利用有益微生物改善养殖生态环境的研究

研究了噬菌蛭弧菌在实验室条件下对水产养殖中常见病菌的裂解能力及噬菌蛭弧菌和光合细菌对池塘生态环境的改善作用。结果表明 ,噬菌蛭菌对嗜水气单胞菌具有裂解作用 ,噬菌蛭弧菌和光合细菌结合使用对养殖环境具有明显的改善作用。 2 5d后实验组比对照组池塘中的细菌总数少 2个数量级 ,70d后实验组比对照组池塘中的细菌总数少 3个数量级 ;2 5d后对照组COD为 6 35mg L ,使用噬菌蛭弧菌浓度为 3、5、1 0mL m3 及光合细菌皆为 5mL m3 实验组的COD分别为 4 6 7、4 1 6、4 1 8mg L ;2 5d后对照组NH3 N为 0 4 9mg L ,使用噬菌蛭弧菌浓度为 3、5、1 0mL m3 及光合细菌皆为 5mL m3 实验组的NH3 N分别为 0 36、0 33、0 32mg L ,90d后对照组NH3 N为 0 4 1mg L ,使用噬菌蛭弧菌浓度为 3、5、1 0mL m3 及光合细菌皆为 5mL m3 实验组的NH3 N分别为 0 2 7、0 2 2、0 2 1mg L ;5 5d后对照组硫化物为0 0 1 1mg L ,使用噬菌蛭弧菌浓度为 3、5、1 0mL m3 及光合细菌皆为 5mL m3 实验组的硫化物分别为0 0 1 0、0 0 0 8、0 0 0 8mg L。     

噬菌弧菌N1对淡水和海水养殖水体细菌群落影响PCR-DGGE分析

【目的】研究噬菌弧菌Bacteriovorax sp. N1在一个投放周期内对淡水和海水养殖环境中细菌、弧菌总数及细菌群落结构的影响。【方法】自市售微生态制剂分离蛭弧菌N1并进行分子鉴定,测定其裂解效果,制备高浓度N1菌液分别投放至淡水红鲤鱼(red carp)和海水仿刺参(Apostichopus japonicus)养殖水体,采用细菌平板计数法及PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术分析48 h内水体环境中细菌、弧菌总数及细菌群落结构变化。【结果】经鉴定蛭弧菌N1为噬菌弧菌,其对大肠杆菌(Escherichia coli)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、黄海希瓦氏菌(Shewanella smarisflavi)、灿烂弧菌(Vibrio splendidus)、哈氏弧菌(Vibrio harveyi)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均有裂解效果。将噬菌弧菌N1投放进淡水和海水养殖环境的12～24 h,其能显著降低两种环境中弧菌含量(P 0.05)。DGGE分析显示添加噬菌弧菌N1后淡水组优势菌群弧菌属(Vibrio,a1)和不可培养杆菌属(Uncultured bacterium, a5)在12 h以后含量有明显的减少,假单胞菌属(Pseudomonas, a3)和红杆菌科Shimia属(Shimia, a6)菌含量增加。海水组优势菌群不可培养杆菌属(c2)菌在12 h时变成非优势菌群,而白杆菌属(Albirhodobacter,c1)增加成为优势菌群。噬菌弧菌N1在水中含量在24 h时降至最低。【结论】噬菌弧菌N1对海水和淡水环境中的弧菌属和不可培养杆菌属菌群有明显的裂解作用导致其含量下降,但也使假单胞菌属(Pseudomonas),红杆菌科Shimia属和白杆菌属(Albirhodobacter)菌群含量增加,但生物效应不明。为维持噬菌弧菌N1对弧菌的控制,需要24 h左右重新补充投放。     

水体中NH3-N对建鲤非特异性免疫功能的影响

用 0 .1、0 .5、1.0、2 .0和 5.0 mg/ L NH3- N分别刺激建鲤 10 d和 2 0 d后 ,测定了建鲤非特异性免疫指标 ,估测不同浓度的 NH3- N对建鲤非特异性免疫指标的影响。 0 .1、0 .5mg/ L的 NH3- N对建鲤NBT阳性细胞、溶菌酶活性无影响 ,1.0 mg/ L的 NH3- N可使 NBT阳性细胞数和溶菌酶活性降低 ,而2 .0和 5.0 mg/ L则使 NBT阳性细胞数和溶菌酶活性显著下降 ( P<0 .0 5)。这些结果表明水体中 0 .1、0 .5mg/ L的 NH3- N对建鲤非特异性免疫功能无影响 ,1.0 mg/ L的 NH3- N略有影响 ,而 2 .0和 5.0mg/ L的 NH3- N则明显降低了建鲤的非特异性免疫功能     

