中华绒螯蟹多倍体诱导技术改进

采用抑制第二极体排放的方式对15℃孵育的中华绒螯蟹自然受精卵人工诱导三倍体,通过抑制第一次卵裂对18℃孵育的自然受精卵人工诱导四倍体,应用流式细胞仪进行倍性鉴定.分别使用CB,6-DMAP和KCl三种试剂对受精卵处理,发育至囊胚期检测,获得的最高三倍体诱导率依次是49.1%,51.7%和77.5%,获得的最高四倍体诱导率依次是50.3%,54.9%和79.8%.使用KCl试剂对抱卵蟹诱导处理,孵出潘状幼体检测,最高三倍体诱导率为85.3%,最高四倍体诱导率为27.3%.克服了以往三倍体诱导中离体培养的困难,首次获得了中华绒螯蟹三倍体潘状幼体,并极大提高了潘状幼体阶段四倍体诱导率.     

维生素及海水浸泡对牡蛎卵子的体外促熟作用

在牡版多倍体育苗生产中，为确保受精及诱导同步进行，提高多倍体的诱导率，精卵通过解剖法获得，并采用人工方法受精（Alien等，1989）。多倍体率的高低，除了受诱导时间及诱导强度等因素影响外（Downing等，1987），很大程度上还取决于卵子的质量及发育的同步与否（王如才等，1993）。解剖法获得的卵子其成熟程度及卵子发育的同步性都低于自然排放的卵子，而卵子的质量又直接影响到卵子的受精率以及以后的胚胎发育和幼虫的成活率。因此，需要对解剖的卵子作一定的促熟处理，提高卵子的质量。迄今国内外未有关于贝类卵子体外促熟方面的研…     

中华绒螯蟹卵巢发育周期的组织学细胞学观察

于1989－1990年，用组织切片技术，结合外观特征，在光镜水平对浙北地区的中华绒螯蟹卵巢发育周期进行组织学、细胞学观察，并对从卵原细胞增殖到卵母细胞生长、卵子成熟及卵巢退化、重新发生等进行系统观察研究。研究表明，中华绒螯蟹可以观察到第一次成熟分裂中期相为成熟卵的标志，并以此标志将卵子发生分成四期、卵巢发育分成VII期。结果还表明，中华绒螯蟹雌蟹的成熟时间因所处的地理纬度不同而有所差异，浙北地区雌蟹促产怀卵的最佳时间是3月份并延至4月上旬；卵子必须借助海水及交配活动刺激才能达到成熟；因故无法产卵或一直生活在淡水中的成熟雌蟹其整个卵巢即退化，退化卵巢亦能重新发生，新生卵子的形态、发育时序与首次等待青春期蜕壳的蟹一致；孵后母蟹不仅能继续蜕壳生长，其卵巢也能重新发生，新生卵子的形态、发育时序如前一致；但在卵巢结构上彼此又有明显的区别。     

氯化钾诱导中华绒螯蟹三倍体参数的优化

基于受精卵早期发育形态学的观察,对利用氯化钾诱导中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)三倍体的条件进行了优化.实验结果表明:中华绒螯蟹受精卵在产出后经历了变圆、体积膨大及卵黄团物质位置移动的过程;在15℃下,中华绒螯蟹受精卵在产出后40 min左右释放第一极体,80 min左右孵化膜形成并举起,5 h左右第二极体释放;氯化钾诱导中华绒螯蟹三倍体的优化参数为:产卵后1.5～2.0 h,用6 g/L的氯化钾处理4 h;孵化膜形成并举起可以作为中华绒螯蟹三倍体诱导开始点的形态学标记,其最高诱导率可以达到100%.实验结果为实现中华绒螯蟹三倍体苗种的批量生产提供了参考和依据.     

