一种新的中国对虾弧菌病原菌──产气弧菌

于１９９３年８月，从山东省昌邑县下营镇患败血病的中国对虾血淋巴内分离到多株细菌，其中２株人工感染证实为病原菌；经５０多项形态，生理，生化特性测试鉴定为产气弧菌Ｖｉｂｉｏｇａｚｏｇｅｎｅｓ。其主要特性为：革兰氏阴性，弧状，极生单鞭毛，产生红色素，氧化酶呈阳性，精氨酸双水解酶，赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶均为阴性，淀粉酶，明胶酶为阳性，硝酸盐还原阴性，利用木糖，水杨苷，山梨醇发酵葡萄糖产气，利用柠檬酸盐     

一株海洋发光细菌的分离鉴定及其发光条件的初步研究

从青岛近海海洋沉积物样品中分离出一株海洋发光细菌，命名为D40。经过形态观察以及一系列生理生化特征测试结果，确定这株菌属于弧菌属(Vibrio)的哈维氏发光弧菌(Vibrio harveyi)。同时对这株菌的发光条件和发光特点进行了初步研究，实验结果表明，细菌D40在PH7．5，温度30℃，NaCl浓度为3．0％时，发光强度最高，液体培养4h开始发光，6h后，发光达到峰值，持续发光时间可达19h。     

养殖近江牡蛎致病弧茵的分离与鉴定

从广东省疫区患病近江牡蛎Crassostrea ariakensis消化盲囊及血液中分离纯化出10株细菌，人工注射感染实验发现其中3株细菌注射组死亡率显著高于对照组。3株细菌均为革兰氏阴性，短杆状，能运动。常规生理生化和Biolog细菌鉴定系统测试结果表明，菌株A3G-2与溶藻弧菌Vibrio alginolyticus亲缘关系最近，菌株A2G-5B与解蛋白弧菌V．proteolyticus亲缘关系最近，菌株B1X-1与鲨鱼弧菌V．carchariae亲缘关系最近。为了进一步确定它们的分类学地位，分别测定了3株弧菌的16S rDNA序列，分析相关细菌相应序列的同源性，并构建系统进化树。结果表明，菌株A3G-2与溶藻弧菌亲缘关系最近，菌株A2G-5B与解蛋白弧菌亲缘关系最近，菌株B1X-1与鲨鱼弧菌亲缘关系最近。因此菌株A3G-2、A2G-5B和BIX-1分别被鉴定为溶藻弧菌、解蛋白弧菌和鲨鱼弧菌。组织病理观察发现患病牡蛎主要受损器官是消化盲囊，表现为腺泡管内壁吸收细胞崩解脱落，管腔扩大，进而管壁解体，消化盲囊出现大面积受损。     

南海中国沿海发光细菌的分离鉴定

对从南海中国沿海分得的119株海洋发光细菌作了广泛的表型特性测定,并采用Sokal和Michener的符合系数(Matching coetticient)及单连锁方法借助电子计算机对测定结果进行了数值分析。结果将119株南海分得的发光细菌及已知的典型菌株分成二大簇群,分别包括了鲾鱼发光杆菌和哈氏弧菌的典型菌株。根据这个结果并参比《伯杰氏系统细菌学手册》,将这两个簇群的菌株分别定名为鲾鱼发光杆菌Photobacterium leiognathi(85株)和哈氏弧菌Vibrio harveyi(34株)。     

中国对虾幼体致病菌哈维氏弧菌的分离及其生物学特性研究

于1996年4—5月,在青岛丰城地区一些对虾育苗场发生大规模爆发性传染病,主要感染中国对虾幼体,尤其是蚤状幼体。死亡率高达80％以上。从自然发病及人工感染患病濒死中国对虾幼体中分离出38株细菌,研究其形态特征,生理、生化特性及对中国对虾幼体的致病性。结果表明,38株分离物均为革兰氏阴性杆菌,菌体为杆状或短杆状,极生单鞭毛运动,不发光,氧化酶呈阳性,发酵葡萄糖产酸,TCBS平板上生长,菌落呈黄色或绿色,对弧菌抑制剂0／129（150g／ml）敏感,此均为弧菌属的典型特征,属于弧菌。其中26株细菌被归为同一类群,参照伯杰氏细菌学鉴定手册（1994年,第9版）鉴定表明,该菌同哈维氏弧菌（Vibrioharveyi）最为接近;另外,Biolog系统鉴定表明也为哈维氏弧菌,因此定名为哈维氏弧菌。利用浸泡感染法以2．5×103—2.5×107cfu／ml浓度的细菌感染不同发育时期（无节幼体期、蚤状期、糠虾期和仔虾期）的中国对虾幼体。结果表明,该病原菌主要感染中国对虾幼体的无节幼体晚期、蚤状期和糠虾早期并导致其大量死亡,而在仔虾期感染死亡率较低,并且2．5×104cfu／ml以上浓度的病原菌即可导致蚤状幼体严重感染死亡,由此可见,所分离的致病菌对中国对虾蚤状期幼体具有较强的致病力。人工感染试验结果     

