| 红笛鲷tdt基因融合蛋白原核表达条件的优化及纯化 |
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| 引用本文： | 黄瑜,张雪利,鲁义善,简纪常,吴灶和,黄浦江,周泽军.红笛鲷tdt基因融合蛋白原核表达条件的优化及纯化[J].广东海洋大学学报,2013(1):44-49. |
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| 作者姓名： | 黄瑜 张雪利 鲁义善 简纪常 吴灶和 黄浦江 周泽军 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室;仲恺农业工程学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(41240041);广东省科技厅国际合作项目(2012B050600029) |
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| 摘 要： | 克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)末端脱氧核糖核酸转移酶TdT蛋白(Terminal deoxynucleotidyl transferases)成熟肽基因序列,并与pET-32a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-32a-TdT,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。运用传统方法优化诱导条件,以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析表明,37℃、0.7 mmol/L IPTG条件下诱导4 h后,TdT融合蛋白的表达量最大,分子质量大小与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式存在。利用HisTrap HP亲和层析柱使TdT蛋白得到进一步纯化,最佳咪唑洗脱浓度为300 mmol/L,Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性的结合,表明表达蛋白为目的蛋白。
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| 关 键 词： | 红笛鲷 tdt基因 原核表达 优化 纯化 Western blot分析 |
Purification and Optimization of Prokaryotic Expression of tdt Gene of Red Snapper (Lutjanus sanguineus) |
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| HUANG Yu,ZHANG Xue-li,LU Yi-shan,JIAN Ji-chang,WU Zao-he,HUANG Pu-jiang,ZHOU Ze-jun.Purification and Optimization of Prokaryotic Expression of tdt Gene of Red Snapper (Lutjanus sanguineus)[J].Journal of Zhanjiang Ocean University,2013(1):44-49. |
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| Authors: | HUANG Yu ZHANG Xue-li LU Yi-shan JIAN Ji-chang WU Zao-he HUANG Pu-jiang ZHOU Ze-jun |
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| Institution: | 1(1.Fisheries College of Guangdong Ocean University,Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals & Key Laboratory of Diseases Controlling for Aquatic Economic Animals of Guangdong Higher Education Institutions,Zhanjiang 524025,China;2.Zhongkai University of Agriculture and Engineering,Guangzhou 510225,China) |
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