海洋生物抗菌肽在枯草杆菌BS168 中的高效表达

为了实现基因工程高效制备tachyplesinⅠ,采用tachyplesinⅠ基因串联表达的方法,以穿梭表达载体pSBPTQ为表达载体,通过RT-PCR扩增tachyplesinⅠ基因(tac)和采用直接退火的方法合成tachyplesinⅠ串联基因(2tac),构建重组表达载体pSBPTQ-TAC和pSBPTQ-2TAC,转化到枯草杆菌BS168实现高效表达。实验结果表明:基因tac和2tac在枯草杆菌中表达成功,TAC和2TAC抗菌肽表达量分别约为8.5％、15.8％,经高效液相色谱分析表达产物在发酵上清液中的含量约为5.46、10.36mg/L;表达产物TAC和2TAC对大肠杆菌K88和金黄色葡萄球菌都具有明显的抑菌作用,2TAC经BrCN水解产物抑菌活力高于TAC,而2TAC的表达产量大约是TAC的1.89倍。这表明通过tachyplesinⅠ串联表达产物降低了自身对宿主的毒性,可以提高tachyplesinⅠ的表达产量。