甘糖酯对大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)mRNA水平的影响

从分子水平上探讨海洋新药甘糖酯的抗栓作用机理。实验以大鼠为材料,采用定量ＲＴＰＣＲ方法定量检测口服甘糖酯后大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物（ｕＰＡ）基因ｍ ＲＮＡ水平变化。研究表明大鼠口服甘糖酯后ｕＰＡ基因ｍ ＲＮＡ 水平高于对照组,差异显著。结论认为甘糖酯可提高体内ｕＰＡ基因的ｍ ＲＮＡ 水平,从而提高ｕＰＡ蛋白的活性,激活机体的纤溶系统,达到抗栓作用。     

海带中砷在大鼠体内代谢过程中的形态变化

研究了海带中砷元素在大鼠体内代谢过程中的形态变化。采用Wistar大鼠按体重随机分为空白对照组和高剂量海带组、低剂量海带组,每组10只,雌雄各半,分别灌胃基础饲料和添加50%、25%海带粉(占饲料粉的比例)的饲料。实验结束后,取大鼠血液、胃内容物、回肠内容物、回盲部内容物和大肠末端内容物,采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定样品中的砷形态和含量。结果表明,海带中的砷在大鼠体内代谢过程中形态发生变化;空白对照组大鼠胃、回肠、回盲部和大肠末端的内容物中砷含量较低,主要砷形态为二甲基砷(DMA)和五价砷(AsⅤ),且不含有砷糖化合物;添加海带组大鼠胃、回肠、回盲部、大肠末端内容物中含有砷糖化合物及少量的砷胆碱(AsC)、砷甜菜碱(AsB)、DMA和AsⅤ,海带中的砷在大鼠的大肠末端主要以砷糖和小分子有机砷形态排出体外。空白对照组和添加海带组大鼠血液中的砷形态均为DMA和少量AsⅤ,添加海带组大鼠血液中未检出砷糖化合物。本研究旨在为阐明海带中砷元素在体内的代谢变化提供参考依据。     

大鼠口服古糖酯后尿液中糖胺聚糖的变化及其对一水草酸钙晶体抑制活性的影响

通过对尿液总糖胺聚糖的含量测定,尿液原型古糖酯的检测以及尿液对一水草酸钙晶体生长和聚集抑制率的变化,研究大鼠一次性口服古糖酯（２００ｍ ｇ／ｋｇ）后,三天内尿液糖胺聚糖的变化,以及尿液对一水草酸钙晶体生长和聚集抑制率的变化。结果表明,大鼠口服古糖酯后,尿总糖胺聚糖含量在第一天和第二天显著升高,第三天恢复到原有水平。与之对应,尿原型古糖酯在第一、二天可以测到,第三天消失,尿液对一水草酸钙晶体聚集抑制活性显著增强,但对晶体的生长抑制没有显著增强作用。该实验部分提供了古糖酯的代谢结果,并为古糖酯作为尿路结石抑制剂提供了有力的实验证据。     

糖胁迫对牙鲆肝脏代谢和肠道消化相关酶活性的影响

牙鲆是海水养殖肉食性鱼类。本研究以灌喂葡萄糖的方式,研究糖胁迫对牙鲆(初始体重225±50g)肝脏蛋白质和脂肪代谢酶和消化酶活性的影响,为解析肉食性鱼类糖耐受能力弱的机制提供基础数据。共设计2个实验组,第1组为糖胁迫组,将葡萄糖溶液(500mg/ml)按照1.67g葡萄糖/kg体重的剂量灌喂给牙鲆;第2组为对照组,按第1组同等剂量灌喂牙鲆磷酸缓冲盐溶液(PBS,0.01mol/L)。分别在灌喂前(0h),灌喂后1、3、5、7、12、24和48h取样。结果表明,肝脏谷丙转氨酶活性在灌喂葡萄糖后表现出先下降后升高的趋势,在7h达到最低且显著低于灌喂前水平(P0.05),谷草转氨酶活性与0h差异不显著(P0.05)。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性先升高后下降,在7h显著高于灌喂前水平(P0.05)。脂蛋白脂酶、肝脂酶活性变化不显著(P0.05)。肠道脂肪酶和胰蛋白酶活性先升高后下降,分别在5h和7h达到最高且显著高于灌喂前水平(P0.05)。肠道淀粉酶和胃蛋白酶活性没有显著变化(P0.05)。在对照组中,上述酶活性在不同取样时间点之间没有显著差异(P0.05)。总的来说,糖胁迫影响了牙鲆肝脏的转氨酶活性,在一定程度上减弱了肝脏的氨基酸代谢强度,促进了肝脏脂肪酸的合成,增强了脂肪酶和胰蛋白酶的活性。     

