一株海水氨氧化细菌的系统发育分析

应用PCR技术扩增16S rRNA基因和amoA(ammonia monooxygenase subunit A)的基因片段,并测定其序列,对一株源于海水养殖水体的高效氨氧化细菌(ammonia-oxidizing bacteria,AOB)进行了系统发育分析。结果表明,经PCR扩增得到了1 098 bp的16S rRNA基因片段和491 bp的amoA基因片段,将其序列用NCBI-Blast软件在GenBank数据库中进行同源性检索后发现,该菌株的16S rRNA基因序列和amoA基因序列分别与亚硝化单胞菌Nitrosomonas sp.NS20的相对应基因片段相似性分别为98.4%和96.7%。在此基础上构建了系统发育树,表明用该菌株的16S rRNA基因片段和amoA基因片段构建的系统发育树均与亚硝化单胞菌属类聚在一起,结合该菌株形态和生理生化特性,鉴定该株氨氧化细菌属亚硝化单胞菌。     

中华鳖卵黄抗体的检测

用新鲜的中华弊卵提取卵黄粗提物，再与兔抗鳖ＩｇＭ抗血清反应，琼脂免疫扩散法发现鳖卵黄粗提物可与兔抗鳖ＩｇＭ的抗血清发生免疫沉淀反应，且效价可达１∶４，表明鳖卵黄中存在着抗体，进而用ＥＬＩＳＡ法测定到鳖卵黄中抗体的含量只有２４０．５μｇ／ｍＬ，明显低于血清中抗体的含量。因而认为中华鳖母源抗体可通过卵黄传递给稚鳖，使稚鳖在孵化后可获得较弱的被动免疫力以抵抗病原体的感染。     

水体中NH3-N对建鲤非特异性免疫功能的影响

用 0 .1、0 .5、1.0、2 .0和 5.0 mg/ L NH3- N分别刺激建鲤 10 d和 2 0 d后 ,测定了建鲤非特异性免疫指标 ,估测不同浓度的 NH3- N对建鲤非特异性免疫指标的影响。 0 .1、0 .5mg/ L的 NH3- N对建鲤NBT阳性细胞、溶菌酶活性无影响 ,1.0 mg/ L的 NH3- N可使 NBT阳性细胞数和溶菌酶活性降低 ,而2 .0和 5.0 mg/ L则使 NBT阳性细胞数和溶菌酶活性显著下降 ( P<0 .0 5)。这些结果表明水体中 0 .1、0 .5mg/ L的 NH3- N对建鲤非特异性免疫功能无影响 ,1.0 mg/ L的 NH3- N略有影响 ,而 2 .0和 5.0mg/ L的 NH3- N则明显降低了建鲤的非特异性免疫功能     

苯酚和十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼的急性毒性及安全评价

用苯酚和十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼进行急性毒性实验,以评价其在水环境中对奥尼罗非鱼的影响。研究表明:苯酚对奥尼罗非鱼的24、48、96 h的LC50分别为40.33、34.23、28.07 mg/L,十二烷基苯磺酸钠分别为10.06、9.14、8.48 mg/L;苯酚对奥尼罗非鱼SC及最大容许浓度MPC分别为2.807、0.281 mg/L,十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼SC为0.848 mg/L,最大容许浓度MPC为0.085 mg/L。     

一种复方中草药饲料添加剂在红笛鲷网箱养殖中的应用

将黄芪、当归、甘草和山楂等粉碎后按一定比例配伍制成复方中草药饲料添加剂后,按质量分数0.5%、1.0%、1.5%和2.0%添加到基础饲料中,连续投喂红笛鲷(体重234.95±19.26 g,体长24.76±1.42 cm)56 d,研究复合中草药制剂对红笛鲷生长、成活、免疫和抗病力的影响。结果表明,基础饲料中添加本复方中草药饲料添加剂能够显著促进红笛鲷的生长,增强其血清中的抗菌活力和溶菌酶活力,提高红笛鲷成活率及其对溶藻弧菌的免疫保护率,其中以添加1.5%(质量分数)和连续饲喂28 d效果为最佳(P<0.01)。     

