副溶血弧菌菌株1211U的活的非可培养状态

将副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）菌株１２１１培养于低温贫养条件下,以平板菌落计数法（ＰＣ）和最大近似数法（ＭＰＮ）检测可培养细菌数,５０￣６０ｄ后表明可培养数下降为零。吖啶橙荧光显微镜直接计数法（ＡＯＤＣ）检测细菌总数,表明细菌总数始终变化不大,而活菌直接计数法（ＤＶＣ）检测到的活菌数保持在１０＾５个／ｍｌ。本实验证明了副溶血弧菌１２１１Ｕ株在一定的条件下或进入活的非     

副溶血弧菌、脂多糖和嗜酸小球菌对凡纳滨对虾血清一氧化氮合酶的影响

探讨了凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei血细胞中是否存在一氧化氮合酶(NOS)活性,进行了副溶血弧菌Vibrioparahaemolyticus和哈维氏弧菌Vibrioharveyi脂多糖(LPS)体外孵育实验,采用亚硝酸盐法对凡纳滨对虾血细胞中NOS活性进行了测定。结果表明,副溶血弧菌和LPS离体孵育血细胞组的一氧化氮(NO)浓度显著高于对照组,而且这一反应能被NOS抑制剂亚硝基L精氨酸甲酯(LNAME)所阻断,证实了凡纳滨对虾血细胞中存在NOS活性。同时进行了副溶血弧菌感染凡纳滨对虾对其血清NO浓度和NOS活性的影响试验。试验表明,副溶血弧菌注射感染凡纳滨对虾后12h血清中NOS活性极显著高于对照组;NO浓度在注射后24h开始升高,72h后各组NO浓度都显著高于对照组。说明副溶血弧菌感染凡纳滨对虾可以诱导NOS的表达,并产生NO来抵抗副溶血弧菌的入侵,从而增强了对虾的免疫力。此外将嗜酸小球菌Pediococcusacidilactici按10.0mg·kg-1添加到饲料里投喂凡纳滨对虾后,血清中溶菌酶活力和NOS活性比对照组有显著提高,且溶菌酶活力和NOS活性存在显著正相关性(r=0.629,r0.05[1,12]=0.532)。从而进一步说明了NOS活性可以作为凡纳滨对虾免疫力高低的有效指标。     

检测海洋弧菌的酶联免疫吸附试验研究

研究建立中国对虾病原菌┐副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）快速检测技术。间接ＥＬＩＳＡ技术中的副溶血弧菌的特异抗血清由家兔制备，羊抗兔ＩｇＧ用碱性磷酸酶标记，酶的底物为对磷酸基硝基苯。将该技术标准化后，测定了抗血清与１３株其它副溶血弧菌菌株及２９株其它弧菌标准菌株的交叉反应，并进行了苗期对虾样品中副溶血弧菌的检测     

斑节对虾病原菌胞外产物的致病性研究

由养殖濒死病虾体内分离的副溶血弧菌(2019#)、溶藻弧菌(4302#)和嗜水气单胞菌(1003#)培养液中分别提取了胞外产物,测定了酶成分,定量分析了蛋白酶及磷酸酯酶的活性.用细菌胞外产物粗提液对斑节对虾进行致死试验,戊二醛固定致死对虾的肝组织,电镜观察了斑节对虾肝组织的超微病变,初步探讨了三株细菌胞外产物诱发虾病的病理.     

间接免疫荧光抗体技术检测活的非可培养状态的副溶血弧菌

副溶血弧菌 (Ｖｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ)是在海洋及盐湖环境中分布极为广泛的一种致病性嗜盐细菌 ,一般在冬季用常规方法不易将其检出［１］,并且在冬季的暴发频率和发病水平都远远低于夏季。Ｗｏｌｆ和Ｏｌｉｖｅｒ于１９９２年 ,Ｊｉａｎｇ等［３］均发现副溶血弧菌在低温贫营养的条件下可进入活的非可培养状态 (ＶｉａｂｌｅＢｕｔＮｏｎｃｕｌｔｕｒａｂｌｅＳｔａｔｅ,ＶＢＮＣ),即细菌处于不良环境条件下 ,细胞缩成球形 ,用常规方法培养不能使其生长繁殖 ,但仍然是活的一种特殊存活形式［１］。作者在对副溶血…     

