毛蚶人工育苗技术

根据对毛蚶性腺发育、产卵孵化、浮游幼虫及稚贝习性等的研究，初步探索了其人工育苗中主要技术环节。2龄毛蚶全为雄性或雌雄同体，3龄以上群体雌性占70％以上。26．6～27．4℃，受精卵22h发育到D形幼虫；26．5～23．0℃，D形幼虫经过15天发育到眼点幼虫；25．O～20．0℃，投附着基、13天左右稚贝壳长达到600μm时，可以出池到室外进行中间育成。     

Comparative research on karyotype in three species of Arcidae

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南海毛蚶形态特征对体重的相关分析

随机选取同龄南海毛蚶Scapharca subcrenata雌性62只、雄性59只,测量壳长、壳厚、壳高、后闭壳肌直径、放射肋数及活体重。采用通径分析方法研究南海毛蚶5个形态特征对体重的总效应,并以综合决定系数为确定形态性状重要性的准则。结果表明,两性中壳厚、壳高和壳长与体重均为正相关(p<0.01),直接和间接途径都不是体重的限制因素。壳厚、壳高的平均综合决定系数分别为0.423和0.412,是影响体重最主要因素且都具有育种意义。     

毛蚶天津群体形态性状对体质量的影响研究

为探讨形态性状对体质量的影响,指导毛蚶的选育,以毛蚶天津群体为研究对象,测量壳长、壳宽、壳高、体质量,并进行统计分析。结果表明,壳宽是体质量的主要影响因子,其与体质量的相关系数为0.953,直接作用为0.505,间接作用为0.448,壳长、壳高间接作用分别为0.483、0.480,综合决定系数为0.706 6。毛蚶体质量多元回归方程为Y=-40.8+0.438X1+1.124X2+0.469X3,R2=0.924;以壳宽为自变量,体质量回归方程为:Y=5.443×10-3X22.519,R2=0.937。     

Ficolin在毛蚶抗弧菌感染中的作用

Ficolin是一类含FBG结构域的蛋白,在动物免疫防御中发挥重要作用。无脊椎动物中,Ficolin主要作为模式识别受体和免疫效应分子发挥免疫功能。本研究从毛蚶中克隆获得一条Ficolin基因(命名为SsFic1),该基因编码区序列长度为897 bp,编码298个氨基酸,推测的蛋白含有典型的FBG结构域和Coiled coil结构域,但未发现胶原样结构域。SsFic1的mRNA在毛蚶各组织中广泛分布,其中在肝胰腺和鳃中表达丰度较高,但SsFic1转录产物在卵细胞和四细胞期未检测到,说明该基因不是母源性免疫基因。副溶血弧菌和脂多糖、葡聚糖等免疫刺激物均可诱导SsFic1显著上调表达。利用RNAi技术抑制SsFic1基因表达,酚氧化酶激活因子PAF和补体相关基因(C1qDC、补体C3和Fic3)的表达量及CAT、SOD和PO的酶活力均显著下降,而TEP、C1q2和Fic2等基因的表达显著上调。敲降SsFic1表达后,感染副溶血弧菌后毛蚶血细胞数量和吞噬能力均显著低于对照组,这也是RNAi实验组毛蚶死亡率和血细胞凋亡率显著升高的原因。综上,SsFic1可能通过调控补体通路和酚氧化酶原激活通路参与毛蚶免疫防御反应,这对贝类免疫学研究及抗病新品系的选育具有重要意义。     

毛蚶受精和早期卵裂过程核行为的荧光显微镜观察

利用Hoechst33258染色、荧光显微镜观察方法,对毛蚶受精和早期卵裂过程中核行为的细胞学变化进行了详细观察.结果表明,毛蚶成熟未受精卵呈卵圆形,卵径为52.909±2.092μm,核相处于第一次成熟分裂中期.在水温为26±1℃条件下进行受精,在受精后15~18、20~25 min,受精卵先后排出第一、第二极体,完成第一次和第二次成熟分裂;受精后30 min左右,雌、雄性原核形成;受精后35 min,雌、雄性原核各自形成染色体组,在卵子中央发生联合,染色体共同排列在纺锤体的赤道板上,形成第一次有丝分裂的中期分裂相;受精后40 min左右,受精卵进行第一次卵裂,形成2个大小不等的卵裂球;受精后55~60 min,受精卵完成第二次卵裂,形成1大3小4个卵裂球.另外,在研究中还发现了极少量的多精受精、多极分离等异常细胞学现象,对其成因及机制进行了分析和探讨.     

