不同氮源对微小亚历山大藻生长和毒素产生的影响

通过尿素、氯化铵、酵母浸出粉和硝酸钠等氮源对微小亚历山大藻(Alexandrium minutum)生长及毒素产生的影响研究,分析了微小亚历山大藻对不同氮源利用状况的差异.结果表明,在氮饥饿条件下,加入硝酸钠和酵母浸出粉能显著促进微小亚历山大藻的生长;高浓度的氯化铵在加入后对微小亚历山大藻有一定的毒性效应,表现为生长停滞,但毒性效应在5 d后消失,并得到与添加硝酸钠及酵母浸出粉相似的增长速率0.21 d-1;添加尿素对微小亚历山大藻的生长没有显著促进作用.在四种氮源中,尿素对微小亚历山大藻毒素产生的刺激作用也最弱,在稳定期每个细胞藻细胞毒素含量维持在6.00~8.00 fmol;添加硝酸钠、氯化铵和酵母浸出粉的藻细胞在稳定期毒素含量分别达到11.85,12.86和14.64 fmol.硝酸钠和氯化铵刺激藻毒素产生的效果比酵母浸出粉更为直接.四种含氮营养盐对微小亚历山大藻毒素组成的影响都很小.     

三疣梭子蟹肌肉乳化病的病原及其致病性研究

为进一步搞清养殖梭子蟹肌肉乳化病的病原及其致病机理,找到有效的防治方法,2002-2004年在浙江省宁波、舟山等地养殖场,从濒死的梭子蟹体内分离出1205-11和1205-21两株菌。通过菌体形态、培养特性和生理生化反应,鉴定这2株菌分别为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和葡萄牙假丝酵母(Candida lusitaniae)。人工感染试验证实,这2株菌是梭子蟹肌肉乳化病的病原菌,葡萄牙假丝酵母为继发性感染病原,蟹体外部的损伤及蟹之间相互残伤可能是传染的主要途径。     

条斑紫菜酵母双杂交文库的构建及PyMAPK5互作蛋白的筛选

为进一步研究条斑紫菜促分裂原活化激酶家族PyMAPK5的下游互作蛋白,理解其生物学功能,本研究通过酵母双杂交的方法进行其相互作用蛋白的筛选。提取不同温度和失水逆境胁迫下的RNA,利用Invitrogen体系构建条斑紫菜酵母双杂交cDNA文库,其库容为1.44×107CFU,重组率为91.8%。以pGBKT7-PyMAPK5为诱饵蛋白载体,利用共转化方法,从文库中筛选得到26个与PyMAPK5互作的候选蛋白。候选蛋白集中在光系统II相关蛋白、捕光蛋白、微管蛋白、ATP酶、GTP结合蛋白及假设蛋白等。微管蛋白、捕光蛋白、光系统II蛋白一对一验证结果为阳性,表明在酵母体内存在互作。本研究为阐明条斑紫菜PyMAPK5与其互作蛋白的关系及解析PyMAPK5下游作用机制奠定了基础。     

一株红酵母的抗镉机制

研究了分离自矿区土壤的一株对镉具有较强抗性和富集能力的红酵母菌(Y11)的抗镉机制.结果发现不同方式处理的菌体吸附的镉在细胞不同部位的分布不同,在菌体培养过程中添加浓度为100mg/L镉时,菌体吸附的镉有3.29%进入细胞内,但用在有镉和无镉条件下培养好的菌体,冻干后吸附镉,菌体吸附的镉只有1%可进入原生质体,其余99%都分布在细胞壁周围.利用碱、乙醇-氯仿和蛋白酶分别对Y11细胞与细胞壁进行处理,对其吸附镉的能力有不同影响,红外光谱分析结果表明几丁质酰胺基团主要参与吸附作用.探讨了Y11产金属硫蛋白(MT)的情况,结果表明镉诱导能明显促进Y11菌体产生MT的量,菌体经诱导后MT产量达到638.8μg/g,是非诱导菌体的85倍,远大于报道的酵母菌中MT的产量.纯化后的MT经SDS-PAGE电泳检测,分子量为6500Da.     

The selection of alkaline protease-producing yeasts fi＇om marine environments and evaluation of their bioactive peptide production

A total of 400 yeast strains from seawater, sediments, saltern mud, marine fish guts, and marine algae were obtained. The protease activity of the yeast cultures was estimated, after which four strains (HN3.11, N11b, YF04C and HN4.9) capable of secreting extracellular alkaline protease were isolated. The isolated strains were identified as Aureobasidium pullulans, Yarrowia lipolytica, Issatchenkia orientalis and Cryptococcus cf. aureus. The optimal pH of the protease activity produced by strains HN3.11, YF04C, and HN4.9 was 9.0, while that of the protease produced by strain N11b was 10.0. The optimal temperature for protease activity was 45°C for strains HN3.11, N11b, and YF04C, and 50°C for strain HN4.9. After digestion of shrimp (Penaeus vannamei) protein and spirulina (Arthospira platensis) protein with the four crude alkaline proteases, the filtrate from spirulina (Arthrospira platensis) powder digested by the crude alkaline protease of strain HN3.11 was found to have the highest antioxidant activity (61.4%) and the highest angiotensin I converting enzyme (ACE)-inhibitory activities (68.4%). The other filtrates had much lower antioxidant activity and ACE-inhibitory activities.     