4株对虾肠道益生菌的筛选及鉴定

采用体外拮抗试验的方法，先从不同生长阶段的对虾肠道中分离的96株细菌中筛选出4株对病原菌（鳗弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌）有拮抗作用的细菌；进一步通过固体扩散法和液体混合法确定LV060806、LV060808的产物对鳗弧菌有明显抑制作用，Lv060806、LV060815的产物对副溶血弧菌有明显抑制作用，LV060810、LV060815的产物对哈维氏弧菌有明显抑制作用。溶血试验证实这些菌株不产生溶血素，不具有潜在的致病性；动物安全性实验证实菌株浓度在10^6 cfu／ml以下对实验对虾无明显的毒害作用。随后测定了其16S rRNA基因序列，分析了相关细菌相应序列的同源性，构建了系统发生树，结合菌株表型特征和生理生化特性最终鉴定结果为：LV060806、LV060808为Vibrio natriegens；LV060810、LV060815为V.alginolyticus。     

苗期中国对虾幼体异养细菌区系及其变化与病害发生的关系

研究了2个育苗场不同发育期的中国对虾(Penaeus chinensis)幼体的异养菌和弧菌种群变化的动态过程。以典型特征法、BIOLOGGN法和数值分类法对菌株进行鉴定。结果表明，对虾幼体样品中所分离的细菌，大多是革兰氏阴性杆菌。鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas)、气单胞菌属(Aeromonas)和弧菌属(Vibrio)。弧菌属主要为溶藻弧菌(Vibrioal-ginozyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。在对虾幼体发育早期，假单胞菌(Pseudomonas)和气单胞菌(Aeromonas)占优势，随着对虾幼体的发育，弧菌(Vibrio)渐成为优势，其中溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)优势明显。二者的消长与苗期病害的发生相关，溶藻弧菌总是在虾幼体健康时出现或成为优势，而哈维氏弧菌成为优势时，苗期病害容易发生。     

一株许氏平鲉(Sebastes schlegelii)肠道乳酸菌的分离鉴定及特性分析

为筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌用于微生态制剂开发,本研究自野生许氏平鲉肠道内共分离出35株细菌,从中筛选出1株乳酸菌YH1,其革兰氏染色呈阳性,且可发酵脱脂乳产生凝固、无气泡、呈酸性现象,基于形态学观察、生理生化和16S rDNA序列鉴定乳酸菌YH1为食窦魏斯氏菌。分析了酸碱度、温度和NaCl含量对食窦魏斯氏菌YH1生长的影响;选取金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟钝爱德华氏菌、鳗弧菌、假交替单胞菌和哈维氏弧菌等多种病原指示菌,以琼脂扩散法测定YH1培养12h产物的抑菌活性;并采用肌肉注射和腹腔注射两种方式对YH1的动物安全性进行检测。实验结果显示,食窦魏斯氏菌YH1适宜的生长条件为pH5.7—8.8、温度20—40oC,最适生长条件为pH7.2—8.4,温度35oC,在MRS培养基中添加NaCl会抑制YH1的生长;食窦魏斯氏菌YH1的无菌培养产物可显著抑制金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟钝爱德华氏菌、鳗弧菌、假交替单胞菌、哈维氏弧菌等病原指示菌的生长;食窦魏斯氏菌YH1在10~8CFU/m L及以下浓度对许氏平鲉是相对安全的。以上研究表明了食窦魏斯氏菌YH1具有广谱抑菌性和动物安全性,为其应用于水产养殖业奠定了理论基础。     

庆康灵6号药物对中国对虾免疫力的作用

养殖的中国对虾用尖加０．３％主康灵６号的０实验饲料进行了１８天投喂,在停止投喂实验饲料后的第２、８、１３天分别测定了对虾血淋巴淋巴、血浆的抗菌活力和血细胞溶解物的酚氧化酶活力。     

LAPP对中国对虾（Penaeuschinensis）生长,缺氧耐受力免疫抵抗力的影响

实验研究维生素Ｃ多聚磷酸添加在对虾饲料中，对中国对虾的生长、缺氧耐受力免疫抵抗力的影响；实验进一步证明了中国对虾饲料中ＬＡＰＰ的最适添加量为４００ｍｇ／１００ｇ饲料；本文还提出饲料中的ＬＡＰＰ能够提高中国对虾的缺氧耐受力，在溶氧超过３．１ｍｇ／ｋｇ海水的情况下，效果显著，在降低到２．３ｍｇ／ｋｇ海水时，作用减弱，用副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）注射入虾体内，１２小时内记录     

注射生物胺对凡纳滨对虾免疫指标的影响

研究了注射生物胺(多巴胺、5-羟色胺)对凡纳滨对虾Litopenaeus vanna mei免疫指标的影响。结果表明,注射生物胺(10-9mol.尾-1)对凡纳滨对虾血细胞数量、血淋巴酚氧化酶活力、溶菌和抗菌活力影响显著(p<0.05),而对照组各免疫指标无明显变化;在实验时间内,注射生物胺处理组各免疫指标呈明显峰值变化,血细胞数量均在3h达到最小值,血淋巴酚氧化酶活力和溶菌、抗菌活力均分别于6h时达到最大值和最小值,且多巴胺处理组各免疫指标比5-羟色胺处理组变化更明显,其中大、小颗粒细胞和血淋巴酚氧化酶活力在12h后保持稳定,总血细胞和透明细胞数量18h后趋于稳定,血淋巴溶菌和抗菌活力在24h后稳定,而且稳定后各免疫指标与对照组均无显著差异。     

