海带和长海带配子体无性繁殖系微卫星DNA多态性比较分析

探讨促进海带配子体克隆资源的有效保存和合理利用途径,进行海带良种和杂交海带培育,开发了18个海带微卫星DNA标记,并用这些标记分析了海带和长海带配子体克隆的遗传多样性.这些标记相互独立,至少在1个物种中呈多态性.在36份海带配子体中,这些标记检测到的等位基因数量从2～7个不等,揭示的基因多样性在0.21(H144)和0.75(H120)之间,揭示的香农氏信息指数在0.37(H144)和1.55(H120)之间.长海带和海带的平均等位基因数(1.5/3.3),平均基因多样性(0.12/0.45)和平均香农氏信息指数(0.20/0.81)显著不同.根据总样本确定的前2个最丰富等位基因中,绝大多数的频率在长海带和海带之间存在显著差异.长海带和海带之间在基因多样性和香农氏信息指数反映的遗传多样性上的平均遗传分化分别达35.6%和36.9%.     

我国引种海带和栽培品种(系)来源配子体克隆的AFLP分析

用AFLP方法进行了11个海带自然种群和养殖品种(系)来源的配子体克隆的遗传分析.9对引物组合共扩增出246个位点,仅14个位点为单态,多态比例达到 94.3%.各材料间的Nei's遗传距离在0.280～0.726之间,平均为0.512,其中长海带与其它材料间的遗传距离最远.UPGMA聚类分析将各材料大致分为3类群,基本反映了各材料来源孢子体表型特征的分化,也在一定程度上反映了目前海带养殖品种间存在混杂.将扩增图谱转换成[0/1]型数据集,构建了不同材料的指纹图谱,发现55个特征标记,其中26个为特异标记.     

海带杂种优势苗种繁育技术研究

用生物反应技术进行海带配子体克隆的连续培养,将丝状体克隆细胞粉碎后,用两系法培育杂种优势苗种.实验结果表明,雌、雄海带配子体克隆细胞的日增重速率可达14.03%和13.87%,经42d培养增重6.9倍和6.8倍;雌、雄配子体克隆细胞杂交16d,排卵率为100%;培养40d后幼孢子体长度为2~3cm,经海上养殖实验,初步筛选出了一个较好的杂交组合.     

大剂量Co~(60)γ-射線对海带配子体的影响

本实验观察了大剂量Co~(60)γ射线对海带多细胞雌、雄配子体的致死影响。 从实验的观察和对实验所得的材料分析,可以得出以下几点初步结论: (1)12万伦的Co~(60)γ射线没有立即引起配子体在射线下死亡,而仅仅少数个体的个别细胞,色素体开始有微小的变化。受照射各组配子体的死亡均发生在照射后第2天。 (2)海带多细胞雌配子体对辐射的抗性,要比海带单细胞雌配子体强。因为单细胞雌配子体在30天里的致死X射线剂量是6,000伦左右,但是12万伦的Co~(60)γ射线却不能在30天里使多细胞配子体全部死亡。 (3)海带雄配子体要比多细胞雌配子体对辐射敏感。因为受12万伦Co~(60)γ射线照射,在照射后经过12天,雄配子体已经全部死亡,但雌配子体却仅死亡60％。雄配子体对辐射的敏感性大于雌配子体。 (4)受大剂量γ射线照射后的海带配子体,不仅仅引起许多配子体的死亡,而且还严重地影响配子体的进一步发育。这表现在:受照射各组合子和孢子体的形成很少;孢子体细胞分裂不规则等等。并且大多数的合子和几乎全部的幼孢子体均相继发生死亡。 (5)受照射组的配子体细胞、合子和幼孢子体细胞的死亡过程相似。     

超声波对海带配子体克隆的作用

研究了超声波对海带配子体克隆粉碎效果、存活率及生长发育的作用。实验表明：在４００Ｗ处理３０ｓ后再用２００Ｗ处理６０ｓ,海带配子体克隆簇状体的粉碎效果较好：培养７天时细胞日生长速率为０．１５７;大量扩增７天雌、雄配子体克隆的鲜重增重最大为３．４７０ｇ：培养１４天雌性配子体克隆发育率为５２．１％。可作为一种快速、高速、简便的粉碎海带配子体克隆簇状体,制备单细胞悬液的方法。     

海带配子体无性繁殖(克隆)技术研究与应用进展

海带具有异型世代交替,其配子体在单独分离培养时可进行营养生长,形成无性繁殖系(克隆)。本文简要回顾了海带配子体克隆技术研究与应用的历程,综述海带配子体克隆在海带种质资源保存、海带生理和遗传学研究及海带育种和苗种繁育中的应用现状。     

