RAPD标记鉴别红鳍东方鲀和假睛东方鲀种群的初步研究

用ＲＡＰＤ技术对东方纯属（Ｆｕｇｕ）的红鳍东方鲀（Ｆｕｇｕ　ｒｕｂｒｉｐｅｓ）和假睛东方鲀（Ｆｕｇｕｐｓｅｕｄｏｍｍｕｓ）共三个群体进行分析,经２０个随机引物扩增,得到每一个体的多态片段。比较所有图谱,没有发现能够鉴别三个群体的特异性谱带;而且采自日本的红鳍东方纯与采自中国的红鳍东方鲀的电泳图谱基本相似。结果还表明,红鳍东方纯与假睛东方鲀电泳图谱的差异也甚小,说明二者的亲缘关系非常接近,这与以前用同工酶进行分析的结果相一致（王可玲等,１９８４）,     

黄条鰤MSTN基因的克隆及其在早期发育中的表达特征

为解析肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因在黄条鰤(Seriola aureovittata)生长发育过程中作用机制。本研究采用cDNA末端快速扩增法,克隆了黄条鰤MSTN基因的全长cDNA序列,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对MSTN mRNA在黄条鰤不同组织、胚胎发育过程以及仔稚幼鱼发育过程中的差异表达特征进行了研究。序列分析结果显示,MSTN基因全长cDNA为1828 bp,开放阅读框为1131 bp,编码了376个氨基酸。RT-qPCR分析表明,在检测的脑、垂体、肝脏、肌肉、脾脏、肾脏、鳃、心脏、胃、肠、头肾组织中MSTN mRNA均有表达,其在肌肉中表达量最高(P<0.05)。MSTN mRNA在胚体下包2/3时期至孵化期表达量显著升高,且在孵化期达到峰值(P<0.05)。MSTN mRNA在孵化后3天前表达量显著升高(P<0.05),在第20天降低至较低水平,25天后表达量再次显著升高,在第30天达到峰值(P<0.05)。研究结果首次揭示了MSTN基因在黄条鰤的胚胎及早期生长发育过程中发挥着重要作用,本研究为开展黄条鰤繁养殖、育种提供了理论参考。     

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)早期发育阶段的摄食特性及生长研究

采用实验生态学方法，研究半滑舌鳎早期发育阶段的摄食特性及生长特性。结果表明，半滑舌鳎初孵仔鱼在23℃水温条件下，2—3日龄开口摄食，开口后投喂轮虫。孵化后12日龄，全长达到8—9mm左右，可摄食卤虫无节幼体。随着仔稚鱼的发育及摄食强度的增强，表现出越来越明显的摄食节律。6日龄仔鱼在24h内均有不同程度的摄食，相对来说9：00、12：00、15：00、18：00为其摄食率的高峰。16日龄稚鱼的摄食节律已出现较明显趋势，9：00、15：00为其摄食率的高峰。26日龄营底栖生活后稚鱼，由浮游生活方式变为底栖生活方式，摄食率的高峰出现在18：00、24：00。半滑舌鳎的捕食能力随其生长逐渐增强，6日龄仔鱼的平均摄食强度在摄食率高峰之后的2—3h内达到最高，出现在12：00、18：00；16日龄稚鱼在10：00—17：00期间平均摄食强度相对较大。26日龄稚鱼，捕食能力明显增强，伴随着摄食率高峰的出现，平均摄食强度也分别在18：00和24：00达到高峰。随着生活方式的转变，半滑舌鳎摄食节律有着明显的变化：早期的浮游生活阶段，以白天摄食为主，摄食高峰出现在白天；营底栖生活阶段半滑舌鳎转为夜间摄食，摄食高峰出现在夜间。半滑舌鳎不同发育阶段的日平均摄食率分别为：6日龄仔鱼65％，16日龄稚鱼39．7％，26日龄稚鱼11％。随着仔稚鱼的发育，个体生长表现出越来越明显的差异。     

盐度对牙鲆非特异性免疫功能的影响

实验以健康牙鲆成鱼为研究对象，分别饲养于盐度为40，30(对照组)，20的海水中，以牙鲆血清的凝血活性、溶菌酶含量以及补体因子C3含量为指标，研究盐度对牙鲆非特异性免疫功能的影响。结果表明，盐度增加或降低3d后血清凝血活性升高4倍，并一直保持至12d不变；溶菌酶含量先是升高，在第5天达到高峰后又逐渐降低，至第12天的含量反而略低于对照组；C3的含量在第一天取样时就比对照组有了很大的增长，随后逐渐下降，在第7天后恢复正常。盐度变化导致牙鲆非特异性免疫因子变化，说明在养殖生产中维持稳定环境极为重要。     

外源激素诱导对条斑星鲽(Verasper moseri) 精子质量的影响

采用注射外源激素——鲑鱼促性腺激素释放激素类似物(sGnRHa)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)的诱导方法,研究了外源激素对条斑星鲽雄鱼精子质量的影响。结果表明:外源sGnRHa和HCG诱导后条斑星鲽精子质量明显提升,主要表现为精液粘稠度大为降低、精液流动性和液化能力增强、精子激活率和快速激活率显著提高、快速活动时间和精子寿命延长。同时,血浆性类固醇激素——睾酮(T)和雌二醇(E2)表达水平明显升高,在96h达到峰值。比较两种激素的诱导效果,以sGnRHa对雄鱼精子质量的改善效果为好,但与HCG无显著差异。本研究表明,缓释激素诱导可有效提升和改进条斑星鲽雄鱼的精子质量,研究结果对条斑星鲽人工繁育具有重要的指导意义。     

