养殖牙鲆鳗弧菌疫苗的研究

以牙鲆病原性鳗弧菌M3为抗原,制备了细胞（CV）、细胞－胞外产物（CEV）、脂多糖（LPS）三种疫苗,通过浸泡和注射两种途径对牙鲆进行两次免疫,检测疫苗的免疫保护效果。免疫后4周可检测到免疫组牙鲆具有明显的凝集抗体效价,其中注射组效价显著高于浸泡组,而对照组变化不明显。与对照组相比,免疫组牙鲆获得良好的免疫保护力,其中注射免疫组高于浸泡组。在注射免疫途径中,以CEV的免疫保护效果最好;在浸泡免疫途径中,以CEV和LPS的免疫保护效果最好。结果表明鳗弧菌M3的细胞－胞外产物苗有显著的免疫保护作用。     

迟缓爱德华氏菌及其致病机理

迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是一种革兰氏阴性肠道病原菌,感染宿主范围广。在水产养殖生物中,该菌是鱼类(鳗、鲇、鲆等)、两栖类(蛙)、爬行类(鳖、鳄鱼)的重要致病菌。爱德华氏菌病(Edwardsiellosis)是水产养殖中最常见的传染病之一,影响了养殖生物的健康并对水产养殖业危害巨大。随着对迟缓爱德华氏菌致病性研究的深入,对该病原致病因子相关研究取得了一些进展。研究发现一些胞外酶和毒素与细菌的致病过程有关,相关的致病因子有溶血素、软骨素酶、皮下坏死毒素、过氧化氢酶等。这些致病因子参与了细菌的黏附、定殖、侵袭和在宿主…     

A VIBRIO ANGUILLARUM STRAIN ASSOCIATED WITH SKIN ULCER ON CULTURED FLOUNDER, PARALICHTHYS OLIVACEUS

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＩｎｃｒｅａｓｉｎｇａｔｔｅｎｔｉｏｎｗａｓｆｏｃｕｓｅｄｏｎｔｈｅｎｅｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙｏｆｍａｒｉｎｅｆｉｓｈｉｎＣｈｉｎａ ,ｂｅｃａｕｓｅｏｆｂａｃｔｅｒｉａａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｈｉｇｈｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｎｍａｒｉｎｅｆｉｓｈｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｅｃｏｎｏｍｉｃｌｏｓｓｔｏｆｉｓｈｆａｒｍｓ (Ｄｅｎｇｅｔａｌ.,1 996;Ｌｉｎｅｔａｌ.,1 999) .Ｖｉｂｒｉｏｇｅｎｕｓｂａｃｔｅｒｉａｈａｖｅｅｍｅｒｇｅｄａｓｔ…     

养殖牙鲆鱼苗腹水症病原菌的鉴定及系统发育学分析

从患腹水症养殖牙鲆鱼苗分离到一株细菌B17，人工感染实验证实春具有致病性。用Biolog-GN细菌鉴定系统对B17进行测试，发现其与参考菌株的相似性较低，不能进行鉴定。常规生化测试表明，B17具有弧菌属的特征，其表型特征与Vibrio splendidus非常相似。为了进一步明确菌株B17的分类学地位，测定了其16SrRNA基因序列，分析了相关细菌相应序列的同源性，构建了系统发生树，结果表明菌株B17与V. splendidus的亲缘关系最近。综合上述结果，菌株B17可鉴定为V.splendidus。     

从迟缓爱德华氏菌fosmid文库克隆编码寡肽透过酶的opp基因簇

从迟缓爱德华氏菌（Edwarclsiellatarda）LSE40 fosmid文库克隆到编码寡肽透过酶的opp基因簇。该基因簇全长6741bp，含有5个ORF，依次编码OppA—B-C-D-F5个蛋白；位于oppA翻译起始住点上游385bp处有一个推测的转录起始位点，在该转录起点的-35和-10区分别有TAGACA和TATATT两个特征性启动子序列；位于oppA和oppB的间隔区和oppF之后的非编码区各有一个茎环结构，推测分别为oppA和opp基因簇的转录终止子。氨基酸序列分析表明该基因簇编码的各个蛋白与同属细菌鲶鱼爱德华氏菌（E．ictaluri）对应的各个蛋白高度相似，相似性在96％～98％；与其他革兰氏阴性菌相似性在56％～89％；与革兰氏阳性菌的相似性在27％～53％。以细菌OppA的保守结构域SBP_bac_5构建系统发生树，结果显示E．tardaLSE40与同属细菌E．ictaluri的亲缘关系最近，与肠杆菌科细菌的亲缘关系较近，与革兰氏阳性细菌的亲缘关系较远，表明oppA的SBP_bac_5结构域可作为细菌分类鉴定的依据。opp基因簇的获取为深入了解E．tarda适应环境和宿主的生存机制奠定了基础。     