分步电泳法检测古糖酯

应用分步电泳法检测水溶液和大鼠尿液中的古糖酯 (Propyleneglucol Guluronate SodiumSulfate,PGSS) .该醋酸纤维膜电泳选用两种电泳液 :(1) 0 .1mol· L-1的醋酸锌溶液 ,p H6 .0 ;(2 )1.0 mol· L-1的醋酸钡溶液 ,p H5.0。电泳膜于 0 .5%阿利辛兰水溶液中染色 ,1%醋酸溶液褪色。该法能够检测不同介质中的古糖酯 ,水溶液中的检测下限为电泳膜上加样 10 0 ng,尿液中古糖酯浓度高于 50 0 ng/ m L,经提取可以用此法测得。实验证实该法灵敏、稳定性高、重现性好。     

海洋污染对毛蚶超氧化物歧化酶影响的研究

采用体内、体外染毒实验,研究了海洋中常见污染物0＃柴油、二甲苯以及重金属镉离子(Cd2+)对毛蚶(Scapharca subcrenata)肌肉超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.结果表明,在实验剂量范围内,3种污染物对毛蚶肌肉中SOD均表现出不同程度诱导作用;0＃柴油和二甲苯体内、体外染毒对毛蚶SOD活性影响规律基本一致,这两种污染物对毛蚶SOD活性变化的剂量-效应曲线均为抛物线型;Cd2+在体内、体外染毒对毛蚶肌肉SOD活性诱导曲线均不呈抛物线型,低浓度Cd2+对毛蚶SOD活性表现为显著诱导,随后曲线迅速下降,表明毛蚶对Cd2+污染反应十分敏感,也表明Cd2+对毛蚶毒性作用较强,3种毒物对毛蚶的毒性强弱次序为,Cd2+,0＃柴油、二甲苯.     

绒螯蟹凝集素的红细胞凝集活性分析

利用血凝试验及糖抑制试验测定一种绒螯蟹的血清及肌肉提取液的凝血活性及糖抑制专一性,同时进行热稳定性、pH及Ca^2 影响试验。结果显示：血清只能凝集9种红细胞,肌肉提取液能凝集12种红细胞。血清对鹌鹁红细胞的凝集可被乳糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖4种糖所抑制,最小抑制浓度均为200mmol／L,其凝集活性均依赖于Ca^2 ,在pH为6．0～7.0范围内较稳定,经50℃保温10min后活性完全消失。肌肉提取液只被D-甘露糖抑制,在pH为4．0～10．0、温度为4℃～90℃范围内均具活性,说明有很强的耐热性,其凝集活性不依赖于Ca。以上结果表明：血清与肌肉提取液均含有凝集素,且凝集素的种类不同。     

纤溶酶原:结构、功能与进化

纤维蛋白溶解系统是凝血系统的重要组成部分,对于维持血液的流动性和血管的完整性起着至关重要的作用。作为纤溶系统中心组分的纤溶酶原在其激活剂的作用下转变为活性形式的纤溶酶,进而降解纤维蛋白原,并能溶解血栓。纤溶酶也参与金属蛋白酶类和脂氧合酶类激活作用,还与细胞许多迁移相关的生理和病理过程相关诸如癌症、血管增生、卵子成熟、胚胎发生、伤口愈合以及病原侵入相关。本文简要概述了纤溶酶原和纤溶酶的结构、功能及其进化的研究进展。     

单环刺螠纤溶酶Ⅱ的基因克隆

单环刺螠纤溶酶(UFE)是由本实验室分离纯化出的1组包括4个分子量组分的纤溶酶,各个组分均有提高受试机体继发性纤溶活性的能力,并具有显著的抗凝活性和纤溶活性以及较好的生物安全性。根据该纤溶酶Ⅱ的N-末端氨基酸序列设计简并引物,通过3-’RACE PCR获得该组分蛋白质的部分编码序列,进一步通过5-’RACE PCR获得单环刺螠纤溶酶基因全长cDNA编码序列906 bp,其中开放阅读框795 bp。该基因全长cDNA BLASTx比对结果表明,其编码产物与丝氨酸蛋白酶家族成员具有较高的同源性,通过PROSITE的ScanProsite软件分析得出,该蛋白质含有1个trypsindomain(第32-264位),在NCBI的CDD数据库中分析结果显示该酶是1种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。     