条石鲷促性腺激素α亚基的克隆与表达特性分析

采用同源性克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)方法,从条石鲷(Oplegnathidae fasciatus)垂体中获得了全长为897bp的GtHαcDNA序列,其中包含249bp的5′非编码区、399bp的开放阅读框和249bp的3′非编码区。该基因编码由132个氨基酸组成的前体蛋白,其中前38个氨基酸为信号肽,在第122和124Cys中间间隔了一个组氨酸(His),形成CXC型趋化因子的特征结构,肽链中包括10个保守Cys残基和2个N-糖基化位点。氨基酸同源性和进化分析表明,条石鲷GtHα与鲈形目鱼类的进化关系较近,与鲈形目鱼类GtHα的同源性为87%~98%,与其他脊椎动物GtHα的同源性为53%~87%。实时荧光定量PCR检测发现,GtHαmRNA在垂体、脑、性腺中的表达量较高,在心、肝脏、胃、肠、肌肉、幽门盲囊中微量表达,在脾脏、头肾、鳃、肾脏中不表达,其中在垂体中的表达量最高;周期表达发现:垂体中GtHαmRNA在卵巢发育的Ⅴ期达到最大值,卵巢中GtHαmRNA在卵巢发育的Ⅳ期达到最大值,而脑组织中GtHαmRNA在卵巢发育的Ⅴ期达到最低值,表明GtHα对卵母细胞发育的调控可能同时通过自分泌和旁分泌两种途径进行。本研究为条石鲷生殖调控机制及人工繁育技术研究提供了基础资料。     

条石鲷mPRα基因的cDNA克隆和表达模式分析

采用同源性克隆和末端快速扩增(RACE)方法,首次获得全长为1222bp的条石鲷膜孕激素受体α(mPRα)的cDNA序列。其开放阅读框为1060bp,编码了含353个氨基酸的蛋白,N端前16个氨基酸为信号肽。氨基酸序列比较分析发现其存在7个跨膜区域。其预测的蛋白质三级结构中存在着多个蛋白结合位点。同源性比较和进化分析表明,条石鲷mPRα与鲈形目鱼类mPRα聚为一支,进化关系较近,相似度达到95%以上。实时荧光定量PCR方法检测mPRα mRNA表达情况:发现mPRα mRNA在性成熟雌性条石鲷各组织均有表达,并在脑、垂体和卵巢组织中的表达较丰富。在条石鲷繁殖周期的脑和垂体组织中,mPRα mRNA的表达水平在卵巢发育的Ⅳ期达到最大值;在繁殖周期的卵巢组织中,mPRα mRNA的表达水平从卵巢发育Ⅲ期到Ⅴ期持续升高并且在Ⅴ期达到最大值(P0.05)。条石鲷雌鱼血清中雌二醇激素的含量变化在整个繁殖周期中差异显著(P0.05),在性腺发育Ⅲ期含量迅速升高并在Ⅳ期达到峰值。本研究为条石鲷卵巢成熟调控机制研究提供了基础参考资料。     

鱼类spexin系统鉴定及其生理功能研究

所有脊椎动物生殖均受下丘脑-垂体-性腺轴的调控,多种下丘脑神经肽参与了生殖调控过程。大多数神经肽具有促进生殖的功能,例如促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasinghormone,GnRH)、神经激肽B (neurokinin B, NKB)、神经肽Y (neuropeptide Y, NPY)、神经分泌素(secretoneurin, SN)、刺鼠相关蛋白(agouti-related peptide, AgRP)、甘丙肽(galanin, GAL)和吻素(kisspeptin, Kiss)。Spexin (SPX)是一种新型下丘脑神经肽,属于SPX/GAL/Kiss家族成员。SPX的成熟肽由14个氨基酸组成,该氨基酸序列在不同物种间高度保守。SPX可以激活GAL受体2和3 (GALR2/3)参与生殖、摄食等多种生理过程。本文围绕鱼类SPX基因鉴定、进化分析、组织分布、表达调控、生理功能以及信号转导机制等方面,简要总结鱼类SPX及其受体的研究进展,以期为后续深入研究提供参考。     

MS-222麻醉圆斑星鲽成鱼效果研究

不同水温(15℃、20℃和25℃)下、不同质量浓度的MS-222对圆斑星鲽成鱼的麻醉效果不同。根据鱼体在最终麻醉状态和复苏过程中的行为特征,分别把麻醉和复苏过程分为6个和4个时期。15℃、20℃和25℃时MS-222麻醉圆斑星鲽成鱼的有效质量浓度分别为180~300 mg/L、160~280 mg/L和150~230 mg/L。实验结果表明:高水温条件下成鱼进入麻醉状态所需麻醉剂浓度较低;15℃、20℃和25℃温度下在各自的有效质量浓度(180~300 mg/L1、60~280 mg/L和150~230 mg/L)范围内,浓度越高鱼体达到A4期的麻醉时间越短,但复苏时间无明显差异。随着水温的升高,同等麻醉浓度的麻醉剂对圆斑星鲽的麻醉效果逐渐增强。MS-222麻醉圆斑星鲽的效果好,鱼体入麻时间短、复苏快,安全边界宽,是一种理想的鱼用麻醉剂。