丙烯腈)、季胺化的PAN-CO-DMAEMA、DMF等混合溶液制备荷电耐污染超滤膜。在改进消化条件的基础上,对酸凝—酸化法提取海藻酸钠的工艺做了进一步优化。得到的较佳工艺条件为:先用1%甲醛溶液浸泡海带4h,用4%Na2CO3溶液常温消化3h后,用盐酸溶液沉淀出海藻酸,用1%Na2CO3中和海藻酸胶块,再用90mL浓度为10%的次氯酸钠溶液脱色1h,采用膜分离技术超滤后加入无水乙醇析出絮凝状海藻酸钠,最后烘干至恒重,粉碎得海藻酸钠成品。分析结果表明,海藻酸钠性征和得率均有明显改善。     

褐藻酸降解菌A7的发酵及产酶条件研究

以海藻废弃物堆肥中分离到的薄壁杆菌属（Gracillibacillus）的褐藻酸降解菌A7为研究对象,对该菌的生长及产酶条件进行了研究。结果表明,该菌的最适产酶条件为：温度30℃,海藻酸钠的质量分数0．5％,pH9．5,NaCl浓度0．5mol／L,以蛋白胨为主要氮源。在最佳条件下培养96h达到最高酶活力12．79U／mL。     

絮凝剂-树脂联合法从琼胶中制备琼脂糖工艺研究

琼脂糖是一种具有高凝胶特性的天然高分子红藻多糖,具有良好的物理、化学和热稳定性,在医学和科研方面具有广泛的用途。在琼脂糖制备工业中,传统生产技术的局限性造成了国内琼脂糖尚未规模化生产。因此,有必要开发新的成本可控的琼脂糖制备方法。本文采用一种聚丙烯酰胺和弱碱性苯丙烯系阴离子交换树脂联用的方法来分离制备琼脂糖,以江蓠琼胶为原料,通过单因素试验优化琼脂糖的制备参数并对琼脂糖的理化指标进行测定。所得琼脂糖硫酸根含量为0.22%、凝胶强度为1 524 g/cm2、透明度为58.9%,凝固温度为39.7℃、融化温度为87.6℃,表明其具有相对较高的质量。该工艺简单经济,对发展琼脂糖工业具有一定的参考价值。