裂殖壶菌pks2基因启动子序列扩增及其活性分析

针对目前裂殖壶菌(Aurantiochytrium limacinum)基因工程相关研究中,对内源启动子的了解和利用仍处在初步阶段的现状,本研究从裂殖壶菌中产多不饱和脂肪酸的主要途径聚酮合酶(PKS)途径出发,利用热不对称交错PCR技术(TAIL-PCR),针对pks2基因扩增出了未知的5’端侧翼序列,初步分析得到pks2基因启动子序列,并分别在原核宿主大肠杆菌(Escherichia coli)与真核宿主酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中对启动子活性做进一步研究,发现了pks2基因启动子可以在大肠杆菌和酿酒酵母中有效启动绿色荧光蛋白的表达,而且pks2基因启动子相较于pks1、pks3基因启动子具有更高的启动活性,显现出了其作为启动子用于基因工程研究的可操作性。     

植物激素对裂殖壶菌生长与DHA含量的影响

研究了6种植物激素(BA、GA、KT、IBA、NAA和IAA)对裂殖壶菌OUC175生长和DHA含量的影响。结果显示,在适宜的浓度条件下,6种植物激素都能不同程度提高裂殖壶菌生长速度和DHA含量,但是浓度过高产生抑制作用。6种植物激素对裂殖壶菌生物量和DHA含量的适宜浓度分别是:BA,3mg/L;KT,10mg/L;GA,1mg/L;IBA,3mg/L;NAA,6mg/L;IAA,3mg/L。BA在添加量3mg/L时,裂殖壶菌的生物量和DHA含量分别比对照组提高27.1%和30.0%。     

两栖动物的天堂在哪里？

在世界范围内，两栖动物面临的两大威胁：栖息地被破坏和一种名为壶菌病的真菌性疾病。一篇近期发表在《国家科学院院刊》的论文指出，要同时解决这两大威胁并不容易，因为减轻其中的一个威胁会导致另一个威胁的加剧。     

培养条件对破囊壶菌生长及其产DHA的影响

探讨了培养温度、pH、光照、种龄、接种量以及培养时间等培养条件对破囊壶菌ThraustochytriumroseumMF2生长及其产DHA的影响。结果表明 ,T roseumMF2生长及其产DHA的适宜条件为 :培养温度 2 5℃、初始pH值 6～ 7、种龄 4 8h、接种量 4 %、培养时间 4d ,生物量达到 1 0 4g L ,DHA产量达到1 2 6 6mg L。     

Effects of Culture Conditions on Growth and Docosahexaenoic Acid Production from Schizochytrium limacinum

The effects of temperature, initial pH, salinity of culture medium, and carbon and nitrogen sources on growth and docosahexaenoic acid （C22：6 n-3, DHA） production from Schizochytrium limacinum OUC88 were investigated in the present study. The results revealed that the optimal temperature, initial pH and salinity level of the medium for DHA production were 23 ℃, 7.0 and 18, respectively. Glucose was proved the best carbon source for the growth and DHA production from S. limacinum. Among the nitrogen sources tested, soybean cake hydrolysate, a cheap by-product, was found to be effective for the accumulation of DHA in S. limacinum cells. In addition, increasing the concentration of carbon sources in the medium caused a significant increase in cell biomass; however, accumulation of DHA in cells was mainly stimulated by the ratio of C/N in the medium. Under the optimal culture conditions, the maximum DHA yield achieved in flasks was 4.08 g L^-1 after 5 d of cultivation     

裂殖壶菌OUC88 及10 个派生菌株18S rDNA 基因克隆和分析

用PCR方法从裂殖壶菌Schizochytrium limacinum OUC88及以其为出发菌株经紫外诱变筛选的10个菌株中扩增出18S rDNA基因序列(1751bp到1758bp)进行序列测定,以上序列已登录GenBank(HM042904-HM042914)并与已登录的裂殖壶菌属5条18S rDNA序列比对分析。结果表明,S.limacinum OUC88以及10个派生菌株间18S rDNA的遗传距离是0.000~0.013,与Schizochytrium sp.FJU-512 18S rDNA(GenBank No.AY758384)的同源性最高,为98%~99%;与S.limacinum(GenBank No.AB022107)的同源性为96%;与同属异种S.mangrovei(GenBank No.DQ100293)只有93%的同源性。并运用序列比对分析和MEGA4.0系统进化树,结果显示种内诱变产生的细微变异小于同属内不同物种之间的变异。本研究除了为裂殖壶菌这种重要的经济海洋真菌提供分子生物学资料以外,同时表明18S rDNA序列不仅在分子分类上是一个重要的标志,也可分析由突变引起的物种内细微的遗传变异。     

裂殖壶菌诱变筛选的研究

首次采用紫外诱变和喹禾灵筛选的方法,选育出2株二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)含量高的裂殖壶菌(Schizochytrium)突变菌株OUC002和OUC007,其中OUC002生物量(6.82g·d-1·L-1)和DHA含量(15.31%),分别比对照菌株OUC168提高8.08%和13.74%;OUC007生物量(7.04g·d-1·L-1)和DHA含量(17.33%),比对照菌株分别提高11.57%和28.75%。通过GC-MS(气质联用)对OUC007脂肪酸组成进行分析,DHA含量达到脂肪酸的37.28%。本研究为裂殖壶菌的发酵生产提供了性状优良的菌种,并为裂殖壶菌菌种选育提供了新方法。     

海洋微生物发酵生产廿二碳六烯酸(综述)

廿二碳六烯酸（ＤＨＡ）对人体健康有重要影响。目前ＤＨＡ主要分离纯化自海洋鱼油,但存在诸多不利因素。研究表明海洋微生物具有大规模工业化生产ＤＨＡ的潜力。本文综述了近年来在ＤＨＡ生产菌种选育和发酵条件调控等方面取得的进展。     

Thraustochytrium caudivorum——一种香港牡蛎新型原生生物寄生虫

破囊壶菌(Thraustochytrids)是一类具有分解作用的海洋异养原生生物。研究表明破囊壶菌可对软体动物、海洋扁虫类造成消耗性疾病。本研究从发病的牡蛎鳃组织中分离出一种未在牡蛎中记录过的破囊壶菌寄生虫,经形态学及分子生物学分析后,鉴定为一种破囊壶菌寄生虫Thraustochytriu caudivorum。利用倒置显微镜和激光共聚焦超高分辨系统观察到T.caudivorum的生活史可分为游动孢子、营养细胞、孢子囊和变形虫四个阶段。游动孢子沉降成营养细胞,营养细胞再通过二分裂或形成孢子囊的方式释放不动的和可游动的孢子。破囊壶菌的形态大小变化迥异,本研究利用流式细胞仪和共聚焦系统探究了不同盐度对细胞大小的影响。结果表明,随盐度增大,体积小的细胞占比增多;在盐度为15 ppt时,细胞增殖缓慢,体积变大;而在盐度为20和25 ppt时,细胞体积变小,增殖速率加快。25 ppt盐度条件下,游动孢子数目最多。本研究首次从香港牡蛎鳃组织中分离出T. caudivorum寄生虫,并确立了其与破囊壶菌其他属之间的系统发育关系。     

培养条件对破囊壶菌生长及其产DHA的影响

探讨了培养温度，pH、光照，种龄，接种量以及培养时间等培养条件对破囊壶菌Thraustochytrium roseum MF2生长及其产DHA的影响，结果表明，T.roseum MF2生长及其产DHA的适宜条件为：培养温度25摄氏度，初始pH值6－7，种龄48h，接种量4％，培养时间4d，生物量达到10．4g/L,DHA产量达到1266mg/L。