四磨汤口服液SD大鼠长期毒性实验研究

目的：观察SD大鼠灌胃四磨汤口服液的长期毒性反应。方法：将120只SD大鼠随机分为四磨汤口服液高、中、低3 个剂量组和辅料对照组,连续灌胃给药13周,恢复期4周,观察各组大鼠实验过程中症状发生情况、体质量、血细胞计数[包括白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）]、血液生化指标[包括丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、白蛋白/球蛋白（A/G）、直接胆红素（TBil）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cre）、总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）]的变化,并观察停药后各指标的恢复情况。结果：四磨汤口服液高、中、低剂量组实验期间均未出现异常症状。与同期同性别辅料对照组相比,末次给药后次日高剂量组雌性大鼠RBC和HGB指标降低（P<0.05）,其他指标和时间点差异均无统计学意义（P＞0.05）。由于RBC和HGB变化幅度较小,均在正常参考值范围内波动,其他红细胞相关指标也未见异常改变,故认为该变化无重要的毒理学意义。各剂量组雄性大鼠血细胞计数指标均未见统计学差异（P＞0.05）。与同期同性别辅料对照组相比,末次给药后次日,高剂量组雄性大鼠BUN、雌性大鼠Cre降低,雄性大鼠CHO升高;与同期同性别辅料对照组相比,末次给药后次日,中剂量组雄性大鼠CHO升高;恢复期结束后,雄性大鼠TBil升高;与辅料对照组相比,恢复期结束后,雌性动物TG降低;上述指标差异均有统计学意义（P<0.05）。以上指标中,CHO、TBil的升高未见明显的剂量-反应关系,且在正常参考值范围内波动,认为无重要的毒理学意义。BUN、Cre、TG的降低无重要的毒理学意义。结论：本实验未见明显不良反应的剂量为45 g/kg,表明四磨汤口服液安全性高。     

盐度对日本鳗鲡生长及非特异性免疫酶活性的影响

利用实验生态学和酶学方法,在浙江省海洋水产养殖研究所清江试验场研究了盐度对平均体长为25．1±5．6cm的日本鳗鲡（Anguillajaponica）生长及其血清溶茵酶（LZM）、超氧化物歧化酶（SOD）及碱性磷酸酶（AKP）活性的影响,实验持续60d．实验设置了5个盐度梯度（盐度5、10、15、20、25）和对照组（盐度0）,每梯度设3个平行组,各组盐度和pH值保持一致．日本鳗鲡血清中免疫酶活力指标：碱性磷酸酶、溶茵酶、超氧化物歧化酶在实验的第7天和第14天测定．实验结果表明,盐度5组相对增重率最高（279．78％±28．37％）,其次是盐度10组（278．74％±22．25％）,盐度15、20、25组相对增重率分别为234．39％±21．28％、230．28％±26．31％、228．01％±29．29％．对照组相对增重率为233．20％-4-25．18％,盐度5和10组与对照组差异显著（P〈0．05）,其余各组与对照组差异不显著．第7天和第14天,盐度10组碱性磷酸酶活性最高,分别为225．05U／dm。和251．11U／dm’,其次是盐度5组,分别为221．76U／dm。和236．01U／dm。,显著高于对照组（P〈0．05）．第7天和第14天盐度20、25组溶菌酶活性显著高于对照组（P〈0．01）．超氧化物歧化酶随着盐度的升高呈逐步上升趋势．第14天,盐度20、25纽溶菌酶活性仍保持较高水平,SOD回落至对照组水平,而各组AKP较第7天略有上升．     

盐度突变对凡纳滨对虾渗透调节中血蓝蛋白和糖酵解影响的初步研究

实验室条件下测定盐度突变对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴渗透压、血蓝蛋白、血糖、己糖激酶(HK)以及丙酮酸激酶(PK)活力的影响。以蜕皮间期对虾为实验材料(初始湿体重为(2.485±0.303)g),设盐度30为对照组,4个不同的盐度突变幅度(为2、4、6、8)为处理组(用S2、S4、S6和S8表示),于降低盐度和恢复盐度至30的不同时间点采样,实验持续7d。结果表明:(1)凡纳滨对虾血淋巴渗透压会随盐度变化而变化,S4组对虾血淋巴含量在整个实验过程中处于较低水平;(2)随着盐度突变幅度的增加,血蓝蛋白含量与对照组呈现显著性差异(P<0.05)的采样点增多;(3)S4组对虾血糖含量整个实验过程中一直处于较低水平,而S6、S8组对虾血糖含量相对较高;(4)整个实验过程中,S4组对虾肝胰脏中HK活力处于较低水平,而S6与S8组对虾肝胰脏中HK活力处于较高水平;(5)S2、S4组对虾肝胰脏中PK活力与对照组没有显著性差异(P<0.05),而S6和S8组对虾肝胰脏PK活力在盐度突变后与对照组肝胰脏PK活力表现出显著性差异(P<0.05)。     