不同感染复数下海洋蛭弧菌DA5对溶藻弧菌的控制效率

【目的】研究宿主菌密度和感染复数对海洋蛭弧菌捕食弧菌效率的影响。【方法】以溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)zouA(下称"zouA")为宿主,通过海水共培养实验研究海洋蛭弧菌菌株DA5(下称"DA5")在初始宿主密度10~3~10~8 cfu/mL下24 h的生长,评估低感染复数和高感染复数下DA5对zouA 10 d的生物控制效果。【结果】DA5捕食所需最低zouA密度约为5×10~5 cfu/mL;在zouA密度≥10~6 cfu/mL时,DA5方对其发挥控制效应,且感染复数越高捕食效率越高,即使感染复数低至0.001,一定时间后DA5亦可有效控制zouA数量。而当初始zouA密度低至10~4 cfu/mL时,DA5需在感染复数≥100条件下方可显著控制zouA。【结论】宿主密度与感染复数均影响海洋蛭弧菌DA5对溶藻弧菌的控制效果。     

5种除草剂对白鲢鱼种急性毒性试验

以白鲢（Hypophthalmicthys molitris）为实验材料，研究常用除草剂对鱼类的毒性效应。结果表明：采用直线回归法求得的96h LC50值分别为：2，4-D丁酯0．185mg/L，可信限0．138～0．247mg／L；丁草胺0．080mg/L，可信限0．067～0．097mg/L；使它隆3．80mg/L，可信限2．68—5．40mg／L；艾割18．60mg／L，可信限14．80～23．32mg/L；嗪草酮108．80mg/L，可信限91．46～129．72mg／L。对鱼类安全浓度分别为0．019mg／L，0．38mg／L，0.008mg／L，1.86mg／L and 10．88mg／L。     

方斑东风螺两种养殖模式的比较

在室内水泥池，利用沙层自净养殖模式和直接铺沙养殖模式对不同规格的方斑东风螺（Babylonia areolata Link）进行了高密度养殖的研究。结果表明，沙层自净养殖模式养殖小螺、中螺、大螺组日均增重分别为0．031、0．088、0．098g／d，沙层NH4^＋-N最高含量ω分别为1．3、2．1、3．1mg,／L,H2S最高含量ω分别为0．03、0．07、0．14mg／L．各规格组东风螺保持正常生长和活动，成活率92．9％以上；直接铺沙养殖模式养殖小螺、中螺、大螺日均增重分别为：0．023、0．051、0．068g／d．成活率分别为95．2％、86．7％、84．9％，沙层NH4^＋-N最高含量ω达到13．7mg／L，H2S最高含量ω达到0．47mg／L，沙层底质恶化，东风螺活动异常、不摄食。可见，沙层自净养殖模式对方斑东风螺的生长、成活率、沙层水质控制效果显著，在一定程度上克服了直接铺沙养殖底质恶化问题。     

光合细菌对养殖水质及凡纳滨对虾抗病力的影响

在凡纳滨对虾养殖环境中人工引入不同浓度的光合细菌,监测氨氮、亚硝酸氮、化学需氧量的变化,15d后测定凡纳滨对虾的AKP、POD、PO、SOD、抗菌、溶菌活力,以及不同光合细菌浓度下凡纳滨对虾的成活率与体重增长率,研究光合细菌对水质和凡纳滨对虾抗病力的影响。结果表明,引入光合细菌可显著降低水体化学需氧量、氨氮含量,并抑制亚硝酸盐氮的产生,提高凡纳滨对虾的抗病力。当光合细菌投放浓度为3×103/mL时,水体中化学需氧量、氨态氮、亚硝酸盐氮含量的均值分别比对照组降低31.59%、43.42%、52.20%,差异显著(P<0.05);对虾的AKP、POD、PO、SOD、抗菌、溶菌活力分别比照组提高31.92%、72.29%、55.56%、31.61%、39.07%、69.51%,差异显著(P<0.05);成活率,体重增长率分别比对照组提高18.67%、34.03%,差异显著(P<0.05)。     

