合浦珠母贝转录因子PF-CREB3L2基因的克隆和鉴定

克隆得到了合浦珠母贝(Pinctada fucata)PF-CREB3L2蛋白的c DNA序列,其c DNA全长1 983 bp,其中开放阅读框长度为1 728 bp,编码的蛋白含有575个氨基酸残基。组织表达分布实验发现,其在合浦珠母贝内脏囊中表达量最高,在外套膜和鳃中也有大量表达,推测其广泛参与合浦珠母贝的贝壳形成等生理活动。贝壳损伤修复实验中发现,在合浦珠母贝贝壳受到损伤后,PF-CREB3L2和基质蛋白的表达量会迅速上升,且PF-CREB3L2的峰值出现更早,推测其通过影响基质蛋白转录,参与合浦珠母贝生物矿化的调控过程。PF-CREB3L2与合浦珠母贝基质蛋白表达相关性的分析发现,PF-CREB3L2与Prisilkin39、KRMP的表达量呈现显著的正相关,说明其可能特异性地调控某些基质蛋白的转录。     

合浦珠母贝β-肌动蛋白基因的克隆和序列分析

为进一步研究珍珠质基质蛋白外排机制,同时为今后合浦珠母贝(Pinctada fucata)不同组织的基因表达研究提供阳性对照,根据大鼠(Rattus norvegicus)胞质型肌动蛋白β-actin设计引物,通过RT-PCR方法克隆鉴定了合浦珠母贝肌动蛋白同源基因片段。序列分析表明,该片段编码的氨基酸序列与相应同源片段具有较高的保守性。合浦珠母贝β-肌动蛋白有多个特有的氨基酸残基。合浦珠母贝可能是在系统进化上较早分出的一支。     

珍珠贝多糖肽对合浦珠母贝非特异性免疫的影响

以不同浓度的珍珠贝多糖肽投喂合浦珠母贝15—75d后，实验合浦珠母贝(Rinctada marlensii）的血细胞的总量及各种血细胞的数量、吞噬细胞的吞噬能力、血清对细茸的凝集、抑菌和杀菌活力等都有不同程度的增加，表明该珍珠贝多糖肽可以增强合浦珠母贝非特异性免疫能力。     

合浦珠母贝、长耳珠母贝和大珠母贝种间人工杂交的研究——Ⅰ.人工杂交和杂交后代的观察

合浦珠母贝Pinctada fucata、长耳珠母贝 P.chemnitzi、大珠母贝 P.maxima都是海产珍珠养殖的种类,它们在形态、生理生态及分布等方面都存在较大的差异。为了改良合浦珠母贝育珠性状,提高贝体的生活力,我们从1976年开始进行了上述三种珠母贝的种间杂交试验研究,并获得几种杂交组合的后代。     

三倍体合浦珠母贝不育性研究

对三倍体合浦珠母贝Ｐｉｎｃｔａｄａｍａｒｔｅｎｓｉｉ（Ｄ．）春、秋两繁殖盛期的生殖腺进行了组织学观察，并对其配子形成及受精、发育进行了研究。结果表明：合浦珠母贝三倍体的生殖腺发育差，生殖细胞数量少，极少个体能见到成熟卵母细胞和精子；三倍体的配子能完成受精作用，能发育至直线铰合期。配子多为非整倍体，其染色体数目多为１４—２８，胚胎染色体数目主要为２８—４２，故胚胎不能正常发育。因此，三倍体合浦珠母贝是不育的．     

盐度和pH对合浦珠母贝（Pinctada fucata）耗氧率和排氨率的影响

采用实验生态学方法,对3种规格的合浦珠母贝在不同盐度和pH下的耗氧率和排氨率进行了研究。结果表明,盐度对合浦珠母贝的耗氧率和排氨率有极显著影响（P〈0．01）。在盐度21—36的范围内,耗氧率和排氨率均随盐度的升高而降低,且单位体重耗氧率、排氨率随其个体的增大而变小;pH对合浦珠母贝的耗氧率有极显著影响（P〈0．01）...     

人工诱发合浦珠母贝雌核二倍体发生及“Hertwig效应”的初步研究

用中心波长为254nm、光照强度为4μW/cm~2的紫外线,照射合浦珠母贝[Pinctada ma-tensil(D_o)]和长耳珠母贝[Pinctada chemnitzi(P_o)]的精子,然后与合浦珠母贝的正常卵授精,在0-150s的照射范围内,从早期胚胎存活率上可以观察到“Hertwig效应”的存在,由此得到的单倍体和非整倍体胚胎在孵化前死亡。精子经120s紫外线照射后,染色体完全失活,但受精作用仍能正常发生。长耳珠母贝精子经 120s照射,异种授精(♀合×♂长)后21min,用浓度为0.4mg/l的细胞松弛素B处理15min,抑制受精卵的第二极体排放,可以诱发合浦珠母贝产生74.0％雌核二倍体胚胎,其孵化率为2.1％。     

