深海噬菌体BVE2内溶素的重组表达及其活性研究

本研究从一株来源于西南印度洋沉积物的噬菌体BVE2基因组中得到了一条全长702 bp，编码噬菌体内溶素的基因Lysin132，编码的蛋白共含有234个氨基酸残基，预计分子量为25.74 kDa；氨基酸序列同源比对结果表明BVE2 Lysin132具有多个酰胺酶活性位点。进化树分析结果表明BVE2 Lysin132是一种N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶。将Lysin132克隆到pEASY-Blunt E2 Expression Vector中，构建了E. coli-pEASY-Lysin132表达菌株。成功用IPTG诱导表达，得到了大量带有6×His标签的重组BVE2 Lysin132。经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳，得到单一目的蛋白条带。酶学性质分析结果表明，重组BVE2 Lysin132的最适反应温度为30 ℃，在中高温下热稳定性良好，在10~50 ℃下孵育90 min，仍能保持70%以上的酶活力；最适pH为7.0，在pH 6.0~8.0时均能保持80%以上的酶活力，表明该酶有较宽的pH作用范围；Na⁺、Mg²⁺可以使酶活力显著提高20%以上，Ca²⁺可以使酶活力提高40%以上。抑菌实验结果表明，重组BVE2 Lysin132对革兰氏阴性菌的抑制效果较好，尤其对溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）、坎氏弧菌（V. campbellii）、哈维氏弧菌（V. harveyi）的抑制作用显著，与市售微生物溶菌酶相比，抑制效果最高提升了40%以上。因此，本研究获得了一种拥有较宽pH作用范围且热稳定性良好的内溶素，可为开发应用于水产养殖、食品保鲜、医药等领域的新型抑菌剂研发提供基础。

Recombinant expression and activity of endolysin from deep-sea bacteriophage BVE2