凡纳滨对虾高位池养殖系统的水质理化状况

对凡纳滨对虾高位养殖池水质环境状况进行了研究。结果表明，养殖期间虾池水体透明度前期较高，中后期较低；虾池pH变化在7．89-9．02之间，变化幅度较小。虾池水体悬浮物数量和CODMn随养殖时间延长而持续升高，变化范围分别为18．5—162．3mCL和3．52-14．58mg／L。虾池水体中营养盐各月份波动较大。无机氮的数量变化在0．206—1．621mg/L之间，含量逐渐升高，磷酸盐数量变化在0．009-0．067mg／L之间，含量逐渐下降。水环境中N、P比较高，平均为62．7。养殖水体中后期处于严重富营养化状态。     

溶藻弧菌免疫胶体金快速检测试纸条的制备

采用溶藻弧菌ATCC17749菌体作为抗原免疫新西兰大白兔,制备兔抗溶藻弧菌多克隆抗体;利用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金及胶体金-抗体结合物,并将其喷涂在玻璃纤维膜上冷冻干燥;在硝酸纤维素膜上包被兔抗溶藻弧菌多克隆抗体和羊抗兔IgG分别作为检测线和控制线;将处理后的玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜、样品垫及吸水纸组装成双抗夹心试纸条,并对试纸条灵敏度、特异性、稳定性进行评价。结果表明,制备的兔抗溶藻弧菌多克隆抗体的效价可达1∶512 000;胶体金溶胶的最佳制备条件为:加入1.8 mL 10 mg/mL的柠檬酸三钠,500 W微波炉中火加热10 min;试纸条检测线和质控线的抗体最佳包被量分别为8.0 mg/mL和1.0 mg/mL;试纸条检测灵敏度为1×106cfu/mL,特异性试验显示,试纸条与哈氏弧菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、美人鱼弧菌、弗氏弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等8株菌无交叉反应;稳定性试验表明,试纸在4℃干燥条件下能稳定保存5个月以上。制备的溶藻弧菌多克隆检测试纸条可灵敏、较特异地检测源自病鱼的溶藻弧菌,整个检测过程可在10 min内完成,适用于溶藻弧菌的快速检测。     

氨氮胁迫对马氏珠母贝免疫活性的影响

在实验室条件下探讨氨氮胁迫对马氏珠母贝(Pinctada martensii)血细胞密度、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)活性的影响。结果表明:1)不同浓度氨氮(1.25~40 mg/L)胁迫3 d后,马氏珠母贝血细胞密度随氨氮浓度的增加呈下降趋势,当氨氮浓度超过5 mg/L时血细胞密度较对照组明显下降,差异极显著(P<0.01);2)血清SOD活性随实验氨氮浓度(1.25~40 mg/L)的增加而明显下降,在较低氨氮浓度(1.25~5 mg/L)时,SOD活性高于对照组,氨氮浓度超过10 mg/L时,SOD活性低于对照组,各实验组SOD活性与对照组均存在极显著差异(P<0.01);3)当氨氮浓度为1.25~20 mg/L时,马氏珠母贝血清CAT活性随氨氮浓度的增加而升高,除氨氮1.25 mg/L组外,其余各实验组血清CAT活性较对照组极显著升高(P<0.01),当氨氮浓度为30~40 mg/L时,血清CAT活性呈急剧下降趋势,且低于对照组(P<0.01);4)马氏珠母贝血清LSZ活性随实验氨氮浓度的增加而降低,当氨氮浓度为10 mg/L以下时,血清LSZ活性高于对照组,当氨氮浓度为20 mg/L以上时,血清LSZ活性较对照组极显著降低(P<0.01);5)氨氮浓度为1.25~10 mg/L时,马氏珠母贝血清ACP活性随氨氮浓度的增加而升高,且高于对照组(P<0.01),当氨氮浓度超高20 mg/L时,马氏珠母贝血清ACP活性随氨氮浓度的增加急剧降低,且低于对照组(P<0.01)。     