Ca2+，Mg2+，K+及胰蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂对中国对虾卵子激活的影响

对虾成熟卵子的激活都是由海水引起的,海水的刺激引起成熟的卵母细胞发生皮层反应,完成减数分裂,这一过程同有无精子的作用无关(Clark et al.,1977,1980; Lynn et al.,1991; Pillai et al.,1987)。在对锐脊单肢虾(Sicyonia ingentis)的卵子激活研究中发现,其成熟卵子无论受精与否在接触海水以后均具有相同的激活过程,受精卵和未受精卵的皮层反应及减数分裂的恢复没有区别,而海水中刺激卵子发生皮层反应直接因子是Mg2+而不是Ca2+。在无Mg2+人工海水中,锐脊单肢虾的卵子不能激活;而在无Ca2+人工海水中,卵子则可正常激活(Pillai et al.,1987; Lindsay et al.,1992a)。Mg2+对锯额长臂虾(Palaemon serratus)卵子减数分裂的形响的研究表明,锯额长臂虾卵子减数分裂的恢复必须有Mg2+参与,而Ca2+则是非必须的;胞外Mg2+可以诱导卵子的皮层反应,并使卵膜外的微绒毛消失;胞外Mg2+的增加可使卵子内部游离Ca2+浓度发生变化,从而诱导卵子的激活(Goudeau et al.,1986,1991,1996)。 根据前人的报道,胰蛋白酶和胰蛋白抑制剂对对虾精子的顶体反应、卵子的激活都具有明显的影响(Lynn et al.,1987; Griffin et al.,1990; Lindsay et al.,1992b; Chen et al.,1994)。Lynn等(1987)报道褐对虾(Penaeus aztecus)的卵胶前体(jelly procusor)含有约70%-75%的蛋白质及25%-30%的多糖,胰蛋白酶对于人工分离的卵胶前体具有明显的降解作用,胰蛋白酶抑制剂可以抑制卵子在海水中的激活,Griffin等(1990)的研究发现,锐脊单肢虾的卵子内含有类胰蛋白酶的物质,解剖性成熟雌虾获得的卵子置入海水摇匀,上清液-卵水(egg water)可以诱导取自雌虾纳精囊内的精子发生顶体反应,胰蛋白酶也可以诱导对虾精子的顶体反应,而胰蛋白酶抑制剂则完全可以抑制对虾精子在人工海水中发生顶体反应时顶体丝的形成。Lindsay等(1992b)的研究也得出了类似的结果,并对卵水和胰蛋白酶不同浓度及不同作用时间下对对虾精子顶体反应的诱导作用进行比较研究。Chen等(1994)对锐脊单肢虾精子的提取物进行生化分析发现,精子内部也有类胰蛋白酶的物质,并通过免疫电镜技术将其进行定位,精子的提取物可以降解分离的卵黄膜。 激光扫描共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope)在海洋动物的受精及发育生物学的研究中已有一些报道(Sardet et al.,1992; Stricker et al.,1992; Shen et al.,1993; Jaffe, et al.,1994; Malinda, et al.,1994)。而在对虾的受精及发育生物学方面应用还比较少,只有锐脊单肢虾的卵子激活及早期发育的研究上有一些报道(Hertzler et al., 1992, 1994: Lindsay et al.,1992a)。 海水中的离子成分是影响卵子激活的关键因子,而胰蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂对对虾受精也有着很大影响,这两方面的工作在国内、外中国对虾的受精生物学研究中均未见报道。 作者对上述两类理化因子对中国对虾卵子激活的影响进行研究,并使用激光扫描共聚焦显微镜对中国对虾卵子受胰蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂的作用而发生的形态变化进行研究,初步分析了造成异常卵裂的原因。     

中国海洋生物工程中心首期高级培训班在我校举办

联合国教科文组织中国海洋生物工程中心设立在青岛海洋大学海洋生命学院内，该中心首期高级培训班子1996年1月15日～24日举行，为期10天。此次培训的主题是“海水养殖动物病害诊断与控制”，主要内容为：对虾养殖技术与对虾病害的关系；对虾细菌病原及病原性研究；对虾病毒病原PCR检测及实验；对虾病原免疫萤光抗体检测技术及实验以及鱼类、贝类和其它海洋水产养殖动物病害等。参加首期培训班的学员共23人，他们来自韩国、越南、泰国、马来西亚、菲律宾、中国、香港等国家和地区。这些学员多数具有学位。其中有8位具有博士学位和副教授职…     

