| 一种水产动物病毒现场检测免疫芯片的制备与应用 |
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| 引用本文： | 徐晓丽,绳秀珍,战文斌. 一种水产动物病毒现场检测免疫芯片的制备与应用[J]. 海洋与湖沼, 2010, 41(5): 698-706 |
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| 作者姓名： | 徐晓丽 绳秀珍 战文斌 |
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| 作者单位： | 中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室,青岛,266003 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)课题, 2006AA100306 号; 农业公益性行业科研专项经费项目, 200803012 号 |
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| 摘 要： | 采用原子力显微镜对氨基化玻片及6种不同方法修饰玻片进行表面特征分析,并比较了硝酸纤维素(NC)膜、PVDF膜以及以上不同修饰玻片对抗体的固定效率、固定效果,最终选择琼脂糖修饰玻片作为芯片载体。将纯化后的兔抗血清(捕获抗体)点样至琼脂糖修饰玻片上,制备免疫芯片,与待检样品(病毒感染的靶器官组织)匀浆液孵育形成复合物,该复合物被辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性单克隆抗体(单抗)识别,经底物显色,得到肉眼可见的检测结果。通过改变芯片制备及应用过程中的具体条件参数,对各条件进行了优化,并采用生物素-链亲和素(BAS)标记特异性单抗作为检测抗体以提高检测灵敏度。基于此夹心免疫分析原理制备的WSSV、LCDV现场检测免疫芯片,病毒的最低检出量分别为82.50ng/ml、0.88μg/ml,在一定的抗原浓度范围内,病毒浓度的对数值与信号强度呈线性关系;采用BAS放大检测信号后,病毒的最低检出量为12.38ng/ml、0.22μg/ml。该免疫芯片与酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫荧光法(IFAT)对同种样品的检测结果高度一致。
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| 关 键 词： | 单克隆抗体 抗体芯片 白斑综合征病毒 淋巴囊肿病毒 琼脂糖凝胶 |
| 收稿时间： | 2009-06-15 |
| 修稿时间： | 2010-06-10 |
DEVELOPMENT AND APPLICATION OF AN ANTIBODY CHIP IN ON-SPOT DETECTION OF AQUATIC ANIMAL VIRUSES |
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| XU Xiao-Li,SHENG Xiu-Zhen and ZHAN Wen-Bin. DEVELOPMENT AND APPLICATION OF AN ANTIBODY CHIP IN ON-SPOT DETECTION OF AQUATIC ANIMAL VIRUSES[J]. Oceanologia Et Limnologia Sinica, 2010, 41(5): 698-706 |
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| Authors: | XU Xiao-Li SHENG Xiu-Zhen ZHAN Wen-Bin |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Mariculture Ministry of Education, Ocean University of China;Key Laboratory of Mariculture Ministry of Education, Ocean University of China;Key Laboratory of Mariculture Ministry of Education, Ocean University of China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Monoclonal antibody Antibody chip White spot syndrome virus Lymphocystis disease virus Agarose gel |
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