九孔鲍养殖水体中产酶菌群的研究

为了解九孔鲍养殖环境中细菌生理菌群的生态作用，对分离自养殖水体的33株菌株的产酶能力和种类进行了研究。结果表明，具有分泌胞外蛋白酶、脂肪酶和纤维素酶能力的菌株分别为39．4％、57．6％和30．3％；在这33株菌中，产至少一种胞外酶的菌株比例高达63．6％。API鉴定结果表明，在有能力分泌胞外蛋白酶、脂肪酶和纤维素酶的菌株中，弧菌菌群所占的比例分别为46％、42％和40％，而其中河流弧菌又占各弧菌菌群比例的83．3％、62.5％和100％。充分阐明弧菌，尤其是河流弧菌为优势菌，在鲍鱼养殖微生物态中起的重要作用。     

副溶血弧菌噬菌体微胶囊的制备及在饵料中的应用

采用复相乳液法,以乙基纤维素为包囊材料,明胶溶液为保护液制取微胶囊,对副溶血弧菌噬菌体(Vibrio parahaemolyticus phage)进行固定化,制备噬菌体微胶囊。结果显示,乙基纤维素质量浓度为30 g/L,明胶质量浓度为20 g/L,搅拌速度为600 r/min,时间30 min,副溶血弧菌噬菌体悬液与乙基纤维素溶液的体积比为1∶3时,所得微胶囊有较好的噬菌体缓释性能,综合评价指数最高。对方斑东风螺(Babylonia areolata)饲以混有噬菌体微胶囊的饵料,当饵料中噬菌体微胶囊质量分数为1.0 g/kg时,与对照组比较,东风螺肠道宿主菌平均减少96%,水体中宿主菌减少72%,差异均有统计学意义(P0.05);以黏附剂按1.5 g/kg的剂量将噬菌体微胶囊黏附于对虾饵料,并投喂凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),对虾肠道的宿主菌比对照组平均减少86%,水体中宿主菌比对照组减少68%,差异均有统计学意义(P0.05)。微胶囊可有效控制宿主弧菌的在养殖体系的浓度,减少养殖动物弧菌病的产生。     

溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用

从患病凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内提取白斑综合征病毒(WSSV),PCR证实WSSV毒性,将病毒粗提液稀释10-2、10-3、10-4和10-5倍,攻毒实验表明,最佳攻毒剂量为10-4倍稀释液。对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05、0.10、0.15 mg/m L的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)肽聚糖,免疫24 h后感染WSSV,测定其免疫保护率和肝胰腺的免疫学指标,探讨溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾抗WSSV的影响。结果表明:对虾的保护率随着肽聚糖的浓度增大而增大,与对照组相比,0.05、0.10、0.15 mg/m L组的保护率分别为36.67%、46.67%、56.67%;实验组凡纳滨对虾肝胰腺中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合成酶(NOS)活力与对照组相比的差异有统计学意义(P0.01)。溶藻弧菌肽聚糖可有效增强凡纳滨对虾自身的非特殊性免疫能力,提高抗WSSV的能力。     

石油污染物的微生物降解

从炼油厂污水池底泥中富集、驯化、分离、筛选,得到4种优势石油降解菌。采用摇床培养,研究了各优势菌和混合菌对石油烃的降解性能。结果表明:4种菌和混合菌20 d可将初始质量浓度为10000 mg/L的石油烃依次降解90.8%、88.9%、57.8%、49.8%、91.2%;培养液中石油烃的半衰期依次为5.5、6、15、19、5 d。初步鉴定4种菌分别属:节细菌(Arthrobacter sp.)、芽胞杆菌(Bacillus sp.)、不动杆菌(Acinetobacter sp.)、不动杆菌(Acinetobacter sp.)。     

水产饲料中三聚氰胺检测方法的优化

通过对高效液相色谱法(HPLC)测定水产饲料中三聚氰胺含量的方法进行优化,得到最佳色谱条件和前处理方法,建立了水产饲料中三聚氰胺的检测方法。结果表明:以体积比8∶92的乙腈、庚烷磺酸钠离子对试剂为流动相,柱温40℃,流速1.2 mL/min,以波长236 nm检测;以提取液为18 mL50%(φ)乙腈水+1 mL乙酸锌+1 mL1mol/L盐酸,淋洗液3 mL水和3 mL甲醇,洗脱体积6 mL作样品前处理。三聚氰胺加标回收率为85%～100%,相对标准偏差(RSD)小于5%,线性范围为0.2 mg/L～5.0mg/L,相关系数0.999 8,方法检出限为0.2 mg/kg。     

