褐藻酸降解菌的产酶条件研究

以海带病烂处分离到的别单胞菌属（Alkteromonas)的褐藻酸降解菌菌株A1为研究对象，在该菌的产酶条件进行了研究。结果表明，产酶的最适温度20℃，褐藻酸钠浓度（质量分数）0．5％－0．6％，pH7.5，盐度15，氮源为（NH4)2SO4，培养时间72h。     

褐藻酸降解菌的生长条件及其对海带的生理效应

为更好地了解海带病烂的发生机制，针对褐藻酸降解菌埃氏交替单胞菌（Altermonas espejiana）菌株A1的生长及产酶条件进行了初步研究，并用不同浓度的菌液对健康海带进行了感染试验，测定了其体内可溶性蛋白质和可溶性糖含量的变化。结果表明，该菌株生长和产酶的最适条件为：20℃，0．5％～0．6％褐藻酸钠，pH=7，5，氮源为（NH4）2S04，培养时间72h。此外，感染菌株A1后，海带体内可溶性蛋白质和可溶性糖的含量均增加，且随着感染菌液浓度的升高，海带体内可溶性蛋白质含量升高，而可溶性糖含量先升高后降低。     

褐藻酸降解菌的发酵培养及褐藻酸酶对褐藻细胞的解离作用

褐藻酸降解菌埃氏交替单胞菌菌株Ａ１０２发酵培养时褐藻酸酶形成条件研究表明，其产酶的培养基最适褐藻酸钠含量为０．３￣０．６％，氮源为０．５％的蛋白胨，ｐＨ７．５，装量是在５００ｍｌ三角瓶中装培养基２００ｍｌ。     

海藻工具酶研究I.褐藻酸降解菌的分离鉴定及其褐藻酸酶形成条件研究

海带、裙带菜病烂处分离得到５株褐藻酸降解菌，经鉴定属于埃氏交替单胞菌（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓｅｓｐｅｊｉａｎａ）（菌株Ａ１０１、Ａ１０２，Ａ１０３、Ａ１０５）、麦氏交替单胞菌（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓｍａｃｌｅｏｄｉｉ）（菌株Ａ１０４）．菌株Ａ１０２发酵培养时，褐藻酸形成条件的研究表明，培养基含０．３％～０．６％的褐藻酸钠，０．５％的蛋白胨，ｐＨ７．５，装量为５００ｃｍ３三角瓶装２００ｃｍ３培养基，在２５℃下培养１４４ｈ较为适宜。     

一株高效褐藻酸降解菌的筛选、鉴定及其发酵条件的优化

以褐藻酸钠为唯一碳源,从腐烂海带中筛选得到褐藻酸钠降解能力较强的菌株H4,经生理生化和16S rDNA序列分析鉴定该菌株属于交替单胞菌属(Alteromonas)。对菌株H4的发酵条件优化研究表明,H4的较优培养基组成为(w/v):褐藻酸钠0.6%、酵母粉0.5%、蛋白胨0.25%、NaCl 3%;较优培养条件为:培养温度28℃,初始pH7.5,接种量1.5%(v/v),培养时间48 h。Fe3+对交替单胞菌H4的产酶有明显的促进作用,这在其他褐藻酸裂解酶生产菌株中未见报道,而Cu2+对褐藻酸裂解酶的抑制作用高达45.78%。在优化后的培养条件下,粗酶液酶活达到146.45 U/mL,较优化前提高了39.4%。     

光和温度对叶绿素a和脱镁叶绿酸a降解的影响

叶绿素a（Chlorophylla）常被用做浮游植物生物量的指标,是海洋常现调查项目内容。叶绿素a并不稳定,它在高温或有光的条件下发生降解,影响了对其浓度的测定。本文研究了温度和光线对纯叶绿素a及其降解产物脱镁叶绿酸a（Phaeopharbidea）降解速度的影响,以期对在提取过程中减少叶绿素a的降解有所帮助。1村料和方法1.1材料叶绿素a：使用Sigma产品（安瓿瓶1mg装）。用90％丙酮溶解,稀释成一定浓度,－20℃黑暗中保存备用。脱镁叶绿酸a：将少许10％盐酸加入叶绿素a即为脱镁叶绿酸a。光照度计：北京师范大学光电仪器厂生产的ST-92型光照度…     