三倍体合浦珠母贝不育性研究

对三倍体合浦珠母贝Ｐｉｎｃｔａｄａ ｍａｒｔｅｎｓｉｉ（Ｄ．）春、秋两繁殖盛期的生殖腺进行了组织学观察，并对其配子形成及受精、发育进行了研究。结果表明：合浦珠母贝三倍体的生殖腺发育差，生殖细胞数量少，极少个体能见到成熟卵母细胞和精子；三倍体的配子能完成受精作用，能发育至直线铰合期。配子多为非整倍体，其染色体数目多为１４－２８，胚胎染色体数目主要为２８－４２，故胚胎不能正常发育。因此，三倍体合浦珠母     

合浦珠母贝附着生物防除的研究——Ⅰ.附着生物对合浦珠母贝生长和生存的影响

合浦珠母贝(Pinctada fucata G.)在养殖过程中,无论是母贝养殖期或育珠期,都有大量死亡,有的死亡率高达90％左右。其原因,前几年主要是由多毛类的凿贝才女虫(Polydora ciliata)凿穿贝壳的继发性脓疡(俗称“黑心肝病”)所引起的,现已基本得到控制。近年来附着物对合浦珠母贝的危害是造成贝体生长不良和死亡的重要原因之一。     

合浦珠母贝、长耳珠母贝和大珠母贝种间人工杂交的研究——Ⅲ.同工酶谱的比较研究

为了进一步从分子水平验证前文所述的形态学和细胞学的观察结果,并了解杂交后代基因表达的调控机理,我们进行了同工酶谱的比较研究。 一、材料和方法 1.实验材料 合浦珠母贝、长耳珠母贝和大珠母贝是野生贝。大珠母贝采自海南岛西部海域,其他二种采自广西合浦海区。杂交贝(图1:2,4,6)是1976—1980年间在徐闻珍珠场用人工杂交授精方法育成。活贝运回实验室后,置-30℃低温冰箱内贮存备用。     

三倍体和二倍体合浦珠母贝育珠比较初步研究

利用人工诱导培育的三倍体合浦珠母贝Pinctada martensii(D.)进行插核育珠试验,并同处理组内的二倍体同胞进行比较。结果表明:三倍体合浦珠母贝的留核率和正圆珠比率分别为81.0％和58.8％,而二倍体则为71.3％和37.8％;在非正圆珠中两者的污珠率差别不大,但三倍体的尾巴珠和素珠的比率明显低于二倍体;三倍体的正圆珠珍珠层平均厚度和平均重量分别为381μm和163mg,二倍体分别为265μm和105mg,两者差异极显著(P<0.01)。初步表明,利用三倍体合浦珠母贝培育珍珠,能缩短育珠期,提高珍珠的产量和质量。     

合浦珠母贝四倍体诱导过程中非整倍体的产生

合浦珠母贝Pinctadamartensii (Dunker)三倍体的卵与二倍体的精子授精 ,以细胞松弛素B(CB)抑制第一极体释放诱导四倍体 ,得到胚胎期非整倍体占 (88.1 8± 6 .79) % ,1龄贝中非整倍体约占 2 8.70 %。成贝非整倍体染色体数目有 2 9,3 0 ,40 ,41 ,43条 5种类型。非整倍体作为一个群体其壳长和体重与二倍体无明显差异 (p >0 .1 0 ) ,但与三倍体有显著差异 (p<0 .0 1 ) ;二倍性水平的非整倍体的壳长和体重明显小于二倍体 (p <0 .0 1 ) ,而三倍性水平的非整倍体与二倍体无明显差异 (p >0 .1 0 )。研究结果表明 ,合浦珠母贝能耐受约单倍体染色体数目 7%— 1 4%的增加或减少 ,且表明合浦珠母贝非整倍体在一定条件下是可以存活的。     

高温胁迫对合浦珠母贝不同群体存活及免疫酶活性的影响

为比较合浦珠母贝(Pinctada fucata)不同群体在高温胁迫下的存活及免疫酶活性变化情况,本实验以“海优1号”(YY)、“海选1号”(XX)、“南科1号”(KK)和广西潜在耐高温养殖群体(TT)为实验材料,通过渐变升温的方式测定4组合浦珠母贝在35℃水温胁迫下的生理指标,研究不同胁迫时长对合浦珠母贝存活及其鳃组织内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)和碱性磷酸酶(AKP)活性的影响。研究显示,实验第8天开始出现个体死亡,TT组在实验12 d后存活率显著高于其余3组(P<0.05);4个群体的SOD、CAT和T-AOC活性随胁迫时间的延长大致呈上升-下降的趋势,在1～24 h内免疫酶活性呈上升趋势,在120 h后下降至对照水平以下;在高温胁迫下各组的AKP活性增加,KK、TT与XX、YY分别在12和24 h达到峰值,在120 h显著下降。本研究初步探明了高温胁迫下合浦珠母贝的免疫应答机制。     

