| 马氏珠母贝(Pinctada fucata)组织蛋白酶L基因的克隆与表达分析 |
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| 引用本文： | 王忠良,简纪常,鲁义善,丁 燏,王 蓓,陈 刚,吴灶和. 马氏珠母贝(Pinctada fucata)组织蛋白酶L基因的克隆与表达分析[J]. 海洋与湖沼, 2013, 44(6): 1604-1611 |
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| 作者姓名： | 王忠良 简纪常 鲁义善 丁 燏 王 蓓 陈 刚 吴灶和 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学水产学院，广东海洋大学南海水产经济动物增养殖重点实验室;广东海洋大学水产学院，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室;广东海洋大学水产学院，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室;广东海洋大学水产学院，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室;广东海洋大学水产学院，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室;广东海洋大学水产学院，广东海洋大学南海水产经济动物增养殖重点实验室;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，仲恺农业工程学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目, 31202023 号; 国家科技支撑计划课题, 2012BAD17B00 号。 |
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| 摘 要： | 根据已构建的溶藻弧菌(Vibro alginolyticus)诱导的马氏珠母贝(Pinctada fucata)血淋巴cDNA差减文库得到的ESTs序列, 应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了其组织蛋白酶L基因(PFCatL), 并对其进行了生物信息学分析; 应用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)技术, 研究了PFCatL基因在溶藻弧菌刺激前后马氏珠母贝足、外套膜、鳃、闭壳肌等8个组织中的表达变化。结果表明, PFCatL基因cDNA全长2004bp, 其中5′非编码区(5′-UTR)50bp, 3′非编码区(3′-UTR)865bp, 开放阅读框(ORF)1089bp, 编码362个氨基酸, 其分子量计算值(MW)为40.52kDa, 理论等电点(IP)为5.20; 生物信息学分析表明, PFCatL含有16个氨基酸残基组成的信号肽序列以及组织蛋白酶前体抑制功能域I29; Clustalw2多重比对发现PFCatL氨基酸序列在催化三联体Cys-His-Asn、底物结合位点以及二硫键形成相关的半胱氨酸残基位点高度保守; Real-time PCR研究发现, PFCatL在马氏珠母贝各组织中均有表达, 但各组织间的表达量存在差异, 其中以肾和闭壳肌中的表达量最高; 溶藻弧菌感染4h后, 外套膜、鳃以及血淋巴中PFCatL基因的表达较感染前显著上调。
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| 关 键 词： | 马氏珠母贝 组织蛋白酶L cDNA末端快速扩增 实时荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 2012-05-31 |
| 修稿时间： | 2012-08-02 |
CLONING AND EXPRESSION ANALYSIS OF THE CATHEPSIN L GENE FROM PEARL OYSTER PINCTADA FUCATA |
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| WANG Zhong-Liang,JIAN Ji-Chang,LU Yi-Shan,DING Yu,WANG Bei,CHEN Gang and WU Zao-He. CLONING AND EXPRESSION ANALYSIS OF THE CATHEPSIN L GENE FROM PEARL OYSTER PINCTADA FUCATA[J]. Oceanologia Et Limnologia Sinica, 2013, 44(6): 1604-1611 |
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| Authors: | WANG Zhong-Liang JIAN Ji-Chang LU Yi-Shan DING Yu WANG Bei CHEN Gang WU Zao-He |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pinctada fucata cathepsin L rapid amplification of cDNA ends (RACE) fluorescent quantitative real-time PCR |
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