一种新的褐藻胶寡糖制备方法--氧化降解法

建立了一种新的褐藻胶寡糖的制备方法,即氧化降解法。通过褐藻胶来源的聚甘露糖醛酸(PM)在不同浓度的过氧化氢、不同温度和不同反应时间下降解优选降解条件。以包含3～11糖单体的寡糖混合物为目标产物,以相应的降解产物的平均分子质量为1500u为选择标准,获得氧化降解法的最佳条件：过氧化氢浓度5％,反应温度90℃,降解时间2h。以该条件降解PM获得的降解产物经圆二色谱、紫外光谱及红外光谱测定表明,制备的寡糖保持了甘露糖醛酸的结构特点。提示该方法可用于褐藻胶寡糖的制备。     

海带的碳酸钠消解过程动力学

以海带为原料,考察了消解反应温度、碳酸钠浓度、搅拌速度及海带块尺寸对消解反应动力学、褐藻胶收率及产品黏度的影响。结果表明,随温度、碳酸钠浓度、搅拌速度的升高,消解反应速度明显加快,褐藻胶提取速率随之增大。海带块大小对反应速率也存在一定的影响,海带块越小,褐藻酸钠提取反应速率越快。确定的较佳消解条件为：Na2C03浓度为0．5％,消解温度为60℃,搅拌速度200r／min,海带块尺寸为20mm。在此条件下,产品的产率可超过22％,黏度超过了20000mPa·S。研究结果为优化传统海带消解工艺,节约碱耗,缩短反应时间、提高产品收率和品质提供了参考。     

海水中苯系物的衰减及其微生物降解的贡献

以海水中7种苯系物为研究目标,利用吹扫捕集-气相色谱质谱分析方法准确测定海水中苯系物的含量,研究不同环境条件下海水中苯系物的挥发、降解等衰减过程,探讨海洋微生物对苯系物降解贡献率。结果表明,7种苯系物性质相似,在不同保存条件下,海水中苯系物各组分浓度随时间的变化规律基本一致。海水中苯系物的衰减过程受温度影响明显,室温23°C条件下比低温4°C条件下海水中苯系物衰减更快,低温4°C时苯系物衰减完毕时间约125h,而室温23°C时则为24h。天然海水中间二甲苯、邻二甲苯相对更容易挥发或降解,而苯乙烯、苯则相对滞后。敞口保存下天然海水中苯系物浓度的降低更多是挥发造成的,微生物降解贡献率相对较小;密封保存下以微生物厌氧降解为主,其对苯系物降解贡献率明显高于敞口保存,累计可达83%,室温23°C下微生物降解苯系物时间更短,但低温4°C下微生物降解苯系物更完全。在适宜的温度和密封条件下天然海水中微生物降解对于海水中苯系物的去除将起到更加重要的作用。     

褐藻酸降解菌对海带感染能力差异性分析

对分离得到的5株褐藻酸降解菌进行了感染海带的实验，确定5株菌均为海带病烂的致病菌。对其降解能力和感染能力的实验表明，5株菌对褐藻酸钠的降解能力存在差异，它们对海带感染能力的差异与其对褐藻酸钠的降解情况相类似，在褐藻酸降解菌的感染下，海带光合速率下降，感染能力强的菌株对光合作用的影响明显大于感染能力弱的菌株。     

天然海藻絮凝剂海藻酸钠回收带鱼(Trichiurus haumela)鱼糜漂洗液中蛋白质的研究

采用海藻酸钠絮凝剂法、双缩脲法、重铬酸钾回流氧化等方法,研究了回收带鱼鱼糜漂洗液中蛋白质的最佳条件,以期为鱼糜漂洗液蛋白质的利用提供参考。结果表明,海藻酸钠回收带鱼鱼糜漂洗液蛋白质的最佳条件为:海藻酸钠添加量为1.11mg/ml,鱼糜漂洗液蛋白浓度16.54mg/ml,pH4.6,温度4℃,处理时间20min;在此条件下蛋白质回收率达86.68%,COD去除率达58.67%。实验表明海藻酸钠对鱼糜漂洗液蛋白质去除效果非常显著。     