海水养殖鱼类鳗弧菌(Vibrio anguillarum)临床分离株的血清型和抗生素耐药谱

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是常见的海水鱼类病原菌,有23种血清型,其中O1—O3为主要的致病血清型。我国海水养殖鱼类鳗弧菌的血清型种类尚未明确。本研究对实验室分离和收集自海水养殖鱼类的31株鳗弧菌临床菌株进行了生理生化、16S r RNA基因序列、血清分型、抗生素敏感性的分析,旨在系统了解存在于我国海水养殖环境的鳗弧菌血清学型及耐药特征。首先用API ID32E生化反应鉴定系统对鳗弧菌进行生理生化鉴定,结果未能将待测菌株鉴定到种的水平;然后测定鳗弧菌的16S r RNA基因序列并构建系统发育树,结果显示所有分离株聚为一簇,与鳗弧菌有最近的亲缘关系(相似性99%—100%),据此可将临床菌株鉴定为鳗弧菌。以鳗弧菌O1—O5血清型标准菌株为O抗原制备兔抗血清,采用玻片凝集反应对鳗弧菌菌株进行血清学分析,结果显示属于O1、O2、O3、O5血清型菌株分别有16、5、3、1株,表明我国海水鱼类养殖存在3种血清型的致病性鳗弧菌,O1为主要流行的血清型。用ATB药敏检测系统检测鳗弧菌对28种抗生素的敏感性,结果显示菌株对7种抗生素(林可霉素、夫西地酸、甲硝唑、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、苯唑西林、青霉素)的耐药率为100%,对3种抗生素(红霉素、原始霉素、泰洛星)的耐药率为94.4%(34株),有83%以上的菌株(30株)对12种以上的抗生素产生耐药,表明我国海水鱼类养殖鳗弧菌普遍存在多重耐药性。研究结果为进一步揭示鳗弧菌的流行病学规律和防控弧菌病奠定了良好的基础。     

两株养殖大菱鲆体表出血病原菌的分离鉴定

从秦皇岛和胶南患出血病的大菱鲆(Scophthalmus maximus)肾脏中分别分离得到优势菌株MHK_2和JN,人工感染实验证实这两株菌对大菱鲆有较强的致病性,半数致死量(LD_(50))分别为6.30×10~3cfu/尾和2.51×10~4cfu/尾。对病原菌16s rDNA序列对比分析及进化树分析表明,MHK_2和JN与迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)高度一致。API ID32E快速鉴定结果表明,MHK_2和JN生理生化特征与非致病性迟缓爱德华氏菌标准菌株LSE_6一致,属于迟缓爱德华氏菌。经API ZYM酶活检测,MHK_2和JN的碱性磷酸盐酶和酸性磷酸酶活性明显高于LSE_6,这两项酶活特征有望作为区别致病性和非致病性迟缓爱德华氏菌的一个标准。     

Construction and characterization of a fosmid library for pathogenic bacterium <Emphasis Type="Italic">Vibrio anguillarum</Emphasis>

Vibrio anguillarum is a common bacterial pathogen in fish.However,little is known about its pathogenic mechanism,in part,because the entire genome has not been completely sequenced.We constructed a fosmid library for V.anguillarum containing 960 clones with an average insert size of 37.7 kb and 8.6-fold genome coverage.We characterized the library by end-sequencing 50 randomly selected clones.This generated 93 sequences with a total length of 57 485 bp covering 1.4% of the whole genome.Of these sequences,58...     

溶藻弧菌的PCR快速检测方法

为建立溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的PCR快速检测方法,本研究根据弧菌toxR基因的高变区序列设计1对扩增片段为161 bp的引物,进行了特异性和敏感性试验.结果表明该方法能特异地检测溶藻弧菌,每个PCR反应检测的敏感度为0.01 pg的DNA和3.7CFU的细菌.用溶藻弧菌人工感染大菱鲆,以建立的PCR方法检测感染鱼的肝、脾、肾阳性检出率为100%.该方法可用于对感染溶藻弧菌的水生动物疾病进行诊断.     

Cpx 对迟缓爱德华氏菌毒力的影响

迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是水产养殖动物常见病原菌.接合质粒表达系统(conjugative plasmid expression, Cpx)是G–菌的双组分调控系统.本研究构建了迟缓爱德华氏菌LSE40的cpx基因簇缺失突变株Δcpx,检测其对蓝曼龙(Trichogaster trichopterus)的毒力.结果显示以浸泡感染,Δcpx的毒力有所降低.以肌肉注射途径感染,Δcpx的半数致死量为8.6×105 cfu/mL毒力下降7.33倍.Δcpx在鱼体内的生存力显著下降(P<0.05).这些结果表明Cpx参与了迟缓爱德华氏菌的致病作用.