Occurrence and Diversity of Candida Genus in Marine Environments

A total of 317 yeast isolates from seawater,sediments,mud of salterns,guts of marine fishes and marine algae wereobtained.The results of routine identification and molecular characterization showed that six isolates among these marine yeastsbelonged to Candida genus as Candida interrnedia for YA01a,Candida parapsilosis for 3eA2,Candida quercitrusa for JHSb,Can-die rugosa for wl8,Candida zeylanoides for TJY13a,and Candida membranifaciens for W14-3.Isolates YA01a (Candida interme-die),wl8 (Candida rugosa),3eA2 (Candida parapsilosis),and JHSb (Candida quercitrusa) were found producing cell-bound lipase,while isolate W14-3 (Candida membranifaciens) producing riboflavin.These marine yeast Candida spp.Seem to have wide potentialapplications in biotechnology.     

不同蛋白源对军曹鱼幼鱼碳、氮稳定同位素分馏的影响

为研究饲料中不同蛋白源对军曹鱼幼鱼碳、氮稳定同位素分馏的影响,配制3种等氮等能饲料。D1以鱼粉为蛋白源,D2和D3饲料中分别以啤酒酵母和玉米蛋白替代10%的鱼粉蛋白,投喂幼鱼24d。结果表明,啤酒酵母和玉米蛋白替代10%的鱼粉蛋白后,幼鱼的体质量增加率显著下降。随养殖时间的延长,所有处理组幼鱼的碳稳定同位素比率δ13C逐渐上升而氮稳定同位素比率δ15N逐渐下降;虽然全鱼和肌肉δ15N的变化速度存在差异,但各饲料组全鱼和肌肉的δ13C和δ15N都在24d后与饲料达到平衡。当饲料中10%的鱼粉蛋白被啤酒酵母和玉米蛋白替代之后,幼鱼肌肉和全鱼样品与饲料相比的碳同位素富集Δ13C值下降,而氮同位素富集Δ15N值则上升。其中全鱼Δ13C从4.19‰分别下降到3.94‰和3.63‰,肌肉Δ13C从4.46‰分别下降到3.98‰和3.67‰;全鱼Δ15N从0.18‰分别增加到0.88‰和0.94‰,肌肉Δ15N从0.18‰分别增加到0.74‰和0.87‰。军曹鱼在摄食3种不同蛋白源饲料时,其全鱼和肌肉的Δ13C和Δ15N的变化趋势相似,但全鱼δ15N的变化速度慢于肌肉。据此可推断,肌肉可在生态学营养级研究(长时间尺度)中代表军曹鱼的碳、氮同位素特征;但在代谢生理学研究中(短时间尺度),肌肉就无法准确反映军曹鱼全鱼的δ15N变化过程。     

中国明对虾血蓝蛋白C末端片段在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

为研究中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血蓝蛋白C末端(FcHC-C)的抗菌功能,将血蓝蛋白基因FcHC的2个C末端基因片段连接到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建酵母表达载体pPIC9K/FcHC-C。该载体经SalI酶切后,采用PEG法转化毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)。转化子经过PCR鉴定后,阳性克隆通过含有G418的YPD平板筛选,获得高拷贝重组子。重组毕赤酵母利用甲醇诱导表达目的基因。经Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,利用酵母工程菌成功表达了血蓝蛋白C末端片段(rFcHC-C1和rFcHC-C2)。抑菌活性鉴定实验结果显示,重组蛋白rFcHC-C1和rFcHC-C2作为阴离子抗菌肽具有抗真菌和抗细菌的活性。     

沼泽生红冬孢酵母的固体培养条件

以麸皮、豆粕和红糖为基料,固态培养沼泽生红冬孢酵母(Rhodosporidium paludigenum),研究沼泽生红冬孢酵母的固体培养条件和培养基。结果表明,优化的固体培养基和培养条件为:豆粕、麸皮和红糖的最佳质量比为3∶1∶1;每10 g基料,各组分添加量分别为酵母膏0.2 g,硫酸铵0.2 g,水12 mL,接种1.5 mL菌液;培养基厚度2.35 cm。在此条件下培养60 h,红酵母的细胞产量最高达101.9×108g-1。     

壳聚糖酶基因在解脂耶氏酵母中的表达及重组酶性质研究

为构建高效表达壳聚糖酶工程菌株,以Microbacteriumsp.基因组为模板扩增壳聚糖酶基因,目的基因与表达载体pINA1317连接构建重组质粒,重组质粒NotⅠ酶切线性化后转化解脂耶氏酵母Y.liPolytica Po1h。所得结果为PCR扩增得到约1000bp的特异性片段,序列分析表明含有壳聚糖酶全长基因,开放阅读框801bp,编码266个氨基酸残基。转化子酶活力为10.4U/mL,是原菌株酶活力的3.15倍。重组蛋白经DEAE-Sepharose FF分离纯化,达到电泳纯,SDS-PAGE显示单一条带,分子量约41kDa。重组酶反应最适温度为45℃,最适pH为5.6,Km和Vmax分别是0.926mg/mL和6.15U/mL。质谱分析酶解产物主要为三糖和五糖。实现了壳聚糖酶在解脂耶氏酵母中的分泌表达,为壳聚糖酶的工业化生产奠定了理论基础。