白斑综合症病毒(WSSV)的宿主调查

用地高辛 (DIG)标记的WSSVDNA探针斑点杂交与原位杂交技术 ,在中国对虾、斑节对虾、南美白对虾、刀额新对虾、脊尾白虾、天津厚蟹、日本大眼蟹体内检测到了WSSV ,它们是WSSV的天然宿主 ;在经人工感染的哈氏美人虾、短脊鼓虾、克氏原螯虾、肉球近方蟹、滕壶体内检测到了WSSV ;在球形侧腕水母、病虾池的桡足类等浮游生物、卤虫无节幼体以及人工浸泡感染卤虫成体体内没有检测到WSSV。经原位杂交检测 ,虾类的甲壳下上皮、胃上皮、附肢、造血组织、鳃等组织器官均可被WSSV侵染 ,其中甲壳下上皮和鳃对WSSV敏感 ;蟹类的甲壳下上皮和鳃对WSSV敏感 ;在中国对虾、南美白对虾、脊尾白虾、注射感染的克氏原螯虾的精巢中 ,精荚的结缔组织细胞和血细胞呈阳性 ,在中国对虾、脊尾白虾以及注射感染的短脊鼓虾的卵巢中 ,结缔组织细胞和滤泡细胞被WSSV感染。     

十足目染色体研究进展

十足目(Deoapoda)是甲壳纲中最大的一目,已知共包含10000多种动物。十足目动物与人们生活关系密切,如各种对虾、龙虾和蟹等,不仅营养丰富,而且味道鲜美,是人们十分喜爱的佳肴,具有很高的经济价值。20世纪60年代以来,随着众多经济虾蟹类(如中国明对虾、罗氏沼虾、中华绒螯蟹)人工培育苗种的成功,其养殖业发展迅猛,特别是近年来特种水产养殖业的兴起,使虾蟹类的产量倍增。据不完全统计,世界上目前主要养殖的虾蟹种类巳达30余种,     

三种常见经济虾蟹类眼柄微结构分析

本研究分别检测了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)、中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)和中国对虾(Penaeus orientalis)三种虾蟹类的眼柄微结构特征,根据眼柄微结构,三种虾蟹类眼柄都分为4层:表层、色素层、钙化层和膜层。表层质地均匀,色素层含有色素,钙化层内有明显的生长纹(宽带和细纹),膜层透明度最高。但是三者眼柄微结构也有差异,中国对虾眼柄色素层较薄,膜层较厚,中华绒螯蟹钙化层含有色素颗粒。研究发现,中华绒螯蟹眼柄生长纹平均间距最大。钙化层的宽带是否与年龄或脱壳次数有关,细纹是否与日龄有关需要进一步实验验证,通过眼柄微结构特征的分析,可为虾蟹类的年龄鉴定及其生长研究提供新的方法。     

红螯螯虾虹彩病毒在两种螃蟹内的研究

最近报道从患病的红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)中分离出一种新的虹彩病毒,被暂时命名为红螯螯虾虹彩病毒.它还能感染克氏原螯虾(Procambarus clarkii)和凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),为了探究红螯螯虾虹彩病毒是否能够感染同属于甲壳纲、十足目的螃蟹.选取中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)和粗腿厚纹蟹(Pachygrapsus crassipes)作为实验对象,应用实时荧光定量PCR技术和透射电子显微镜技术,结论证明了红螯螯虾虹彩病毒能够感染中华绒鳌蟹和粗腿厚纹蟹.推测其他蟹类也可能是其潜在的宿主,这暗示着红螯螯虾虹彩病毒对螃蟹的养殖是一种潜在的威胁.     

