3种海参的皂苷对血管内皮细胞作用的比较研究

比较研究了日本刺参(Apostichopus japonicus, A. japonicus)、北极刺参(Thelenata anax, T. anax)和菲律宾刺参(Pearsonothuria graeffei, P. graeffei)的皂苷对氧化损伤血管内皮细胞的作用.实验结果显示,对于正常血管内皮细胞,日本刺参皂苷无细胞毒作用,而北极刺参和菲律宾刺参皂苷具有显著的细胞毒作用.对于氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)氧化损伤的血管内皮细胞,日本刺参皂苷能显著提高细胞增殖活性(P<0.01),抑制其凋亡(P<0.01),而北极刺参和菲律宾刺参皂苷无显著影响.另外,3种海参的皂苷均能显著降低细胞内丙二醛(MDA)含量(P<0.01),但对细胞NOS活性和NO释放量无显著影响.提示日本刺参皂苷能够有效保护氧化损伤血管内皮细胞,对动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)的防治具有重要意义.而北极刺参和菲律宾刺参的皂苷对血管内皮细胞无保护作用.     

革皮氏海参皂苷对小鼠免疫功能的调节作用

从革皮氏海参(Pearsonothuria graeffei,P.graeffei)中提取海参皂苷,并探讨其对正常小鼠和免疫功能低下小鼠免疫功能的影响。结果表明,对于正常小鼠,革皮氏海参皂苷能显著提高小鼠的细胞免疫和非特异性免疫功能,显著增加小鼠的足跖增厚值(P0.05),促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力(P0.05)。对于免疫功能低下小鼠,革皮氏海参皂苷能显著提高小鼠的抗体形成细胞数和小鼠血清溶血素含量(P0.05,P0.01),促进小鼠的体液免疫功能;显著促进小鼠的迟发型变态反应,提高小鼠脾淋巴细胞的增殖能力(P0.01),提高小鼠的细胞免疫功能;显著促进小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数(P0.01),促进小鼠的非特异性免疫功能。提示革皮氏海参皂苷对小鼠具有显著的免疫调节作用。     

槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞体外增殖与凋亡的影响

目的：观察槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度的槲皮素作用于体外培养的MG-63细胞，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测槲皮素对MG-63细胞增殖的抑制能力，流式细胞术（FCM）检测槲皮素对MG-63细胞凋亡的影响。结果：槲皮素可显著抑制MG-63细胞增殖，具有明显剂量和时间依赖性；槲皮素可明显诱导MG-63细胞凋亡。结论：槲皮素能够抑制MG-63细胞增殖，诱导MG-63细胞凋亡。     

仿刺参水溶性海参皂苷的分离制备及抗真菌活性的研究

利用海洋生物资源进行天然抗真菌新药的开发,从冻干海参加工废液中提取了水溶性海参皂苷,并对其抗真菌活性进行了研究。采用大孔吸附树脂法提取水溶性海参皂苷,经Libermann Burchard反应等对提取物的性质进行鉴定后,利用管碟法对所得提取物的抗菌活性进行了测定,并利用琼脂稀释法测定了所得水溶性海参皂苷对6株供试真菌的最低抑菌浓度(MIC)。提取物在Molish反应、沉淀反应和泡沫实验中均为阳性,说明提取物中确含有皂苷类成分;在Libermann Burchard反应中,液体的颜色处在红色与紫色之间,显示提取物可能是1种三萜类皂苷。水溶性海参皂苷对6株供试真菌均具有显著的抑制作用,且在浓度为0.5~4 mg/mL的范围内,其抑菌活性与所用浓度之间呈明显的正相关性;在浓度为4 mg/mL时,水溶性海参皂苷对6株供试真菌抑制活性的大小依次为裂殖酵母菌、啤酒酵母菌、白色念珠菌、葡萄炭疽病原菌、黄瓜枯萎病原菌和黑曲霉,海参皂苷对6株真菌的MIC值依次分别为0.002,0.016,0.063,0.063,0.125,0.250 mg/mL。     