徐闻珊瑚礁保护区营养盐时空分布特征

2006年8月(夏季)、2006年11月(秋季)、2007年2月(冬季)和2007年4月(春季)在徐闻珊瑚礁自然保护区灯楼角至流沙湾近岸海域调查徐闻珊瑚礁保护区的营养盐变化及空间分布特征。结果表明:徐闻珊瑚礁保护区水域溶解态无机氮以NO3--N为主,其含量超过总溶解无机氮的50%;各站点NO2--N含量相对较低,冬季NO3--N和NH4+-N含量均高于其它季节;无机磷含量在0mg/L～0.030mg/L之间变化;活性硅含量表现为夏秋季节高、冬春季节低;表层水体硝酸盐氮/无机磷原子比值(N/P)夏季较低,不存在无机磷受限情况,而冬季N/P整体较高,此时水体主要受无机磷限制。     

鱼汁、海泥抽出液和人尿对小环藻生长的影响

在室内条件下，通过单因子实验和正交实验的方法，研究了鱼汁、海泥抽出液和人尿对小环藻（Cyclotella sp．）种群生长的影响。结果表明，350mL的培养体积下，当鱼汁添加量为20mL时，小环藻生长效果最好，相对生长率（K）较对照组升高了33．3％，平均倍增时间（G）降低了34．9％，但随着浓度升高，藻细胞开始出现死亡。海泥抽出液添加量为20mL时，K值最大，较对照组增加35．6％，G值下降了25．15％。人尿添加量为10mL时，K值最大，较对照组增加17．9％，G值下降了15．77％。统计分析表明，鱼汁、海泥抽出液和人尿对小环藻实验种群的生长均有极显著影响。海泥抽出液对小环藻影响大，其次是鱼汁和人尿。正交实验表明，在鱼汁、海泥抽出液和人尿的添加量分别为2．5、15．0和1．0mL的组合实验组，小环藻的生长效果最好。     

近江牡蛎肠道细菌及其产酶能力

从近江牡蛎肠道中分离出21株菌，其中，9株为革兰阳性菌，12株革兰阴性菌。为寻找能分泌多种酶的有益微生物，研究了它们蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶的产酶能力。结果表明，有61．9％的菌株能分泌蛋白酶或淀粉酶(各有13株菌)；有52．4％的菌株能分泌脂肪酶(11株菌)；有33．3％的菌株能产纤维素酶(7株菌)。在这21株菌中，产4种酶的有5株菌，产3种酶的3株菌，产两种酶的5株菌，产1种酶的3株菌，不产酶的仅有5株菌。不产酶的菌株仅占细菌总数的23．8％，而各种产酶菌则高达76．2％，由此表明细菌在近江牡蛎对食饵消化过程的重要性。     

培养条件对破囊壶菌生长及其产DHA的影响

探讨了培养温度，pH、光照，种龄，接种量以及培养时间等培养条件对破囊壶菌Thraustochytrium roseum MF2生长及其产DHA的影响，结果表明，T.roseum MF2生长及其产DHA的适宜条件为：培养温度25摄氏度，初始pH值6－7，种龄48h，接种量4％，培养时间4d，生物量达到10．4g/L,DHA产量达到1266mg/L。     

斑节对虾白斑综合症杆状病毒感染的实验模式

在建立斑节对虾实验室养殖模式的基础上．对野外采集的有白斑综合症病毒(WSSV)病典型症状的斑节对虾初步纯化其病毒．并进行WSSV的PCR检测，得到WSSV的感染用样品。对健康斑节对虾分别进行浸浴感染，投喂感染和注射感染。对感染死亡个体进行WSSA的PCR检测和细菌检测，证实WSSV感染性和致死性。浸浴感染、投喂感染和注射感染的感染量分别为4mL／L、0．2g／10g虾体、1／2稀释液0．05mL／10g虾体，死亡开始时间分别为16d、42h、28h，三种感染模式最终死亡率100％．从开始死亡到全部死亡延续时间分别为15d、82h、44h。