水体中NH3—N对建鲤非特异性免疫功能的影响

用０．１、０．５、１．０、２．０和５．０ｍｇ／Ｌ ＮＨ３－Ｎ分别刺激建鲤１０ｄ后，测定了建鲤非特异性免疫指标，估测不同浓度的ＮＨ３－Ｎ对建鲤非特异性免疫指标的影响。０．１、０．５ｍｇ／Ｌ的ＮＨ３－Ｎ对建鲤ＮＢＴ阳性细胞、溶菌酶活性无影响，１．０ｍｇ／Ｌ的ＮＨ３－Ｎ可使ＮＢＴ阳性细胞数和溶菌酶活性降低，而２．０和５．０ｍｇ／Ｌ则使ＮＢＴ阳性细胞数和溶菌酶活性显著下降（Ｐ〈０．０５）。这些结果表明水体中０．１、０．５ｍｇ／Ｌ的ＮＨ３－Ｎ对建鲤非特异性免疫功能无影响，１．０ｍｇ／Ｌ的ＮＨ３－Ｎ略有影响，而２．０和５．０ｍｇ／Ｌ的ＮＨ３－Ｎ则明显降低了建鲤的非特异性免疫功能。     

草鱼呼肠孤病毒096vp7基因生物信息学分析及其酵母表达载体的构建

草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus, GCRV）是草鱼出血病的病原.从患病草鱼体内分离到一株草鱼呼肠孤病毒GCRV 096,经反转录PCR,克隆得GCRV 096 长度为855 bp 的vp7 基因,并分析该基因编码蛋白的特性.结果表明,同一基因型分离株VP7 蛋白间的差异不大,但不同基因型分离株VP7 蛋白间存在很大的差异.对GCRV 096 VP7 蛋白生物信息学分析表明,信号肽位点位于20 氨基酸处,且VP7 含有4个潜在的抗原决定簇.构建GCRV 096 vp7 基因的酵母表达载体pGBKT7-S10,并成功转化至酵母中.     

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)呼肠孤病毒(GCRV)VP6相互作用蛋白的筛选

为筛选与草鱼呼肠孤病毒GCRV096 VP6发生相互作用的宿主蛋白,先将VP6基因的PCR扩增产物,克隆至酵母表达载体p GBKT7以构建其诱饵质粒(p GBKT7-VP6);再将酵母菌Y2HGold(含p GBKT7-VP6)与酵母菌Y187[含草鱼肾脏细胞(CIK)c DNA文库质粒]进行人工诱导融合,然后经选择培养筛选阳性克隆。结果共筛选到4株阳性克隆,经测序、生物信息学分析,分别属于两条不同的核苷酸序列,其中之一所编码的产物与GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)同源性较高。可见,该酶极可能在GCRV096侵染宿主的初期发挥着重要作用。     

南极衣藻（Chlamydomonas sp.ICE-L）谷胱甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化

采用RT-PCR技术克隆南极衣藻GR基因ORF全长cDNA,然后经酶切、连接等步骤构建其原核表达载体;并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行了优化,以期获得较大量的酶蛋白。结果表明,将构建的原核表达载体pET-GR导入大肠杆菌BL21,可以高效表达融合蛋白;且表达的蛋白均以包涵体的形式存在;经SDS-PAGE电泳...     

苯酚对奥尼罗非鱼非特异性免疫指标的影响

采用水体中常见污染物——苯酚对奥尼罗非鱼进行刺激,研究不同浓度苯酚对奥尼罗非鱼非特异性免疫功能的影响。奥尼罗非鱼分别暴露于0.005、0.025、0.125、0.625、3.125 mg/L等5个浓度的苯酚中8周,每两周采集抗凝血液和血清,用于检测非特异性免疫指标。结果表明:暴露于低浓度苯酚组(0.005 mg/L和0.025 mg/L)的奥尼罗非鱼NBT(氯化硝基四氮唑蓝)阳性细胞数等非特异性免疫指标相对于对照组无显著性差异(P>0.05),中浓度苯酚组(0.125 mg/L和0.625 mg/L)和高浓度苯酚组(3.125mg/L)对罗非鱼非特异性免疫指标的影响存在显著的时间效应和剂量效应(P<0.05),可减少NBT阳性细胞数、抑制超氧化物歧化酶活力和抗菌活力;促使溶菌酶活力和溶菌酶含量先升后降。表明中高浓度苯酚组对奥尼罗非鱼具有明显的免疫毒性。