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)出血病二价细胞灭活疫苗体液免疫效果及免疫保护率评价研究

草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(GCRV)引起的草鱼养殖业一种严重的病毒性出血病,给草鱼养殖产业造成重大损失。该病毒是一种双链分节段RNA病毒,根据GCRV多个病毒分离株基因序列分析及临床发病特点,共有三种基因型GCRV,其中基因Ⅰ型和Ⅱ型较为流行。通过细胞分离培养基因Ⅰ型(GCRV-ZV8909)和Ⅱ型(GCRV-HZ13) GCRV,研制出草鱼出血病二价细胞灭活疫苗,通过绝对定量的方法,测定基因Ⅰ型和Ⅱ型的病毒含量分别为2.0×10⁹及1.5×10⁶ copies/mL。用生理盐水将其分别进行50倍稀释和100倍稀释,包括原液及生理盐水对照共4组,分别腹腔注射免疫(20±5)g健康草鱼,剂量均为0.2mL/尾,每组40尾,各组于免疫后3、5、7、14、21、28、42、56、70、84 d分别取3尾采集血液制备血清。分别利用经原核表达并纯化制备两种基因型GCRV的VP7蛋白以及实验室保存的草鱼IgM单抗,建立了三抗体夹心酶联免疫方法(TAS-ELISA)分析评价疫苗体液免疫效果。结果表明,草鱼经腹腔注射不同剂量的细胞灭活疫苗后,与对照组相比,各免疫组血清抗体均有不同程度的提高,且原液组与50倍稀释组基本持平,但都高于100倍稀释组,各免疫组在免疫后5d即可检测到两种基因型GCRV抗体,且抗体水平持续到84d,但两种基因型抗体水平达到高峰的时间不一致,抗基因Ⅰ型GCRV抗体达到高峰是在28d,抗基因Ⅱ型GCRV抗体是在14d达到高峰。两种基因型抗体水平达到高峰时的血清效价分别为1︰800、1︰600。免疫保护率实验结果表明,原液组保护率最高,为67%,50倍稀释组为60%,100倍稀释组只有33%。     

镉对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)抗氧化酶活性的影响

将中华绒螯蟹(河蟹Eriocheir sinensis)浸泡在2．Omg/L氯化镉(CdCl2)溶液中，分别于第0、6、12、24、48、72、96小时提取河蟹的肝胰腺，测定抗氧化酶：超氧化物歧化酶(Superoxicle dismutase，SOD)、过氧化氢酶(Catalase，CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxiclase．GPx)的活性，探讨了镉(Cd^2 )对河蟹肝胰腺抗氧化酶活性的影响。结果显示，在低浓度Cd^2 环境下，河蟹肝胰腺的抗氧化酶活性随时间发生规律性变化。暴露于Cd^2 后，河蟹肝胰脏SOD活性降低，随时间的延长，在暴露72h后，SOD活性恢复并超过未染毒时22．3％。表明Cd^2 中毒导致细胞内氧自由基大量积累从而诱导酶活性升高；CAT活性先下降后增高，随后减少，最后以低于对照的水平趋于平衡；肝胰腺中GPx酶活性的变化规律与SOD相似，在解除氧自由基毒性方面有一定的协调性。实验表明河蟹抗氧化系统酶对Cd^2 很敏感。而酶活性在短时间内的变化规律可以为镉对河蟹早期的毒性研究提供参考。     

刺参夏眠不同时期划分以及前肠各组织层厚度定量分析

以非夏眠期刺参(Apostichopus japonicus)为对照组,在刺参夏眠不同程度选取3个时间点,将其分为夏眠初期、深度夏眠期、夏眠解除期3个阶段,采集前肠组织为研究材料,制作石蜡切片,统计不同时期刺参前肠壁厚度、前肠黏膜上皮、黏膜下层、肌肉层和外膜的厚度及直径.结果显示,与对照组相比,夏眠不同时期黏膜下层厚度均无差异(P＞0.05),夏眠初期黏膜上皮和外膜显著薄于对照组(P＜0.05),深度夏眠期黏膜上皮和肌肉层显著薄于对照组(P＜0.01),刺参前肠直径在深度夏眠期显著变小(P＜0.01).计算前肠各组织层占肠壁厚度的比例发现:夏眠初期黏膜上皮和外膜厚度占肠壁总厚度的比例要显著小于非夏眠期(P＜0.05),黏膜下层的比例则显著变大(P＜0.01),肌肉层所占比例在深度夏眠期显著小于其他几个时期(P＜0.05).     