人工饲料饲养的对虾肠道菌群和水体细菌区系的研究

对人工饲料饲养的凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei成虾肠道菌群组成及其水体细菌区系组成进行了研究.分离纯化后的革兰氏阴性菌鉴定到种的水平.对虾肠道菌群主要由弧菌Vibrio spp.、希瓦氏菌属Shewnella spp.、嗜氢菌属Hydrogenophaga spp.、伯克霍尔德氏菌Burkholderia spp.、气单胞菌Aeromonas spp.、食酸菌Acidovorax spp.和芽孢杆菌Bacillus spp.组成.水体细菌区系主要包括弧菌Vibrio spp.、希瓦氏菌属Shewnella spp.、艾肯菌Empedobacter spp.、无色杆菌Achromobacter spp.和芽孢杆菌Bacillus spp..肠道菌群和水体细菌区系的优势菌是副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus和芽孢杆菌Bacillus spp..利用Shannon-Wiener指数进行多样性分析,发现虾肠道多样性指数（H）和均匀度（J）高于水体细菌区系,而丰度（D）较低.     

皱纹盘鲍经诱导后血淋巴中一些因子变化的研究

于１９９５年１１月在山东荣城大鱼岛鲍养养殖厂采集皱纹盘鲍，以大肠杆菌，弧菌为诱导物，将鲍分为三组分别进行注射，在注射后的５，１８，３２，５０ｈ分别取鲍血淋巴，测定其抗菌，溶菌，酚氧化酶和超氧化物歧化酶活力，并研究注射组各项活力的变化规律。实验结果表明，适当的刺激可增加皱纹盘鲍的抗病能力。     

氨氮对中国对虾抗病力的影响

１９９６年５月２４日－６月１４日,８月１－１９日,分别在青岛的两个养殖场采集海捕产卵后中国对虾亲虾和养殖中国对虾,采用人工添加氨氮并检测对虾和抗菌有关因子的活力的方法,进行氨氮对中国对虾抗病力影响的实验。结果表明,在氨氮浓度较高的实验组,对虾血细胞数目减少,其结构也有变化;酚氧化酶,超氧化物歧化酶和过氧化物酶活力,以及溶菌和抗菌活力都较对照组有明显下降;对病原菌的易感性明显提高。     

Effects of temperature on cellular and biochemical parameters in the crab Carcinus aestuarii (Crustacea, Decapoda)

The effects of temperature on cellular and biochemical parameters of the crab Carcinus aestuarii were evaluated. Crabs were kept for 7 days at 4, 17 (reference value) and 30 °C (salinity of 35 psu), and total haemocyte count (THC), haemocyte volume, haemocyte proliferation, phenoloxidase (PO) activity in both haemocyte lysate (HL) and cell-free haemolymph (CFH), CFH total protein and glucose levels, superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities in both gills and digestive gland were evaluated. The lowest and the highest temperature significantly decreased THC, whereas haemocyte volume and haemolymph glucose concentration did not differ significantly among experimental conditions. Haemolymph protein concentration significantly reduced in crabs maintained at 30 °C, when compared with that of animals kept at 4 and 17 °C. Haemocyte proliferation increased significantly in crabs kept at 4 and 30 °C, when compared with that of crabs held at 17 °C. Likewise, a significantly higher PO activity was recorded in CFH from crabs kept at 4 and 30 °C, than in control crabs. Conversely, PO activity did not vary significantly in HL. With regard to antioxidant enzyme activities, a significant decrease in CAT activity was observed in gills from crabs kept at 4 °C, when compared to that of crabs kept at 17 °C and 30 °C. Results obtained demonstrated that the highest and lowest temperature tested influenced crab biological responses, and indicated that C. aestuarii modulated its cellular and biochemical parameters (mainly haemocyte proliferation, CFH protein concentrations and CFH PO activity) in order to cope with temperature.     