微泡菌QZHA1褐藻胶裂解酶MAAL1的酶学性质研究

为探究Microbulbifer sp. QZHA1褐藻胶裂解(Escherichia coli)酶MAAL1的酶学性质,将褐藻胶裂解酶基因maal1构建至pET-28a表达载体并利用大肠杆菌BL21(DE3)进行异源表达。研究发现：重组酶MAAL1与来源于Microbulbifer sp. ALW1菌株的褐藻胶裂解酶(WP＿23625014.1)同源性最高,为93.69%,且与PL7家族蛋白聚为一支;重组酶MAAL1最适温度为35℃,最适pH为7.5,在pH为5.5～10.5范围内保存24 h仍能保持60%以上的酶活力;MAAL1具备良好的耐有机溶剂特性,在测试的9种有机溶剂中,除异丙醇外,其他有机溶剂在添加量达到30%(体积分数)后,酶活力依然保持在59%以上;重组酶MAAL1最适条件下酶活力为4.3 U/mg,米氏常数(K_m)值为1.08 mg/mL,最大反应速率(V_max)为4.75 mg/(mL·min),催化常数(K_cat)值为4.52 s^-1;重组酶MAAL1对聚β-D-甘露糖醛酸(p...     

海洋脂肪酶ADM47601固定化方法的研究

采用海藻酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇和明胶等材料, 进行对脂肪酶ADM47601的固定化研究。结果表明, 使用壳聚糖固定化脂肪酶, 在最优条件为2% (W/V)壳聚糖, 10% NaOH, 1%乙酸, 0.25%戊二醛, 每克载体添加840U脂肪酶时, 最大固定化酶活力回收率为87.06%。使用海藻酸钠-明胶固定化脂肪, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为54.45%。使用聚乙烯醇固定化脂肪酶, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为33.22%。使用海藻酸钠固定化脂肪酶, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为17.11%。对比四种不同固定化酶方法, 脂肪酶活力回收率高度高低顺序为: 壳聚糖吸附交联法>海藻酸钠明胶协同包埋法>聚乙烯醇-硼酸法>海藻酸钠包埋法。     

钝顶螺旋藻藻胆体的简易制备及褐藻酸钠对其稳定性的保护作用

以钝顶螺旋藻为材料，用改进的简易方法分离得到完整藻胆体，室温最大荧光发射峰位于６８１ｎｍ，加水解离后最大荧光发射蓝移到６５５ｎｍ，Ｆ６８０有两个峰，分别位于６３８ｎｍ和６５０ｎｍ，从而表明藻胆是完整的。用４３６ｎｍ波长激发，没有出现Ｃｈｌａ的特征荧光峰，Ｆ７２０的荧光激发光谱，也没有出现Ｃｈｌａ的峰，表明藻胆体溶液中不含Ｃｈｌａ。在藻胆体溶液中加入１％的褐藻酸钠，室温下保存１５ｄ后，光谱特性没有变     

铁及超声辅助铁还原降解水中氯乙酸及其动力学研究

以二氯乙酸(DCAA)和三氯乙酸(TCAA)为目标污染物,研究了铁(Fe0)和超声辅助铁(US-Fe0)还原降解水溶液中氯乙酸,以及溶液初始pH值、Fe0投加量、反应温度、反应时间、氯乙酸初始浓度对降解率的影响,并对降解的动力学进行了初步研究。结果表明,Fe0还原氯乙酸的最佳条件是:pH值为4.0、铁投加量为4g·L-1,室温条件下反应16h。超声辅助对Fe0还原水中氯乙酸的反应具有显著促进作用。在初始浓度为50μg·L-1时,US-Fe0还原降解DCAA和TCAA的降解率分别为87.3%和82.0%。Fe0和US-Fe0还原降解氯乙酸均符合准一级反应动力学(对氯乙酸),降解的表观速率常数分别为1.03×10-3 s-1(Fe0还原DCAA)、5.70×10-3 s-1(US-Fe0还原DCAA)和5.63×10-4 s-1(Fe0还原TCAA)、2.58×10-3 s-1(US-Fe0还原TCAA)。TCAA脱氯生成DCAA是降解的速率控制步骤。     

低分子质量褐藻寡糖的高效酶法制备及其抗氧化活性评价

褐藻寡糖具有多种生理活性,本研究通过酶解与分级条件的优化,获得了低分子质量褐藻寡糖的酶法制备工艺,并在体外模型上评价了不同分子质量组分的抗氧化活性。结果表明,优化后的褐藻寡糖制备条件为:底物浓度1.20%,酶底比4.35 U/mg,酶解时间4 h。进一步采用乙醇沉淀和超滤分离后,获得了重均分子质量分别为0.84、1.40、2.25和34.56 k Da的4种组分,其得率分别为50.82%、5.15%、11.48%和12.00%。各组分均具有一定的还原能力,可有效清除DPPH和羟自由基,其中低分子质量组分A的抗氧化活性最为显著,其清除羟自由基的能力与维生素C相近。     