赤魟软骨粗提物的血管生成抑制活性定量分析

以赤魟软骨为原料,对赤魟软骨中新生血管抑制组分的提取方法及其生物学活性进行了初步研究。采用盐酸胍抽提、冷冻离心、透析、冷冻干燥等方法,得到分子量为3~300 kDa的活性组分,活性鉴定采用改进的Robert法观察赤魟软骨提取物对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的作用情况。赤魟软骨提取物活性给药组为质量分数为10%、1%、0.1%的甲基纤维素溶液,空白对照组为质量分数为10%的MC溶液,加样24 h后对各给药组样品给药部位进行形态学观察,并通过计算机图像分析软件原理编程进行血管数量统计。试验结果表明:赤魟软骨提取物具有抑制新生血管形成的作用,其活性与给药组质量分数成正比。且软骨血管生成抑制因子直接来源于动物组织,无明显毒副作用,在肿瘤治疗方面可能具有良好的应用前景。     

赤魟软骨血管生成抑制因子的分离纯化

确定了制备高纯度赤魟软骨血管生成抑制因子的纯化工艺,并通过胶原酶模型、CAM模型验证其生物学活性。正交实验确定了赤魟软骨组织抽提的最佳条件,抽提产率可达0.84%。丙酮分级沉淀对抽提产物进行粗分离,25~35%的丙酮分级产物的CAM血管生成抑制率达85%。优化离子交换层析、凝胶过滤、反相层析的条件,可进一步有效的获得高纯度的赤魟软骨血管生成抑制因子-I(DCAIF-I)。SDS-PAGE-考马斯亮蓝染色显示为一条带,分子量为62 kDa。活性验证结果表明,DCAIF-I对胶原酶具有一定的抑制活性,抑制率为36.3%,对CAM血管生成的抑制活性具有一定的剂量依赖关系。     

玻璃海鞘多肽的分离纯化及其抗血管生成活性

利用丙酮沉淀，SephadexG25柱层析、Superdex75快速蛋白纯化系统（FPLC）等分离手段，采用活性追踪的方法，从玻璃海鞘（Coina intestinalis）中分离纯化出抗血管生成多肽PCI，据保留时间计算其分子质量为1．8ku。PCI在50～90℃范围内有良好的热稳定性，多肽水解酶处理可引起活性丧失。四甲基偶氮唑盐比色（MTT）检测表明其对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）具有强烈的抑制作用，IC50为7．5mg／L。在斑马鱼（Danio rerio）胚胎体内实验中进一步表明，PCI在40mg／L的浓度下作用12h，斑马鱼胚胎新生血管生成受到显著抑制，肠下静脉血管长度为正常组的30％，斑马鱼胚胎血管生成率为正常组的45％。     

壳寡糖的抑瘤作用及其作用机制研究

研究不同浓度的壳寡糖(COS)对OS-RC-2肾转移瘤细胞的抑制作用及其作用机制。体外培养肾肿瘤细胞OSRC-2,MTT法、AO/EB染色和流式细胞仪检测COS对其增殖分化、凋亡和增殖周期的影响;建立小鼠OS-RC-2肾转移瘤模型,COS(50、100、300、500mg/kg)灌胃15d后取瘤块并计算抑瘤率;透射电镜观察细胞超微结构的变化;RT-PCR和免疫组化检测COS对肾转移瘤VEGFmRNA表达的影响。实验显示,100和300mg/L COS可明显抑制肾肿瘤细胞OXRC-2的增殖(F=69.21,q=11.32、19.35,P<0.05)并促进其凋亡(F=205.72,q=31.52、23.21,P<0.01),还可使细胞在G0/G1期比例明显增高,S期比例降低(x2=22.54,P<0.05)。100和300mg/kg的COS可有效抑制小鼠肿瘤的生长(F=148.39,q=25.05、15.10,P<0.05);并可使VEGFmRNA的表达明显减低(F=172.05,q=35.50、25.27,P<0.01)。镜下可见细胞出现多形性改变,核染色质边聚等。结果表明,COS可抑制OS-RC-2肾转移瘤的生长,其中100和300mg/kg剂量组抑瘤效果较佳。     

转鲑鱼降钙素基因酵母及RANKL对大鼠血管平滑肌细胞体外钙化的影响

观察核因子kB受体激活物配体(RANKL)对大鼠血管平滑肌细胞体外钙化的调节作用,以及转鲑鱼降钙素基因酵母对RANKL调节作用的影响.体外培养大鼠血管平滑肌细胞,建立体外血管平滑肌细胞钙化模型,在培养介质中分别加入RANKL及转鲑鱼降钙素基因酵母蛋白上清液,观察细胞钙沉积、细胞碱性磷酸酶活性及骨钙素的变化情况.结果表明,RANKL促进钙化培养的大鼠血管平滑肌细胞的钙沉积、细胞碱性磷酸酶活性及骨钙素的表达,而转鲑鱼降钙素基因酵母能够抑制RANKL的促钙化作用.RANKL可能通过增加细胞碱性磷酸酶活性及骨钙素的表达从而促进血管平滑肌细胞向成骨细胞转化;转鲑鱼降钙素基因酵母可能通过OPG/RANKL/RANK途径抑制血管平滑肌细胞钙化.     