检测海洋弧菌的酶联免疫吸附试验研究

研究建立中国对虾病原菌┐副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）快速检测技术。间接ＥＬＩＳＡ技术中的副溶血弧菌的特异抗血清由家兔制备，羊抗兔ＩｇＧ用碱性磷酸酶标记，酶的底物为对磷酸基硝基苯。将该技术标准化后，测定了抗血清与１３株其它副溶血弧菌菌株及２９株其它弧菌标准菌株的交叉反应，并进行了苗期对虾样品中副溶血弧菌的检测     

海水网箱养殖石斑鱼病原菌研究

从网箱养殖的石斑Ｅｐｉｎｅｐｈｙｅｌｕｓｓｐ．中分离出一种致病菌——创伤弧菌Ｖｉｂｒｉｏｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ。本文报道该病原菌的分离、形态、毒力、生理生化特性。该菌毒力较强，感染死亡率可达８０％以上。     

黄海发光细菌的分离鉴定

对从黄海中国近海分得的84株海洋发光细菌作了广泛的表型特性测定。测得结果借助电子计算机作了数值分析,根据菌株间的表型相似程度,所有菌株被分成三大簇群。对三个簇群的6株代表菌株的超氧化物歧化酶(SODs)作了凝胶双向扩散试验,结果6株菌分别属于弧菌属(Vibrio)和发光杆菌属(Photobacterium)二个属,与数值分析结果相符。3个簇群的菌株分别被定名为Photobacterium leiognathi,Vibrio fischeri和V.harveyi,均是首次在黄海发现。     

对虾发光病的病因学与病理学特征

对虾人工养殖中流行发光病，病因学研究证明为一种致病性亮弧菌Ｉｖｉｂｒｉｏｓｐｈｌｅｎｄｉｄｕｓ１所致细菌杆状，稍弯，大小为０．４－０．６×１．５μｍ，单极鞭毛，革兰氏染色阴性，对葡萄糖发酵产酸，氧化酶、接触酶、精氨酸双水解酶、淀粉酶均为阳性，对弧菌抑制剂０／１２９敏感，在弧菌选择培养基上生长良好。     

养殖近江牡蛎致病弧菌的分离与鉴定

从广东省疫区患病近江牡蛎Crassostrea ariakensis消化盲囊及血液中分离纯化出10株细菌,人工注射感染实验发现其中3株细菌注射组死亡率显著高于对照组.3株细菌均为革兰氏阴性,短杆状,能运动.常规生理生化和Biolog 细菌鉴定系统测试结果表明,菌株A3G-2与溶藻弧菌Vibrio alginolyticus亲缘关系最近,菌株A2G-5B与解蛋白弧菌V. proteolyticus亲缘关系最近,菌株B1X-1与鲨鱼弧菌V. carchariae亲缘关系最近.为了进一步确定它们的分类学地位,分别测定了3株弧菌的16S rDNA序列,分析相关细菌相应序列的同源性,并构建系统进化树.结果表明, 菌株A3G-2与溶藻弧菌亲缘关系最近,菌株A2G-5B与解蛋白弧菌亲缘关系最近,菌株B1X-1与鲨鱼弧菌亲缘关系最近.因此菌株A3G-2、A2G-5B 和B1X-1分别被鉴定为溶藻弧菌、解蛋白弧菌和鲨鱼弧菌.组织病理观察发现患病牡蛎主要受损器官是消化盲囊,表现为腺泡管内壁吸收细胞崩解脱落,管腔扩大,进而管壁解体,消化盲囊出现大面积受损.     