海洋细菌在不同基质表面微生物粘膜中的组成

在青岛近岸海区两个不同地点 ,分别进行浸海挂片实验研究四种不同基质表面 (玻片、钢片以及涂有防污漆、防锈漆的玻片 )微生物粘膜中细菌组成。从不同基质表面微生物粘膜中共分离32 3株附着细菌 ,大多数为杆状或球杆状革兰氏阴性细菌 ,且大部分具有鞭毛。依据形态及生理生化特征将革兰氏阴性细菌鉴定到属 ,分别属于气单胞菌属 ( Aeromonas)、发光杆菌属 ( Photobacteri-um)、莫拉氏菌属 ( Moraxella)、假单胞菌属 ( Pseudomonas)、弧菌属 ( Vibrio)和产碱菌属 ( Alcali-genes)等 12个属 ,其中气单胞菌属是优势菌属。不同基质表面 ,微生物粘膜细菌组成不同     

Seasonal and gender-related differences in morphometric features and cellular and biochemical parameters of Carcinus aestuarii from the Lagoon of Venice

In this study, the seasonal variations in the morphometric features and in the cellular and biochemical parameters of the haemolymph were investigated in both male and female crabs (Carcinus aestuarii). Crabs were seasonally (November 2010–August 2011) collected from the Lagoon of Venice, and the moult stage, weight, width and length of the carapace, and width and length of the bigger chela were evaluated. In addition, the total haemocyte count (THC), haemocyte diameter and volume, haemolymph glucose and total protein levels, and haemolymph phenoloxidase (PO) and N-acetyl-β-glucosaminidase (NAG) activities were measured. The results demonstrated that the collected crabs were all in the intermoult stage and that the males were bigger than the females. A two-way ANOVA revealed a significant effect of season on the THC and the haemocyte volume and a significant influence of gender on the haemocyte diameter. Season and gender significantly affected the haemolymph glucose concentration, whereas haemolymph protein levels were dependent only on the season. In addition, both season and gender significantly influenced the PO and NAG activities in the haemolymph. Overall, the results demonstrated that crab morphometric features as well as haemolymph cellular and biochemical parameters varied markedly as a function of both season and gender.     

鳗鲡气单胞菌引起的烂尾病病原菌抑菌药物的研究

应用药敏纸片法研究了三株烂尾病病原菌（气单胞菌）对３１种药物及不同配合药物的敏感性，测定了４种药物及配合药物ＨＰ对三株菌的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）及最低杀菌浓度（ＭＢＣ）。结果表明，配合药物ＨＰ具较强的抑菌能力。     

几种海产双壳贝类血淋巴中抗菌物质的诱导及其活性测定

以贻贝（Mytilus edulis)，毛蚶（Scapharca subcrenata)，海湾扇贝（Argopecten irdians)和菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinesis)为试验材料，分别用活的和灭活的大肠杆菌为诱导物进行诱导，采用3种革兰氏阳性细菌和3种革兰氏阴性细菌作为指示菌，对4种供试双壳贝类血淋巴进行抗菌活性测定，结果表明：（1）贻贝在诱导前其血淋巴对金黄色葡萄球菌和四联微球菌有抑菌活性，免疫诱导可使血淋巴对鳗弧菌出现抑菌作用；（2）毛蚶在诱导前其血淋巴中含有对金黄色葡萄球菌和鳗弧菌有抑菌活性的物质，诱导对这两种菌的抑菌活性有明显的提高，但未诱导出对另外4种供试细菌有活性的物质；（3）海湾扇贝在诱导前其血淋巴对所有供试细胞均无抑菌活性，但经诱导后产生对金黄色葡萄球菌，副溶血弧菌和鳗弧菌有抑菌活性的物质，且活菌诱导比灭活诱导效果好；（4）菲律宾蛤仔在诱导前其血淋巴仅对金黄色葡萄球菌和鳗弧菌表现出抑菌活性，经诱导后其血淋巴不仅对这两种菌的抑菌活性增强，而且还诱导出对副溶血弧菌有抑菌活性的物质。     

3种水产病原菌简型基因芯片检测技术的建立

根据水产养殖中常见的3种病原菌鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)及迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的研究资料,筛选3个毒力相关基因toxR、aerA、evpA设计引物和探针,构建简型基因芯片,并使用对虾白斑病综合征病毒(WSSV)variable region的PCR荧光标记产物作为表面化学质控。通过已构建和优化的多重PCR反应条件,获得了3个目的基因的PCR产物;经过芯片制作过程的优化,将探针以终浓度20μmol/L溶于50%DMSO,在室温、相对湿度45%的条件下点印于醛基基片表面。扩增的PCR产物与杂交液混合后,在42℃杂交2 h就可检测到理想的杂交信号。芯片的灵敏度试验结果表明,可以检测到的3种水产病原菌的最低模板DNA为:鳗弧菌3×102拷贝、嗜水气单胞菌5×103拷贝、迟缓爱德华氏菌6×101拷贝。该芯片可成功应用于患病大菱鲆内脏的细菌分离物的鉴定。