赤魟软骨血管生成抑制因子的分离纯化

确定了制备高纯度赤魟软骨血管生成抑制因子的纯化工艺,并通过胶原酶模型、CAM模型验证其生物学活性。正交实验确定了赤魟软骨组织抽提的最佳条件,抽提产率可达0.84%。丙酮分级沉淀对抽提产物进行粗分离,25~35%的丙酮分级产物的CAM血管生成抑制率达85%。优化离子交换层析、凝胶过滤、反相层析的条件,可进一步有效的获得高纯度的赤魟软骨血管生成抑制因子-I(DCAIF-I)。SDS-PAGE-考马斯亮蓝染色显示为一条带,分子量为62 kDa。活性验证结果表明,DCAIF-I对胶原酶具有一定的抑制活性,抑制率为36.3%,对CAM血管生成的抑制活性具有一定的剂量依赖关系。     

Cr6+对日本黄姑鱼(Nibea japonica)外周血细胞及抗氧化酶(SOD、CAT)活性的影响

采用半静水生物测试法,开展了Cr6+对日本黄姑鱼(Nibea japonica)的急性暴露试验,研究了暴露6、12、24、72、96h后,Cr6+对日本黄姑鱼外周血细胞微核率、核异常率及肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果表明:不同浓度Cr6+胁迫下,红细胞微核率及核异常率均显著高于对照组(P<0.05);相同浓度Cr6+胁迫下,核异常率普遍高于微核率;对照组CAT和SOD活性无明显变化(P>0.05),不同浓度Cr6+处理组SOD和CAT活性均变化显著(P<0.05),在96h内呈现出先升高、后降低、再升高的变化趋势。     

海洋酸化对青蛤免疫指标的影响

通过向水体中通入CO_2的方法模拟海洋酸化环境,测定青蛤(Cyclina sinensis)在酸化条件下各免疫指标的变化情况。结果显示:将青蛤置于酸化的海中(pH分别为7.4和7.7),并以自然海水做对照组(pH 8.1)后,血细胞总数随海水酸化胁迫时间的延长,表现为下降趋势,且差异显著(P0.05);海水pH降低抑制了溶菌酶的活性,但差异性不显著(P0.05);ACP活性总体呈下降趋势,对照组活性要高于酸化组,而ALP活性表现为上升趋势。酸化胁迫初期诱导SOD活性升高,后期SOD活性受到抑制,而CAT变化却截然相反;脂质过氧化产物MDA在酸化后期出现显著降低(P0.05)。     

Effects of tributyltin at environmental levels on monooxygenase system of digestive gland in hard clam Meretrix meretrix

The effects on ethoxyresorufin O-deethylase (EROD), NADPH-cytochrome c reductase and NADH cytochrome b5 reductase activities of digestive gland in Meretrix meretrix exposed to tributyltin (TBT) at environmental levels (0.1,1.0, 10.0 ng/dm3 as stannum concentration), in experimental condition, were evaluated. The EROD, NADH cytochrome b5 reductase activities were significantly inhibited after exposure to 10.0 ng/dm3 TBT for 8 and 20 d, the NADPH cytochrome c reductase activities were significantly inhibited after exposure to 0.1,1.0 and 10.0 ng/dm3 TBT for 8 d and to 1.0 and 10.0 ng/dm3 for 20 d, as compared with the matched control, while NADH cytochrome b5 reductases and NADPH cytochrome c reductase activities were induced after exposure to 10.0 ng/dm3 TBT for 2 d. The EROD activity in the 10 ng/dm3 group, and the NADH cytochrome b5 reductases activities in 1.0 and 10.0 ng/dm3 groups, were significantly induced when transferred to clean recovery tanks for 7 d. The three enzymic activities in the clams exposed to TBT were recovered to the level corresponding to that of the control group after transfer to clean recovery tanks for 20 d. NADPH cytochrome c reductase activity in Meretrix meretrix seems to be more sensitive to exposure of TBT than that of the EROD and NADH cytochrome b5 reductases. The results suggest that induction and inhibition by TBT to the monooxygenase system enzymic activity in Meretrix meretrix would simultaneously exist. The enzymic activities were inhibited by exposure for a long time. The results suggest that inhibition of the monooxygenase system should be an indication of the exposure to environmentally relevant concentrations of TBT for a long time.