红鳍东方鲀(Takifugu rubrips)病原杀对虾弧菌的主要生物学特性研究

采用表观分类学及分子生物学方法,对从发病的养殖红鳍东方()中分离的细菌进行了主要生物学特性研究.主要包括形态特征、理化特性等较系统的表观分类学指征鉴定;同时对代表菌株进行了16S rRNA基因的分子鉴定,测定了16S rRNA基因序列、分析了相关细菌相应序列的同源性、构建了系统发生树;结果表明,分离菌为弧茵属(Vibrio Pacini 1954)的杀对虾弧菌(Vibrio penaeicidasp.nov.Ishimaru et al 1995).代表菌株(Hc051105-6株)16s rRNA基因序列长度(不包括引物结合区)为1443bp(GenBank登录号:EU073023),代表菌株(HC051105-8株)16S rRNA基因序列长度(不包括 引物结合区)为1450bp(GenBank登录号:Eu073024).择代表菌株做对健康红鳍东方鲀的人工感染试验,认为分离鉴定的杀对虾弧菌在被检红鳍东方鱼电病例具有一定的病原学意义.药敏试验结果显示,对供试37种抗菌药物中,在一些药物中存在耐药性的菌株间差异.     

牙鲆病原秦皇岛弧菌的血清型及荧光抗体检验

用分离于病(死)牙鲆(Paralichthys olivaceus L.)的一种新病原弧菌——秦皇岛弧菌(Vibrio qinhuangdaora sp.nov.)的代表菌株(HQ010712-1株),分别制备全菌(OK)及热处理(121℃作用1h)的菌体(O)免疫原,强化免疫接种家兔制备相应抗血清,对供试12株秦皇岛弧菌进行了血清型检定,结果表明均存在同种的K抗原和同种的O抗原(血清同源),其中O抗原具有强免疫原性、K抗原的免疫原性弱但具有强O凝集抑制作用;以相应OK抗血清为第一抗体,以标准的羊抗兔IgG荧光抗体为第二抗体,对12株秦皇岛弧菌的纯培养物及用代表菌株(HQ010712-1)人工感染病死牙鲆的肝组织进行了间接荧光抗体染色,结果显示了特异的荧光反应。     

Ecology of Vibrios in the Oliveri-Tindari Lagoon (Messina), Two-Year Study

Abstract. A two-year ecological study in the Oliveri-Tindari (Messina) brackish water ponds evaluated the quantitative and qualitative distribution of Vibrio species in relation to the physicochemical conditions of the ponds.
The evaluation of 204 samples shows a general relationship between the halophilic vibrios and water temperature. In particular this relationship is stronger for the Vibrio fraction able to grow at 37°C, i. e. , those species related to human infections. On the other hand, the halophilic vibrios show no relation with the index of fecal contamination.
The ecology of V. parahaemolyticus is discussed in relation to the salinity of Marinello pond.
The distribution of V. cholerae non O1, isolated from all ponds, shows that this microorganism can be considered as autochthonous in coastal environments.     

四种弧菌对中国对虾的致病性研究

１９９５年８月－１９９６年４月,采用注射感染、浸浴感染、创伤感染和投喂感染比较溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、弗尼斯弧菌及其胞外产物对中国对虾的致病性,测定它们的半致死浓度,观察弧菌感染引起的病理组织变化。结果表明,注射感染中,溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌和弗尼斯弧菌２４小时的半致死浓度（ＬＤ５０）分别是１．２×１０＾６,６．５×１０＾７,４．０×１０＾８,６．８×１０＾９（ＣＦＵ／ｍｌ）;４８小时     

大黄鱼病原弧菌拮抗菌筛选

用平板涂布法从集美海边分离到381株细菌,用平板划线法或点种法检验这些海洋细菌对两株病原弧菌(副溶血弧菌(Vibrio Parahaemolyticus)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的拮抗作用。从中挑选2株对海水养殖动物病原弧菌有较好拮抗作用的细菌,编号为GX75和GZ46。对拮抗菌(GX75和GZ46进行了抗菌谱测定,结果表明,GX75对9株指示菌中的副溶血弧菌、河流弧菌和坎普氏弧菌有较好的拮抗作用,GZ46对副溶血弧菌、溶藻弧菌和坎普氏弧菌有较好的桔抗作用。在营养肉汤中,测定了GX75和GZ46的抗菌作用,表明(GX75和GZ46对副溶血弧菌拮抗作用很明显。     

褐藻胶裂解酶产生菌Vibro sp．OY102的发酵条件优化

对海洋来源的Vibro sp．QY102的产褐藻胶裂解酶的发酵条件进行研究。结果表明，该菌株最适液体培养基成分为（w／v）：0．5％褐藻酸钠；0．4％蛋白胨；0．3％KH2PO4；0．7％K2HPO4·3H2O；2％NaCl；0．01％MgSO4·7H2O，pH=6．0。按3％的接种量接入培养基，30℃150r／min振荡培养120h，产酶达到10．2u／mL，为优化前的4．5倍。Mg^2＋是该菌株产酶所必需的，这在其他褐藻胶裂解酶生产菌株中未见报道。该菌株产酶发酵条件的研究，为褐藻胶裂解酶的大规模制备及应用奠定了基础。     

