温石棉通过活性氧激活线粒体通路诱导A549细胞凋亡的机制研究

探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在温石棉激活线粒体通路诱导A549凋亡中的作用。采用不同浓度温石棉粉尘染毒人肺上皮细胞(A549)后,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)预处理前后的细胞凋亡率、胞内ROS水平及线粒体膜电位,Western Blot法检测各组细胞半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、p53蛋白表达水平。实验结果显示,温石棉可降低A549细胞存活率,呈现时间-剂量效应关系;NAC可显著减少胞内ROS水平、阻止线粒体膜电位下降,并下调caspase-3、p53蛋白的表达水平,抑制部分细胞凋亡的发生。表明ROS可通过诱导p53蛋白过表达,激活线粒体凋亡通路,诱导A549细胞发生凋亡。     

螺旋藻多糖对肿瘤细胞生长及Hela细胞早期凋亡作用的实验研究

采用MTT法(四甲基偶氮唑盐比色法)研究了钝顶螺旋藻多糖(PSP)对Hela细胞及HepG2细胞生长的抑制作用。结果表明,随PSP浓度及培养时间的增加,肿瘤细胞存活率逐渐降低,抑制率逐渐增加,以PSP40 mg/L作用72 h最为显著。应用Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测了早期Hela细胞凋亡,未经PSP处理的正常Hela细胞凋亡细胞极少,经PSP处理的细胞,凋亡细胞的百分比明显高于正常对照组,其作用随着剂量的增加和时间的延长而增强,具有量效关系和时效关系。结果说明PSP的抗肿瘤机制,除了诱导肿瘤细胞凋亡,还存在细胞毒性等其他机制,是多种机制共同作用的结果。     

凋亡细胞的吞噬清除

吞噬清除是后生动物大多数凋亡细胞的共同命运。凋亡细胞如果不被有效及时清除,它们就会发生次级的细胞坏死,细胞核膜和细胞核裂解,细胞解体,释放出有毒内容物,导致严重炎症和狼疮样自身免疫疾病的发生。据估计人体内每天有上亿个细胞凋亡而死,但用组化方法只能检测到极少数凋亡细胞,说明人体对凋亡细胞清除效率很高。新近,对凋亡细胞吞噬清除分子机制的研究取得长足进展。本文主要就吞噬信号及其识别、传导和凋亡细胞的吞噬作简要概述。     

Salt stress induced apoptotic-like changes in Thellungiella halophila

With a view of studying programmed cell death （PCD） in a halophytic plant at the molecular level, we report here that apop-totic-like changes are induced by NaCl stress in Thellungiella halophila. The dose of 300 mM NaCl induced some apoptotic-like features in Thellungiella halophila cells, including the retraction of the plasma membrane from the cell wall, nuclear condensation, DNA laddering and the release of cytochrome c accompanying the increase of caspase 3-like protease activity. This process re-sulted in ultrastructural changes of mitochondria and Golgi bodies, and the appearance of autophagic vacuoles. This suggests that T. halophila suspension cell culture is an ideal system for studying severe salt stress-induced plant PCD. The results indicate that 300 mM NaCl stress-induced programmed cell death in T. halophila cells is similar to apoptosis and mitochondria play an impor-tant role in the early stage of plant PCD.     

真海鞘根索和被囊乙醇提取物抑癌活性成分的分离及其作用机制研究

为了获得高效、毒副作用小的抗肿瘤生物活性成分,本研究以真海鞘(Halocynthia roretzi)根索及被囊为原材料,通过乙醇提取方法筛选具有抗肿瘤活性的天然产物。真海鞘根索被囊乙醇提取物采用硅胶柱层析分离后得到具有癌细胞毒性的有效组分ST-Ⅱ。随后采用制备级硅胶层析板继续分离得到9个组分,细胞增殖实验表明其中的ST-Ⅱ-Ⅱ组分能高效抑制多种人源癌细胞的增殖,而对正常细胞(L929)无明显细胞毒性。采用制备液相分离ST-Ⅱ-Ⅱ得到9个组分,其中ST-Ⅱ-Ⅱ-Ⅸ组分具有显著癌细胞毒性。¹H NMR谱,¹H-¹H COSY谱初步推测ST-Ⅱ-Ⅱ-Ⅸ为结构新颖的酯类化合物。为了阐释真海鞘根索被囊乙醇提取物的作用机制,本研究中发现ST-Ⅱ-Ⅱ处理后的HepG2细胞的凋亡比例较对照组显著升高,同时其活性氧水平显著提高,而线粒体膜电位则显著降低,促细胞凋亡蛋白Bax和抑癌蛋白p53表达水平显著增加,抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达水平显著降低,表明ST-Ⅱ-Ⅱ通过线粒体凋亡通路抑制HepG2细胞增殖。本研究结果表明真海鞘根索和被...     