合浦珠母贝敌害生物嵌线螺的生物防治初探

从海南岛三亚海区11种常见的肉食性腹足类中，筛选出2种能捕食嵌线螺Cymatium但不危害合浦珠母贝Pinctada martensii的物种；织锦芋螺Conus textile和方斑东风螺Bab-ylonia areolata。将这2种腹足类作为嵌线螺的生物防治物种，对防止嵌线螺危害合浦珠母贝具有良好作用，但在珍珠贝养殖生产中将织锦芋螺作为嵌线螺的生物防治物种时，需要解决防逃问题，若将方斑东风螺作为嵌线螺生物防治物种，则需解决其生存的饵料问题。     

合浦珠母贝代谢产物对异枝麒麟菜生长的促进作用

于１９９５年４月间在海南省三亚市、陵水县分别采集合浦珠母贝和异枝麒麟菜并进行混养实验，测定贝释放的三氮（ＮＨ４－Ｎ，ＮＯ３－Ｎ，ＮＯ２－Ｎ）以及藻类对贝释放的三氮的吸收及其生长，在期探讨合浦珠母贝代谢产物促进异枝麒麟菜生长的原因。结果表明，贝释放物中以ＮＨ４－Ｎ为主，ＮＯ３－Ｎ次之，ＮＯ２－Ｎ含量较少；藻对三氮的吸收 依此顺序递减。实验组藻体的生长速率明显高于对照组的，在模拟实验组中，通过加入无机     

马氏珠母贝微卫星快速分离及遗传多样性分析

马氏珠母贝(Pinctada martensii Dunker)又称合浦珠母贝,是世界上用于生产海水珍珠的最主要贝类之一.自60年代我国成功地开展马氏珠母贝的人工育苗以来,海水珍珠养殖业发展迅速,至20世纪90年代,海水珍珠养殖已成为广东、广西和海南沿海部分地区的支柱产业,海水珍珠成为出口创汇的重要产品.海水珍珠产业的发展仅靠采捕天然野生的亲贝已不能满足生产的需要,越来越多地用人工养殖的亲贝进行人工繁殖.而采用少数亲贝(尤其是养殖亲贝)的育苗导致近亲繁殖,使马氏珠母贝种质资源出现了退化,在海水珍珠养殖上产生的直接后果是珍珠的质量和产量(单产)明显下降.     

合浦珠母贝三倍体死亡率观察

以染色体倍性鉴定方法检查合浦母贝Ｐｉｎｃｔａｄａｍａｒｔｅｎｓｉｉ三倍体处理组的４个不同发育生长期的三倍体比例，并将同一处理组培育出的贝苗经倍性鉴定后将二倍体和三倍体分开，在海上吊养１周年，分别检查其死亡率，观察比较三倍体合浦珠母贝的死亡状况。     

合浦珠母贝精子激活机制的初步研究

分别用氨海水、不同盐度的氨海水、Na~ ,K~ ,Ca~2 ,Mg~(2 )的氯化物及Na~ ,K~ 的硝酸盐和NH_4Cl,NH_4Cl,NH_4NO_3,（NH_4）_2SO_4和（NH_4）_2CO_4为激活剂,对人工解剖获得的合浦珠母贝Pinctadamartensii精子进行激活。实验结果表明,合浦珠母贝精子的细胞膜离子通道为闸门控制类型。其激活途径主要是通过NH~ _4或HCG类激素开启该闸门,发生Na~ 和Cl~-的交换,使精于细胞获得或释放能量而激活。pH太低则会影响它们的激活作用。     

合浦珠母贝精子激活机制的初步研究

分别用氨海水、不同盐度的氨海水、Na＋,K＋,Ca2＋,Mg2＋的氯化物及Na＋,K＋的硝酸盐和NH4Cl,NH4NO3,（NH4）2SO4和（NH4）2CO4为激活剂,对人工解剖获得的合浦珠母贝Pinctada martensii精子进行激活。实验结果表明,合浦珠母贝精子的细胞膜离子通道为闸门控制类型。其激活途径主要是通过NH4＋或HCG类激素开启该闸门,发生Na＋和Cl－的交换,使精子细胞获得或释放能量而激活。pH太低则会影响它们的激活作用。     

合浦珠母贝精子激活机制的初步研究

分别用氨海水、不同盐度的氨海水、Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋,Ｃａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋的氯化物及Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋的硝酸盐和ＮＨ４Ｃｌ,ＮＨ４ＮＯ３,（ＮＨ４）２ＳＯ４和（ＮＨ４）２ＣＯ４为激活剂,对人工解剖获得的合浦珠母贝Ｐｉｎｃｔａｄａ ｍａｒｔｅｎｓｉｉ精子进行激活,实验结果表明,合浦珠母贝业郛的细胞膜离子通道这闸门控制类型,其激活途径主要是通过ＮＨ４或ＨＣＧ类激素开启该闸门,发生Ｎａ和Ｃｌ的交换,使精子细