| 基于高效液相色谱法的扇贝毒素-2制备方法研究 |
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| 引用本文： | 王玉,彭吉星,吴海燕,郭萌萌,佟蒙蒙,谭志军.基于高效液相色谱法的扇贝毒素-2制备方法研究[J].海洋与湖沼,2018,49(3):568-576. |
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| 作者姓名： | 王玉 彭吉星 吴海燕 郭萌萌 佟蒙蒙 谭志军 |
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| 作者单位： | 浙江大学海洋学院海洋生物研究所;中国水产科学研究院黄海水产研究所;舟山市疾病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 科技部国家重点研发计划项目，2016YFC1402104号；山东省重点研发计划项目，2016GSF120018号；浙江省海产品健康危害因素关键技术研究重点实验室开放基金资助项目，201606号。 |
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| 摘 要： | 本文以渐尖鳍藻(Dinophysis acuminata)为实验原料,建立了基于高效液相色谱法(HPLC)的扇贝毒素-2(Pectenotoxin-2,PTX2)的制备方法。研究重点对鳍藻细胞的破碎、PTX2毒素的提取及HPLC纯化等三个步骤的方法进行筛选和优化。结果表明,反复冻融与超声波细胞破碎相结合可获得最大的细胞破碎率和毒素提取率,分别为99.2%和81.5%。采用四种有机试剂(甲醇、丙酮、乙醚、二氯甲烷)及三种固相萃取小柱(Solid Phase Extraction,SPE)(Oasis HLB SPE,Phenomenex Strata-X SPE,Sep-Pak C18 SPE)对PTX2毒素进行提取,其中乙醚-二氯甲烷的提取效率最高,达78.2%。在HPLC对PTX2毒素的纯化实验中发现,流动相的pH会影响毒素组分的分离,其中在碱性流动相(含6.7mmol/L氨水的水溶液和乙腈溶液,pH=10.94)条件下,PTX2的分离效果最佳,响应值最高。实验使用Phenomenex Kinetex C18(4.8mm×250mm,5μm)色谱柱,在上述碱性流动相条件下,分离得到纯度为93.2%的PTX2毒素。本研究选定的藻细胞破碎、PTX2毒素提取、及HPLC纯化方法简单快捷,高效易操作,为从大规模培养的鳍藻细胞中制备高纯度PTX2毒素提供了技术支持。
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| 关 键 词： | 扇贝毒素-2 鳍藻 高效液相色谱 萃取 制备 |
| 收稿时间： | 2017/10/24 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/1/19 0:00:00 |
PREPARATION OF PECTENOTOXIN-2 BY HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY |
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| WANG Yu,PENG Ji-Xing,WU Hai-Yan,GUO Meng-Meng,TONG Meng-Meng and TAN Zhi-Jun.PREPARATION OF PECTENOTOXIN-2 BY HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY[J].Oceanologia Et Limnologia Sinica,2018,49(3):568-576. |
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| Authors: | WANG Yu PENG Ji-Xing WU Hai-Yan GUO Meng-Meng TONG Meng-Meng and TAN Zhi-Jun |
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| Institution: | Institute of Marine Biology, Ocean College, Zhejiang University, Zhoushan 316021, China;Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Institute of Marine Biology, Ocean College, Zhejiang University, Zhoushan 316021, China;Key Laboratory of Testing and Evaluation for Aquatic Product Safety and Quality, Ministry of Agriculture, Zhoushan 316021, China and Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pectenotoxin-2 Dinophysis acuminata high-performance liquid chromatography extraction preparation |
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