运用分子标记辅助构建海带核心种质资源

海带(Saccharina japonica)是一种具有重要经济和生态价值的大型海藻,配子体是其种质资源保存的形式,也是海带杂交育种、育苗的材料。为有效管理和评价海带种质资源,初步构建了海带核心种质资源,利用RAPD标记技术对海带"早厚成一号"的28份配子体进行了遗传学评价。采用UPGMA聚类法,根据遗传相似性系数进行分组,采用简单比例法进行取样(25%、35%、50%、65%)分析,计算不同取样比例时的遗传多样性参数,结合样本的生长状态和雌、雄比例,综合评价遗传多样性的各种参数,取样比例为50%时构建的核心种质库相对合理。本研究为海带品种(系)的核心种质的筛选和遗传学评价打下基础。     

海带配子体克隆细胞附着的初步研究

海带是我国海水养殖主要品种之一,其综合应用价值较高[1].20世纪90年代末期,海带配子体克隆在海带苗种繁育中的应用,为海带育苗生产开辟了新途径[2].主要运用生长发育调控技术实现海带配子体克隆细胞大量扩增和同步成熟来繁育海带优良苗种,这样可大幅度降低育苗成本,缩短育苗周期,该项技术具有良好的应用前景.目前海带配子体克隆育苗技术尚未在海带育苗生产中得到规模化应用,其作为一项高新技术,部分关键技术仍有待进一步解决.在与有关生产单位进行海带配子体克隆育苗实验的工作中,笔者认为克隆细胞的附着是影响海带商品苗质量(出苗密度及出苗均匀程度)的关键问题之一.     

海带雄配子体单性生殖叶状体的特性

海带雄配子体经单个分离培养,长成丝状体细胞,这些细胞体积逐渐增大,由单性生殖直接发育成叶状体.这种叶状体的畸形率达93 3%,将叶状体养殖在海上,能长成大海带,但它们都不能成熟.这些叶状体在同一克隆遗传特性十分一致,不同克隆则存在明显差异.     

由海带雄配子体培育成大孢子体首获成功

“花粉育种”即单倍体育种已成为高等植物的育种手段之一。海藻方面也开展了这方面的研究。 Yabu(1964)进行了海带雌、雄配子体的分离,报道了雌配子体可孤雌生殖长成小孢子体,而雄配子体则不能。方宗熙等(1978)报道了由     

雌雄比对海带雌配子体发育的影响

本实验进行了不同雌雄比对海带雌配子体发育的影响。结果表明：雌雄比(鲜重)为1：1及2：1，实验组出现排卵时间最早，且发育率高，实验第20天，发育率超过70％，孢子体正常。5：1，10：1，20：1实验组随着雄性比例的减少，发育率逐渐降低，随着培养天数的增加，三个实验组均出现未受精卵及畸形孢子体，雌雄比越大，未受精卵数目越多。     

进口大菱鲆Scophthalmus maximus L.苗种的遗传结构分析

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)和微卫星两种分子标记技术分析了从法国(F)、英国(E)、西班牙(S)引进我国的三个大菱鲆群体的遗传结构。20个RAPD随机引物对每个群体各20尾大菱鲆的基因组DNA进行扩增，共获得125个重复性好且谱带清晰的RAPD标记，片段大小在200—2500bp之间，三群体的多态位点比例在12．80％—20．00％之间，Nei基因多样性指数在0．0142—0．0352之间，Shannon多样性指数在0．0423—0．0720之间。微卫星引物的分析结果与RAPD一致。总体上，三个群体的遗传多样性均较低，其中西班牙群体遗传多样性水平最高，英国群体次之，而法国群体最低。利用Shannon多样性指数和Nei多样性指数估算群体遗传变异的来源，两者得出一致的结论：群体问遗传分化很弱。AMOVA分析结果进一步证实了shannon多样性指数和Nei基因多样性指数的分析结果：群体的遗传变异有97％以上是由群体内个体问的遗传变异引起的，遗传变异主要来自于群体内个体间，显著性检验表明群体间的变异对总变异的影响不显著。实验结果证明我国进口大菱鲆群体种质较单一。     