二色桌片参的化学成分研究Ⅲ。二色桌片参多糖-1－岩藻聚糖的免疫调节作用

研究了二色桌片参多糖-1(PMI-1)在体内、体外的免疫调节作用。结果表明，二色桌片参多糖-1体外能促进小鼠脾淋巴细胞增殖，促进小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2：体内能显著促进迟发型超敏反应，增加脾指数、胸腺指数；具有显著的免疫增强作用。     

螺旋藻多糖对肿瘤细胞生长及Hela细胞早期凋亡作用的实验研究

采用MTT法(四甲基偶氮唑盐比色法)研究了钝顶螺旋藻多糖(PSP)对Hela细胞及HepG2细胞生长的抑制作用。结果表明,随PSP浓度及培养时间的增加,肿瘤细胞存活率逐渐降低,抑制率逐渐增加,以PSP40 mg/L作用72 h最为显著。应用Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测了早期Hela细胞凋亡,未经PSP处理的正常Hela细胞凋亡细胞极少,经PSP处理的细胞,凋亡细胞的百分比明显高于正常对照组,其作用随着剂量的增加和时间的延长而增强,具有量效关系和时效关系。结果说明PSP的抗肿瘤机制,除了诱导肿瘤细胞凋亡,还存在细胞毒性等其他机制,是多种机制共同作用的结果。     

Induction of apoptosis by the tropical seaweed Pylaiella littoralis in HT-29 cells via the mitochondrial and MAPK pathways

We demonstrated that an extract from Pylaiella littoralis, collected from the Federate States of Micronesia (FSM), could inhibit the proliferation of tumor cells. P. littoralis extract (PLE) showed anti-proliferative activities in the tumorigenic cells tested, ranging from 20.2% to 67.9%. The highest inhibitory activity, in HT-29 cells, was selected for further experiments. PLE showed no cytotoxic effect in normal cells and inhibited the growth of HT-29 cells depending on concentration and incubation time. PLE-treated HT-29 cells showed the typical morphological characteristics of apoptosis, such as apoptotic body formation and DNA fragmentation. PLE also induced mitochondrial membrane potential depolarization and resulted in increased mitochondrial membrane permeability, compared with untreated cells. PLE decreased Bcl-2 protein and increased Bax protein expression, activating caspase-3 and poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) expression via the caspase pathway. PLE also increased the phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase (JNK), p38, and extracellular signal-regulated kinase (ERK), and it reduced cell viability in treatment cells with specific inhibitors such as PD98059 (a specific inhibitor of ERK), SP600125 (a specific inbibitor of JNK), and SB 203580 (a specific inbibitor of p38 MAPK). via the the mitogen-activated protein kinases (MAPKs) pathway. These results suggest that PLE inhibits the proliferation of HT-29 cells by affecting the caspase and MAPK pathways involved in the induction of apoptosis. Thus, we suggest that P. littoralis extract might be potential candidate agents for the treatment of human colorectal cancer.     

海藻硫酸多糖911抗乙脑病毒作用的观察

采用体外微量细胞病变抑制实验及体内半数致死量LD_(50)测定法,分别观察海藻硫酸多糖911对乙型脑炎病毒的作用。结果表明,海藻硫酸多糖911在体外适宜的浓度条件下,对乙型脑炎病毒有一定的抑制作用,但对病毒无中和作用。体内给药,911对乙型脑炎病毒无明显抑制作用。     

Effects of biogenic amines on the testicular development in mud crabs Scylla serrata

1 IntroductionBiogenicamine, oneofim portantbioactivesub-stancesin crustaceans,participatesin extensivephysi-ologicalactivities, suchastegum entarycolorchange,m olting,m usclecontraction,glucidem etabolism,etc.(Fingerman etal.,1994).Furthermore,ithasbeen …     