平端深海偏顶蛤(Gigantidas platifrons)实验室蓄养过程鳃部含菌上皮细胞超微结构动态变化研究

平端深海偏顶蛤(Gigantidasplatifrons)是南海台西南冷泉区的典型优势物种,鳃丝上皮细胞内共生大量甲烷氧化菌,通过甲烷有氧氧化合成有机物为共生体系提供物质能量,是平端深海偏顶蛤赖以生存的重要能量来源器官,溶酶体在共生体系的营养互作和稳态维持中可能发挥重要作用,本研究使用电镜技术观测了常压培养过程中(0d,30d,90d)平端深海偏顶蛤共生体系中共生菌和溶酶体的动态变化,通过鳃上皮含菌细胞超显微结构的变化研究常压培养对深海共生体系的影响,并探讨溶酶体在宿主—共生菌营养传递和共生菌群稳态维持中的关键作用。研究发现,在原位状态样品中(0d)共生菌和溶酶体呈极化分布,细胞结构完整清晰;蓄养30d后,含菌细胞出现明显破碎,共生菌数量大幅降低,溶酶体数量、范围和消化程度大幅增加,对细胞顶端的甲烷氧化菌进行分解;而90d后,共生菌在溶酶体的作用下消失殆尽,鳃部有明显细胞脱落后留下的坑洞,细胞呈现空泡状,无法明确区分各种细胞组分。上述结果展示了长期常压蓄养过程中鳃上皮含菌细胞中溶酶体与甲烷氧化菌的动态变化,推测当共生菌丢失后溶酶体也同步降低活跃度,平端深海偏顶蛤在共生互作中通过溶酶体主导消化和调控共生菌。     

海水中挥发性卤代烃产生机制研究进展

挥发性卤代烃ＶＨＣ（Ｖｏｌａｔｉｌｅｈａｌｏｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ）是一类重要的卤代有机物，通常包括卤代甲烷、乙烷和乙烯等挥发性卤代有机物ＶＨＯＣ（Ｖｏｌａｔｉｌｅ ｈａｌｏｇｅｎａｔｅｄ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｃｏｍ－ｐｏｕｎｄｓ）。自从人们发现氯氟烃对平流层臭氧有破坏作用以来，挥发性卤代烃（ＶＨＣ）的天然来源及其产生机制引起了广泛兴趣，并开展了大量研究。１９９３年在荷兰召开了首届有机卤化物夭然产生国际学术会议。研究表明，海水中挥发性卤代烃的天然释放对大气中它们的源与汇的影响是显著的［ｌ，２］。如Ｃ…     

青岛近海秋季大型底栖动物群落特征

利用2007年10月在青岛近海进行的大型底栖动物定量采集样品,采用大型多元统计分析软件PRIMER,研究了该海域大型底栖动物群落的物种组成、生物量和丰度分布、群落等级聚类分析(CLUSTER)以及群落受污染扰动情况。本次调查共获得青岛近海大型底栖动物160种,其中多毛类93种,甲壳动物37种,软体动物16种,棘皮动物7种,其它类群动物7种。群落中优势种的优势度均不明显,以多毛类巴氏钩毛虫(Sigambra bassi)和长须沙蚕(Nereis longior)贡献率最高。生物量和丰度空间分布没有明显的规律性,呈斑块状分布。群落结构聚类分析表明,15个取样站的群落结构相似性程度都非常低,为10%~30%,仅有S2和S4站、S11和S12站Bray-Curtis相似性系数达到30%。ABC曲线表明,该研究海域处于1个轻度人为扰动的状态。     

中国沿海脉红螺(Rapana venosa)自然群体线粒体 DNA 16S rRNA遗传特性研究

对中国沿海脉红螺7个自然居群的线粒体DNA 16S rRNA基因片段进行了扩增和测序,分析了107个个体511bp的碱基序列,结果没有发现插入,缺失突变的核苷酸位点.检测到了28个多态性核苷酸位点,共37种单倍型,单倍型1的同源性达到58.7%.大连居群的28l(G-A)和483(T- C)位点,烟台居群的17(A-G)位点、66(T- C)和247(T-C)位点,舟山居群的128(T-C)位点,秦皇岛居群的130(T-G)和161(A-G)位点,以及丹东居群的431(T-C)位点的变异可以作为居群分子遗传标记位点.居群内,烟台和大连居群的核苷酸差异数 K 以及平均核苷酸多样性指数 Pi 最高,青岛居群最低;居群间,大连居群在居群间核苷酸差异数K、居群间平均每位点核苷酸替代数Dxy 和居群间每位点净核苷酸替代数Da三个指标上都表现出比其他居群之间较高的水平,说明大连居群具有最为丰富的遗传多样性.     