毛蚶血浆中抗菌蛋白的纯化及抗菌活性研究

采用硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25柱脱盐和Bio—gel P-10柱层析等方法,从毛蚶(Scapharca subcrenata)血浆中分离纯化出了抗菌作用较强的蛋白组分。结果表明,该抗菌蛋白组分对供试革兰氏阳性细菌即金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)和四联微球菌(Micrococcus tetragenus)具有较强的抑菌活性,而对供试革兰氏阴性细菌即大肠杆菌(Escherichia coli)、普通变形菌(Proteus vulgaris)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)无抑菌活性;对供试真菌尖镰孢(Fusarium oxysporum)、细链格孢(Alternaria tenuis)、黑曲霉(Aspergillus niger)和灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的菌丝生长有一定的抑制作用,对柑桔青霉(Penicillium citrinum)和松球壳孢菌(Sphaeropsis sapinea)无抑菌作用。性质试验表明,该抗菌蛋白组分具有很好的热稳定性,120℃处理30min其抑菌活性仍保持85％以上,对胰蛋白酶和蛋白酶K不敏感。     

盐度对毛蚶(Arca subcrenata Lischke)呼吸与代谢的影响

在实验室的条件下.研究盐度(16、24、32、40)对不同规格(A:(50.79±3.24)cm,B:(42.24±0.78)cm,C:(34.82±1.51)cm)的毛蚶(Arca subcrenata Lischke)耗氧率(R_0)(mg·g~(-1)·h~(-1))、排氨率(R_n)(μg·g~(-1)·h~(-1))的影响。实验表明:在实验盐度(16～40)范围内,毛蚶的耗氧率(R_0)和排氨率(R_n)与软组织干质量(0.27～1.81g)呈幂指数关系,符合公式R= aW~b,其单位体重的耗氧率和排氨率在盐度为32时达到最大,而后随着盐度的升高其值逐渐减小。     

菲和Cd2+单一及复合污染对毛蚶氧化胁迫效应的比较

采用半静态染毒实验研究了菲和Cd²⁺单一及复合污染下胁迫9 d和清水释放2 d过程中毛蚶体内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)含量和谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性的变化。结果表明,菲和Cd²⁺单独胁迫能诱导毛蚶体内ROS含量的增加及GSH含量、GST活性的降低,且随染毒浓度的增加,对各指标影响愈明显,存在剂量-效应关系。毛蚶体内GSH和GST的变化趋势具有一致性。菲和Cd²⁺复合污染对毛蚶体内的氧化胁迫效应整体大于二者单独污染。在清水释放阶段,单一及复合污染胁迫组各指标均能恢复至对照组水平。表明毛蚶体内抗氧化系统适合作为监测海洋多环芳烃和重金属复合污染的生物标志物。     

Isolation and Biochemical Characteristics Analyses of Phenoloxidases (POs) in Three Cultured Mollusk Species

Phenoloxidases(POs)are a group of copper proteins including tyrosinase,catecholase and laccase,which play crucial roles in the innate immune response of mollusks.In this research,POs were studied in cultured mollusk species,including scallop Chla-mys farreri,abalone Haliotis discus hannai and clam Scapharca subcrenata.The POs were isolated from hemocytes using linear-gradient native-PAGE combined with catechol staining.The PO activities and their characters were investigated.The molecular mass of PO in C.farreri was 576 kDa,and it was 228 kDa in H.discus hannai.In S.subcrenata,four POs were detected and their mole-cular masses were 391 kDa,206 kDa,174 kDa and<67 kDa,which were named as 391-PO,206-PO,174-PO and s-PO,respectively.Ki-netic analyses indicated that all of the POs,except for 391-PO had higher affinity to L-DOPA and catechol than to hydroquinone and dopamine.However,all of the POs failed to oxidize tyrosine.The effects of divalent metal ions on POs’activities were assayed,in-cluding Fe²⁺,Mg²⁺,Zn²⁺,Mn²⁺,Cu²⁺and Ca²⁺from FeCl₂,MgSO₄,ZnSO₄,MnCl₂,CuSO₄and CaCl₂.The POs were inhibited by Fe²⁺at all determined concentrations.Additionally,the inhibition assay showed that all of the POs were inhibited by cysteine,ascorbic acid,sodium sulfite,citric acid,ethylenediaminetetraacetic acid disodium(EDTA)and sodium diethyldithiocarbamate(DETC).The inhibition effects of critric acid and EDTA are dose-dependent.H.discus hannai PO and 391-PO were slightly inhibited by sodium azide,and H.discus hannai PO,391-PO and 174-PO were slightly inhibited by thiourea.In conclusion,the POs in the three cultured mollusks are copper-containing laccase-type phenoloxidases with similar biochemical characteristics even though their molecular masses are different.