白斑症病毒感染与病毒囊膜完整性的关系

对白斑症病毒（white spot syndrome virus,WSSV）感染与病毒囊膜完整性关系的探讨,是深入研究切断WSSV感染途径,为该病的预防提供一条新思路、新方法并积累实验依据的重要环节.本实验利用物理低渗方法即用蒸馏水使WSSV的囊膜破碎,破坏了病毒囊膜完整性,并用此病毒做螯虾体内、外感染实验.结果发现,WSSV的囊膜破碎后仍具有感染性;在此基础上,分别用抗WSSV囊膜蛋白的单克隆抗体（4G9）和抗WSSV核衣壳蛋白单克隆抗体（2A3）进行螯虾体内中和实验,结果显示抗WSSV囊膜蛋白的单抗有中和作用,而抗WSSV核衣壳蛋白的单抗无中和作用;将破碎的囊膜从核衣壳上去掉后,用不同浓度的纯核衣壳重复以上体内感染实验,结果其感染性消失,说明囊膜破碎的WSSV引起的感染是由WSSV上的破碎囊膜介导的病毒侵染所致,而不是核衣壳被直接内吞引起的.这些结果提示,WSSV是否引起靶细胞感染主要与病毒囊膜上与病毒侵染有关的功能蛋白有直接关系,只要这些功能蛋白活性不变并且存在的量足以与靶细胞膜结合,即使WSSV囊膜破碎、结构不完整也能引起感染.     

栉孔扇贝糖蛋白的制备及其抗肿瘤活性初步研究

近年,对海洋贝类药用研究较多。80年代末日本报道虾夷扇贝(Patinopectenyessoensis)中的糖蛋白有很强的肿瘤抑制作用;国内对扇贝边氨基多糖的抗凝作用[1,2],扇贝边提取物对药物性肝损伤的保护作用[3]以及对大鼠血脂水平的影响[4]作过研究。本文首次从栉孔扇贝边中分离获得糖蛋白,并对其抗肿瘤活性进行了初步研究。1　材料与方法1.1　材料扇贝边鲜品系从栉孔扇贝Chlamysfarreri中剥离获得,于1995年5月采自青岛麦岛海珍品养殖场;昆明种小鼠由山东省医科院动物中心提供;S180腹水瘤由山东省医科院药物研究所提供;其他试剂均为A.R.级。1.2　方…     

对虾白斑综合症病毒vp15基因的RNA干扰研究

VP15是对虾白斑综合症病毒(WSSV)的一种核衣壳蛋白,以往的研究表明VP15属DNA结合蛋白,具有潜在的浓缩包装病毒基因组的功能.利用RNAi技术将vp15基因沉默,来研究vp15基因沉默后对WSSV增殖及结构的影响.体外合成了vp15基因的特异双链RNA(vp15-dsRNA)和非特异双链RNA(gfp-dsRNA),分别与WSSV混合共注射淡水原克氏螯虾.在感染后24、36、48 h,每个实验组分别取病虾步足肌肉,样品用Trizol试剂盒提取RNA用于RT-PCR检测、用病毒检测试剂盒提取DNA模板用于荧光定量PCR分析.另外每组随机选取1只虾,取中肠,用于树脂包埋组织超薄切片分析.逆转录PCR分析结果显示vp15-dsRNA能特异性敲除vp15基因转录表达,实时荧光定量PCR分析结果显示vp15-dsRNA干扰vp15基因的表达能有效抑制WSSV病毒粒子的增值.此外,利用树脂包埋组织超薄切片电子显微镜技术观察发现vp15基因被干扰后病毒粒子数量上明显降低并且引起病毒粒子包装异常.通过vp15基因特异dsRNA干扰,有效抑制了WSSV病毒增殖,此外进一步阐明VP15蛋白的功能及其在病毒组装方面的重要作用,对进一步了解病毒组装以及病毒防治具有重要的意义.     

Induction of DNA strand breakage and apoptosis in the eel Anguilla anguilla

The ability of benzo[a]pyrene, Aroclor 1254, 2-3-7-8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and beta-naphthoflavone to induce DNA strand breaks (SB) and apoptosis in erythrocytes of the European eel (Anguilla anguilla) was investigated following by in vivo exposure. DNA damage was evaluated by the Comet assay, while the diffusion assay was used to investigate the induction of apoptosis 7 days after a single intraperitoneal administration. 2-3-7-8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin induced the highest genotoxic effect, followed by benzo[a]pyrene, while the other two substances had limited effects. A significant induction of apoptosis was observed at the highest doses after exposure to benzo[a]pyrene, when DNA damage was also elevated. The occurrence of apoptotic cells after exposure to Aroclor, 2-3-7-8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and beta-naphthoflavone was quite variable and did not show clear dose-related responses. The role of oxidative stress in mediating DNA damage was also discussed.