环介导恒温扩增技术快速检测米氏凯伦藻方法的建立

米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi,Hansen)属于裸甲藻目(Gymnodiniales),裸甲藻科(Gymnodi-niaceae),凯伦藻属(Karenia)。它能产生溶血性(hemolytic)毒素和鱼毒(ichthyotoxins),溶解鱼类细胞,破坏鱼鳃组织结构,使鱼类无法正常呼吸而窒息死亡[1]。近年来,米氏凯伦藻引起的赤潮在世界各海域屡次发生,日本海域,墨西哥湾,新西兰、韩国、苏格兰和澳大利亚海域都有米氏凯伦藻引发赤潮的报道,对渔业造成很大损失[2]。     

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利用环介导恒温扩增（LAMP）技术成功检测了米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)基因，并对其反应程序和反应体系进行了优化，建立起一种简单快速的微藻检测技术。利用本实验优化体系对米氏凯伦藻进行了LAMP扩增，得到了理想的扩增产物，同时以其他8种藻类为阴性对照实验，只有米氏凯伦藻为特异性扩增，其他藻类均呈现阴性反应。另外，对扩增终产物进一步进行酶切分析，并与以F3和B3为引物PCR扩增的片段相比较，均与预期结果相吻合。采用2种方法进行阳性反应检测，一是阳性反应管内可见白色焦磷酸镁沉淀，二是LAMP产物与SYBR Green I反应呈现绿色。这种技术简单快速，有望应用到赤潮藻类的现场检测，在赤潮的预测预报中发挥强大作用。