海洋微生物抗肿瘤活性菌株的分级组合筛选

为探索如何快速获取活性菌株的筛选模式 ,组合使用海虾生物致死法和tsFT2 10细胞的流式细胞术筛选模型 ,对从青岛前海和胶州湾潮间带海泥、动植物样品中分离的 162株海洋微生物 ,进行了抗肿瘤活性的分级组合筛选。经海虾生物致死法一级初筛 ,得到活性菌株 5 8株 (LC50 <5 0 0 μg/mL) ,阳性率为 3 5 .8%。对初筛有效的 5 8株菌利用流式细胞术筛选模型进行二级复筛 ,得到对tsFT2 10细胞有各种活性的活性菌株共 2 5株 ,阳性率为复筛菌株数的 43 .1%、初筛菌株总数的 15 .4% ,其中 ,诱发细胞坏死伴有凋亡诱导活性的菌株 7株 (占总菌株的 4.3 % ) ,具有细胞周期抑制活性的菌株 18株 (占总菌株的 11.1% )。该分级组合筛选模式与流式细胞术筛选模型的单独筛选模式相比 ,无漏筛 ,具有成本低、速度快、宜于大规模筛选等特点。     

羟基红花黄色素A对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用

为探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35诱导的神经元样PC12细胞凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制,采用Aβ_(25-35)(20μmol/L)诱导PC12细胞凋亡建立AD细胞模型,以不同浓度HSYA(20,40,80μmol/L)对抗干预,使用形态学观察法及Hoechst染色法检测各组PC12细胞凋亡形态,MTT法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,同时应用RT-PCR检测细胞PUMA m RNA的表达变化。结果表明,HSYA可维持PC12细胞及其突触的正常形态,提高细胞存活率,明显抑制细胞凋亡,下调促凋亡蛋白PUMA m RNA的表达,与Aβ_(25-35)组差异均有统计学意义(P0.01)。HSYA可明显对抗Aβ引发的神经元样PC12细胞损伤,其保护作用机制与下调PUMA m RNA的表达量有关。     

海洋微藻的体外抗肿瘤活性初筛

采用小鼠乳腺癌细胞株tsFT210的细胞周期抑制、细胞凋亡诱导、细胞坏死以及对卤虫的毒性为活性指标,对48种海洋微藻的甲醇提取物的抗肿瘤活性进行了筛选。结果表明,以卤虫毒性为活性指标时,9种海洋微藻显示了不同程度的抗肿瘤活性,以tsFT210为筛选模型时,也有9种具有抗肿瘤活性,其中3种为明显的细胞凋亡诱导活性、2种为细胞坏死性活性、1种为G2/M期抑制活性,因此有必要进行开拓海洋微藻药用新资源的研究。     

三氯生对雌性斑马鱼肝胰脏凋亡相关基因表达的影响

【目的】研究三氯生(TCS)对雌性硬骨鱼类肝胰脏损伤的相关分子机制。【方法】采用半静态水体接触染毒法,将雌性斑马鱼(Danio rerio)暴露于0、0.017、0.034、0.068 mg/L的TCS溶液42 d,采用普通PCR和实时荧光定量PCR技术测定雌性斑马鱼肝胰脏凋亡相关基因(Bcl-2、p53、MDM2、Bax)的表达情况。【结果】0.017~0.068 mg/L组的雌性斑马鱼肝胰脏Bcl-2、MDM2和Bax基因的表达极显著下调(P<0.01),p53基因的表达极显著上调(P<0.01)。【结论】0.017~0.068 mg/L的TCS显著影响雌性斑马鱼肝胰脏凋亡相关基因的表达,促进雌性斑马鱼肝胰脏细胞凋亡的发生。     

文蛤多肽体外对人肺癌A549细胞的抑制作用

我们已从文蛤肉中提取得到1种具有抗癌活性的多肽，命名为Mer2．本文报道Mer2对体外培养的肺癌A549细胞的生物学效应．采用溴化二苯偶氮盐（MTT）法检测Mer2对肺癌A549细胞的抑制效果，并应用细胞形态观察法、Hoechst荧光染色和流式细胞术等方法，探讨了Mer2对细胞形态、细胞周期的影响．结果表明，Mer2对体外培养的肺癌A549细胞的生长有较强的抑制作用，对作用含量和时间均具有一定的依赖性．Met2使细胞形态发生明显变化，明显地出现凋亡峰，但并没有出现明显细胞周期阻滞现象．这表明文蛤多肽可能通过诱导细胞凋亡从而抑制癌细胞的生长．