| 香鱼格留虫(Glugea plecoglossi)环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 康晋伟,金晶磊,段丽君,周燕,苗亮,周前进,陈炯.香鱼格留虫(Glugea plecoglossi)环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测方法的建立[J].海洋与湖沼,2020,51(6):1501-1512. |
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| 作者姓名： | 康晋伟 金晶磊 段丽君 周燕 苗亮 周前进 陈炯 |
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| 作者单位： | 宁波大学农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室 宁波315211;宁波大学海洋学院 宁波315832;宁波大学农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室 宁波315211;宁波大学海洋学院 宁波315832;宁波市海曙区畜牧兽医技术管理服务站 宁波315153;宁波大学海洋学院 宁波315832 |
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| 基金项目： | 浙江省公益技术研究计划农村农业项目，LGN18C180002号；宁波市科技创新团队项目，2015C110018号；宁波市自然科学基金项目，2018A610342号；宁波市江北区农业和社会发展科技计划项目，2017B02号；农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室2020开放基金项目，KF20200105号；浙江省动物预防医学重点实验室开放课题基金项目，ZPKLPVM2017KFKT005号；浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室开放基金，J2018004号；2018年浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划，2018R405078号。 |
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| 摘 要： | 我国的养殖香鱼正面临着严重的香鱼格留虫（Glugea plecoglossi）感染。本研究联合运用环介导等温扩增技术（LAMP）和横向流动试纸条（LFD）的检测技术，建立了快速便捷地检测G. plecoglossi的LAMP-LFD方法。该方法以G. plecoglossi的β微管蛋白基因为检测靶标，在其保守区域设计并筛得6条特异性引物（其中上游内引物用生物素标记），进行LAMP反应，产物再与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的特异性探针杂交，在LFD上进行结果判断。结果表明，LAMP-LFD方法能够特异性地检出G. plecoglossi，对梅氏新贝尼登虫、刺激隐核虫、肝肠胞虫阳性的虾组织、派氏异尖线虫、内弯宫脂线虫、鳗弧菌香鱼分离株、杀香鱼假单胞菌，以及香鱼组织等的检测均呈阴性。优化后，LAMP的反应条件为65℃反应45min，与探针杂交的条件为65℃反应5min，加之5min的显色时间，整个检测时程为55min。利用该方法能够检测到2.0fg/μL的含β微管蛋白的质粒DNA，针对G. plecoglossi基因组DNA的检测灵敏度为14.0pg/μL；能够从感染强度达到100个虫体/克的香鱼肝组织中稳定地检测到虫体。该方法可在简单的恒温加热设备（如水浴锅）中完成核酸扩增和探针杂交，无需昂贵的仪器装置。综上，香鱼格留虫LAMP-LFD方法操作便捷、灵敏度高、特异性好、检测快速，而且设备依赖性低，完全适合于基层检测的需求。
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| 关 键 词： | 香鱼格留虫(Glugea plecoglossi) β微管蛋白 环介导等温扩增技术(LAMP) 横向流动试纸条(LFD) 检测 |
| 收稿时间： | 2020/3/16 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2020/4/23 0:00:00 |
A LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION TECHNIQUE COMBINED WITH A LATERAL FLOW DIPSTICK FOR THE DETECTION OF GLUGEA PLECOGLOSSI |
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| KANG Jin-Wei,JIN Jing-Lei,DUAN Li-Jun,ZHOU Yan,MIAO Liang,ZHOU Qian-Jin,CHEN Jiong.A LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION TECHNIQUE COMBINED WITH A LATERAL FLOW DIPSTICK FOR THE DETECTION OF GLUGEA PLECOGLOSSI[J].Oceanologia Et Limnologia Sinica,2020,51(6):1501-1512. |
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| Authors: | KANG Jin-Wei JIN Jing-Lei DUAN Li-Jun ZHOU Yan MIAO Liang ZHOU Qian-Jin CHEN Jiong |
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| Institution: | State Key Laboratory for Managing Biotic and Chemical Threats to the Quality and Safety of Agro-products, Ningbo University, Ningbo 315211, China;School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315832, China;State Key Laboratory for Managing Biotic and Chemical Threats to the Quality and Safety of Agro-products, Ningbo University, Ningbo 315211, China;School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315832, China;Ningbo Haishu District Animal Husbandry and Veterinary Medicine Technical Management Service Station, Ningbo 315153, China;State Key Laboratory for Managing Biotic and Chemical Threats to the Quality and Safety of Agro-products, Ningbo University, Ningbo 315211, China;School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315832, China;1. State Key Laboratory for Managing Biotic and Chemical Threats to the Quality and Safety of Agro-products, Ningbo University, Ningbo 315211, China |
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