光助Fenton氧化法去除水中两种氯乙酸及其动力学研究

以二氯乙酸和三氯乙酸为目标污染物,研究了光助Fenton氧化去除水中卤乙酸的可行性及影响因素,并对其动力学进行了初步研究.结果表明,影响光助Fenton氧化的因素很多,氙灯功率500 W、H2O2和Fe2+投加量分别为5.0和1.0 mmol·L-1、pH=4.0反应60 min是所考察范围内的最佳降解条件,浓度为100 μg·L-1的二氯乙酸和三氯乙酸的降解率分别为90.32％、87.77％;在实际水质pH=7.0时,相同浓度的二氯乙酸和三氯乙酸的降解率分别为75.34％、68.80％.紫外辐射与Fenton氧化对二氯乙酸和三氯乙酸的降解具有协同效应.光助Fenton氧化对二氯乙酸和三氯乙酸的降解符合一级反应动力学,表观活化能分别为30.11、31.09 kJ·mo1-1,受温度影响不大.     

海洋石油降解菌群的固定化及石油降解特性

为克服岸滩溢油生物修复过程中海浪冲刷等不利环境对石油降解菌(群)岸滩定植的影响,本文利用聚乙烯醇(PVA)和海藻酸钠作为载体对石油降解菌群DC10进行固定化,通过研究细菌固定化微球的机械性能、传质性能及石油降解特性等参数,确定石油降解菌群的最优固定化条件。实验结果表明:6%PVA,2%海藻酸钠及0.5%活性炭制备的凝胶可以通过蠕动泵方便快捷制备细菌固定化微球,其粘度小、易成型、机械强度高。海洋石油降解分析表明,与游离菌体(FB)相比,固定化菌群12d石油降解率提高了近7%;GC-MS分析显示,石油烷烃和芳烃降解效果显著。实验证明,石油降解菌群DC10经过固定化处理,其石油降解活性提高,连续降解能力增强,该研究为溢油岸滩的生物修复提供新的技术方法。     

海带中昆布素的荧光定量检测及提取工艺优化

针对昆布素检测技术的难点,利用昆布素与苯胺蓝能特异性结合的特点,采用荧光分光光度计建立了昆布素含量的荧光快速检测方法。实验结果表明:NaOH浓度对昆布素立体结构影响较大,在昆布素解旋过程中加入70μL 3 mol/L的NaOH能使昆布素-苯胺蓝荧光复合物具有最大的荧光信号;通过三维荧光扫描,确定昆布素-苯胺蓝荧光复合物的最佳激发和发射波长分别为398 nm和502 nm,在此条件下昆布素-苯胺蓝荧光复合物浓度与其荧光值正相关(R2=0.999 4);方法学分析表明:该测定方法具有较高的精密度(RSD为2.52%)和稳定性(RSD为2.09%),检测范围为20~80 mg/L。基于所建立的昆布素含量快速检测方法,本文设计了有关提取温度、提取时间、pH以及乙醇浓度四个因素三个水平的正交试验对海带中昆布素的提取条件作了初步优化,结果表明:海带中昆布素的最佳提取条件是:置于稀盐酸(pH为1)溶液中于25℃下提取4 h,90%乙醇沉淀。     

荷电耐污染超滤膜分离、纯化海藻酸钠的研究

采用PAN(聚丙烯腈)、季胺化的PAN-CO-DMAEMA、DMF等混合溶液制备荷电耐污染超滤膜。在改进消化条件的基础上,对酸凝—酸化法提取海藻酸钠的工艺做了进一步优化。得到的较佳工艺条件为:先用1%甲醛溶液浸泡海带4h,用4%Na2CO3溶液常温消化3h后,用盐酸溶液沉淀出海藻酸,用1%Na2CO3中和海藻酸胶块,再用90mL浓度为10%的次氯酸钠溶液脱色1h,采用膜分离技术超滤后加入无水乙醇析出絮凝状海藻酸钠,最后烘干至恒重,粉碎得海藻酸钠成品。分析结果表明,海藻酸钠性征和得率均有明显改善。