海带雄配子体的发育研究

海带雄配子体经单个分离培养，长成复杂的丝状多细胞雄配子体克隆。其中一部分细胞体积较小，逐渐分化为精子囊，并放散精子。而另一部分细胞逐渐增大体积，并经单性生殖发育成叶状体。这些叶状体绝大多数为畸形。染色体计数全为单倍体。把它们移入海里养殖，能正常生长发育，但没有孢子囊，不产生孢子     

Genetic variation of Laminaria japonica (Phaeophyta) populations in China as revealed by RAPD markers

For the population genetics analysis of the naturally grown brown seaweed Laminaria japonica (Laminariales,Phaeophyta) sampled from Dalian,Yantai,Weihai,Rongcheng and Qingdao in China,ten primers were employed to produce 88 bands as revealed by randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) markers,and all these bands were polymorphic.According to these band patterns,there were 94 distinct phenotypes occurred in 100 samples indicating the high heterozygosity of this kelp.Dalian population samples showed the highest percentage of polymorphism (71.67%),and also the higher diversity estimated on the basis of the Shannon’s index (8.498),suggesting that this population could be chosen as the best resource for genetic breeding.The highest diversity of Yantai population possibly resulted from the introduction of L.longissima used for interspecific cross breeding with L.japonica cultivated in China.From Dalian southwards to Qingdao,the genetic variation of the five populations became less with a decrease in latitude,possibly due to the natural selection especially of high temperature.The genetic distance (Φ ST values) of the five populations was a little significantly correlated with the geographical distance (r=0.496) at P =0.05 by Mantel’s test.Weihai,Rongcheng and Yantai populations were closely grouped genetically together by Neighbor-joining cluster analysis probably in that the dispersal of the kelp by propagules more easily occurring in the range of relatively short distance.The analysis of molecular variance (AMOVA) also demonstrated that the relatively higher variation occurred among populations (71.49%) at an extremely significant level (P <0.000 1).All these evidence showed that there was a relatively distinct genetic differentiation among the sampled kelp populations,and L.japonica grown in China was also rather heterozygous in heredity.     

海带对褐藻酸降解菌的抗性与其SOD活性的相关性

运用生物化学的方法测试了2个品系的海带对褐藻酸降解菌抗性的差异性，并对其SOD活性的高低进行了研究。结果表明，海带荣成1号（简称NO.1）对褐藻酸降解菌的抗性远远高于海带901（简称901）；海带荣成1号细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的活性明显高于海带901，二者显著正相关。说明海带SOD活性的高低与其对褐藻酸降解菌的抗性大小有一定的相关性。     

三十烷醇对海带叶绿体超微结构的效应

本文将经不同浓度三十烷醇处理的海带进行电镜切片观察,结果表明经三十烷醇处理后的海带,其叶绿体形态发生显著改变。与对照组相比,叶绿体中的类囊体片层增多,基质浓厚,其外形更为饱满,光合作用的强弱与类囊体片层的多少关系密切。文中从细胞学的水平上分析了三十烷醇促进海带增产的内在原因。     

Study on the breeding technology of heterosis seedling of Laminaria and new combinations

After continuous breeding gametophyte of Laminaria, then breaking protonema, heterosis seedling is got by bilineal hybridization. The result shows that the weight-increasing rate of female and male gametophyte clone cells are 14.03% and 13.87%, after 16 d crossbreeding, the rate of ovulation is up to100%; the length of juvenile sporophyte after 40 d breeding is 2-3 cm. By fanning on the sea, a hybrid combination is primarily screened.     

褐藻酸降解菌对海带感染能力差异性分析

对分离得到的5株褐藻酸降解菌进行了感染海带的实验，确定5株菌均为海带病烂的致病菌。对其降解能力和感染能力的实验表明，5株菌对褐藻酸钠的降解能力存在差异，它们对海带感染能力的差异与其对褐藻酸钠的降解情况相类似，在褐藻酸降解菌的感染下，海带光合速率下降，感染能力强的菌株对光合作用的影响明显大于感染能力弱的菌株。     

海带膳食纤维的提取与功能性试验

采用酶技术和化学处理相结合的方法 ,研究了海带膳食纤维的工艺技术 ,筛选出海带膳食纤维提取和漂白的最佳工艺条件 ,提取出海带膳食纤维产品 ,并进行人体的功能性试验。结果表明 ,海带膳食纤维的产率达 2 7.3% ,颜色为类白色 ,膳食纤维含量达 73.3% ,钙含量 7.5% ,膨胀力为55m L/ g,持水力为 2 650 % ;海带膳食纤维的功能性优于小麦麸皮膳食纤维 ,对便秘患者具有良好的疗效。