福建九龙江口红树植物分子分类的研究

运用RAPD技术对福建九龙江口龙海红树林自然保护区浮宫种苗园内白骨壤（Auicenmia marina)，桐花树（Ageiceras corniculatum)，无瓣海桑（Sonneratia apatala)，秋茄(Kandeliacandel),木榄（Bruguiera gymnorthiza),海莲（B.sexangula),尖瓣海莲（B.sexangula var,rhynchopetala)等7种红树植物进行了遗传多样性分析，从30个10-mer随机引物中筛选出15个有效引物，利用这15个有效引物共扩增出630条DNA带，其中多态性条带535条，占总扩增条带的84．92％，利用Nei指数法得出7种红树植物间的遗传一致度和遗传距离，并运用UPGA统计分析法对红树植物的7个种间的亲缘关系进行聚类分析，7个种分为A，B两个大组，白骨壤，酮花树，无瓣海垒同属于A组，秋茄，木榄，海莲，尖瓣海莲分聚类在B组，分子聚类结果和传统的分类学相吻合，由此表达这15个有效引物的PAPD分子标记技术能较为客观地反庆出红树植物种间的遗传亲缘关系，并为从分子水平研究红树植物遗传多样性，保护，开发和利用红树林资源提供科学依据。     

舟山冬季暴雨的特征

文章分析了冬季暴雨发生时的环流形势和物理量场分布特征,揭示了冬季暴雨的发生与厄尔尼诺现象有着一定的相关。同时,分析了单站要素的变化,为以后的冬季暴雨预报提供参考。     

新疆艾比湖全新世以来的环境变迁与古气候

于1990，1991年夏对新疆艾比湖湖盆地区进行调查，运用孢粉、元素地球化学、碳酸盐含量以及测年分析，对其沉积物进行研究，重建了湖区全新世古气候的演化序列。结果表明，10．2－8．0kaB．P，气候温凉偏干；8．0－3．5kaB.P，气候以温湿为主，其中7．3－6．4kaB．P．为相对稳定暖湿期；3.5kaB．P.至今，以温干为主，气候与现代相似。随着湖面波动，艾比湖保存有全新世3个不同时期高潮面遗迹，并应用水热平衡模型，对各个高潮面期的古降水量进行计算，全新世暖湿期的降水量比现今高出1／4以上，超过300mm／a，这时期湖面扩大了近3倍。     

2003年烟台四十里湾海域主要水质指标分析

2003年四十里湾赤潮监测资料显示:整个水域呈贫营养状态,磷酸盐为浮游植物生长的限制因子。无机氮、磷酸盐主要以陆源径流得以补充,硅酸盐主要以沉积物释放,通过海水上下混合得以补充,均以浮游植物的消耗而减少;叶绿素a与磷酸盐呈正相关关系。     

典型河口浮游动物种类数及生物量变化趋势的研究

依据国家海洋局2004-2006年每年5月和8月的黄河口、长江口和珠江口生态监控区浮游动物的监测结果，对上述河口浮游动物和桡足类种类数及浮游动物生物量分布进行了分析，并将结果与历史资料进行同测区、同季节的对比。结果表明，与全国海洋普查时期相比，2006年黄河口浮游动物种类数下降了50．6％，桡足类种类数下降了53.3％；桡足类在浮游动物中所占比重由1985年的42.4％下降到2006年的32．6％。长江口浮游动物种类数有所上升，但是桡足类种类数由1985年的62种降低到2006年的37种；桡足类在浮游动物中的比重从1958年的54．2％降低到2006年的42．5％。珠江口桡足类在浮游动物中所占的比例由1959年的59．3％下降到54．4％，未发生明显变化。黄河口春季、夏季浮游动物生物量上升趋势不明显，夏季增幅较小；长江口自2000年以后春季浮游动物平均生物量为528．36mg／m^3，是1958年的2．4倍，2005年与2006年夏季浮游动物生物量分别是1958年的2．2和2．7倍，增加趋势十分明显；珠江口春季浮游动物生物量上升趋势最为显著，2004-2006年3年春季浮游动物平均生物量是1959年同期的5．7—8．7倍，1981年、2006年夏季生物量分别比1959年增加了3．1倍和11倍。就这3个河口生物量变化趋势看，珠江口生物量的上升趋势最为明显，长江口次之，黄河口变化幅度较小。