褐藻胶裂解酶产生菌Vibro sp.QY102的发酵条件优化

对海洋来源的Vibro sp.QY102的产褐藻胶裂解酶的发酵条件进行研究。结果表明,该菌株最适液体培养基成分为(w/v):0.5%褐藻酸钠;0.4%蛋白胨;0.3%KH2PO4;0.7%K2HPO4.3H2O;2%NaCl;0.01%MgSO4.7H2O,pH=6.0。按3%的接种量接入培养基,30℃150 r/min振荡培养120 h,产酶达到10.2 U/mL,为优化前的4.5倍。Mg2 是该菌株产酶所必需的,这在其他褐藻胶裂解酶生产菌株中未见报道。该菌株产酶发酵条件的研究,为褐藻胶裂解酶的大规模制备及应用奠定了基础。     

乳酸杆菌LH对几种水产养殖病原弧菌的抑制作用

为探明乳酸杆菌（Lactobacillus spp．）LH对水产养殖病害的生物防治功能，采用试管稀释法和平板抑菌圈检测法，探讨了乳酸杆菌LH代谢产物对沙蚕弧菌（Vibrio nereis）、哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）、溶藻弧菌（Vibrio alginolyicus）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、漂浮弧菌（Vibrio natriegen）的抑制能力，并在模拟养殖水体实验中探讨了乳酸杆菌LH对哈维弧菌的抑制效果．结果显示，乳酸杆菌LH培养12h的代谢产物没有抑菌活性，培养24～96h的代谢产物有明显抑菌活性，随着培养时间的延长，其代谢产物的抑菌活性增强；乳酸杆菌LH代谢产物对病原弧菌的最低抑菌浓度为8倍稀释液；在模拟养殖水体中，10^3个／cm^3乳酸杆菌LH即对哈维氏弧菌有明显的抑制作用，抑制作用随哈维氏弧菌菌量（10^3～10^6个／cm^3）的增大而减弱．结果表明乳酸杆菌LH对病原弧菌具有良好的抑制作用．     

4 种病原弧菌外膜蛋白的提取及抗原性初步分析

利用十二烷基磺酸钠抽提并结合超速离心的方法提取了鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、河口弧菌(V.aestuarianus)、霍乱弧菌(V.cholerae)和副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)4种致病性弧菌的主要外膜蛋白,通过SDS-PAGE分析比较4种弧菌主要外膜蛋白的组分。结果表明:4株弧菌的外膜蛋白电泳图谱一般可得到5～10条蛋白带,分子量多数集中在26~40 kD和48~85 kD。对所提取的4种弧菌主要外膜蛋白进行SDS-PAGE后,分别与自制的兔抗鳗弧菌血清、抗河口弧菌血清、抗副溶血弧菌血清进行Western-blotting印迹分析。结果显示每种全菌抗血清可与相应菌的外膜蛋白部分组分发生免疫反应,并与其他3种弧菌外膜蛋白的部分组分产生交叉免疫反应,这些反应条带分子量主要集中于30~48 kD之间。本研究为进一步研究致病性弧菌外膜蛋白免疫学特性提供参考。     

3种致病弧菌感染对大黄鱼7种酶活性的影响

大黄鱼溃疡病主要由3种致病弧菌引起:溶藻弧菌Vibrio alginolyticus、哈维弧菌V. harveyi和副溶血弧菌V. parahaemolyticus。为了解大黄鱼抗病原菌感染的免疫反应机理,对其疾病防御提供重要的理论基础,本实验将健康的大黄鱼随机分为3个实验组和1个对照组,分别注射0.2 mL的哈维弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌及灭菌生理盐水。在人工感染后的第0,1,2,4,7,10,13,16,20天分别采样,通过测定每组大黄鱼血清中7种免疫相关酶活性,比较这3种致病弧菌对大黄鱼影响的差异性。结果表明:在感染后的1～10 d,实验组大黄鱼血清中血清溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、髓过氧化物酶(MPO)的活性变化,总体表现为先升高、后降低再逐渐升高最后趋于-致的现象,且不同病原菌之间存在-定的时效差异。 碱性磷酸酶(AKP)对入侵体内的哈氏弧菌反应较敏感,ACP、POD和MPO对溶藻弧菌反应较敏感,LSZ和PO对副溶血弧菌反应较敏感。