草鱼出血病两种病原病毒的细胞病理学观察

用电子显微镜观察草鱼(Ctenopharyngodon idellus C.et v.) 出血病的病理切片,在病变细胞中发现有两种病毒颗粒,一种是呼肠孤病毒,以前已有报道;另一种为直径仅20—30nm的小病毒颗粒,系首次在鱼类细胞中发现。两种病毒主要侵染病鱼血管及微血管内皮细胞。内皮细胞受损而至解体,红细胞弥散细胞间隙,导致出血症状。此外还侵染肾上皮细胞,肾间质细胞、肠上皮细胞以及脾网状细胞、嗜酸性白细胞等。根据小病毒颗粒的形态及核酸分析,拟初步鉴别为小RNA病毒科病毒。     

锯缘青蟹(Scylla serrata)呼肠孤病毒5个结构蛋白互作分析

采用酵母双杂交系统,对青蟹呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus)5个结构蛋白(VP3,VP6,VP9,VP11,VP12)间的双向互作进行了分析。将5个结构蛋白对应的ORF分别亚克隆至诱饵载体p GBKT7和猎物载体p GADT7,成功构建了10个酵母双杂交重组载体。将重组诱饵载体或重组捕获载体转化至酵母菌Y2H Gold中进行自激活检测,结果显示5个结构蛋白均不能激活酵母菌报告基因HIS3的表达,表明5个病毒蛋白均不具有自激活活性。通过酵母双杂交实验,从5个结构蛋白25个可能性互作对中,共筛选出2个双向互作对(VP11VP6,VP11VP12)和3个自身互作对(VP3VP3,VP11VP11,VP12VP12)。本研究是有关Ss RV结构蛋白互作的首次报道。     

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)蛋白二硫键异构酶基因的分子克隆与表达分析

蛋白二硫键异构酶(PDI)是内质网中的关键酶, 参与蛋白合成过程中二硫键的形成、还原和异构。本文首次从拟穴青蟹(Scylla paramamosain)克隆获得了PDI基因cDNA全长, 该序列长度为2015bp, 开放阅读框为1452bp, 编码483个氨基酸。荧光定量PCR检测发现PDI存在于拟穴青蟹的多个组织中; 在拟穴青蟹卵巢发育过程中, PDI基因的表达量在前4个时期逐渐上升, 到了第5期(成熟期)表达量则下降, 表明PDI参与了卵巢发育的蛋白合成过程。免疫组化表明, 拟穴青蟹卵母细胞存在PDI阳性反应, 进一步为该分子参与卵巢发育提供了形态学证据。     

中国对虾（Penaeuschinensis）糖虾肌肉组织中球形病毒的超现结构研究

本文用电镜技术对中国对虾糠虾肌组织进行病毒检测,在平滑肌和横纹肌组织中均检出一种球形病毒粒子,直径为８０－１００ｎｍ,具有核包涵体;平滑 病毒粒子存在于肌纤维和核膜催具有不规则形态病毒包涵体;横纹肌组织中,病毒粒子存在于肌浆网和肌浆中。病变肌组织中,肌纤维变形,肌浆网膨胀,核膜水肿。     

青蟹胚胎发生的研究

青蟹Scylla serrata(Forskal)属甲壳纲十足目游泳蟹科,分布于日本、菲律宾、越南、印度等国家,我国的浙江、福建、台湾、广东、广西等省沿海均有分布。青蟹的味道鲜美,其肌肉和生殖腺富有营养,深受人们的欢迎,也是重要的养殖对象。过去,黄胜南等研究过青蟹的幼体发育,纪成林研究青蟹脱皮。Arriola等对青蟹的精子发生、幼体饲养、青蟹的生活史等进行了研究。为探索青蟹的人工养殖,我们对它的胚胎发生做了研究,将结果报道如下。     

锯缘青蟹前脑神经分泌细胞的超微结构

经透射电镜观察，锯缘青蟹（Scylla serrata)前脑具有3种类型的神经分泌细胞。I型细胞最大，胞质中存在许多大小不同的空泡，分泌颗粒数量很少；Ⅱ型细胞中等大小，细胞器发达，分泌颗粒数量较多，形态多样；Ⅲ型细胞最小，分泌颗粒数量最多，电子密度低，细胞器很少。锯缘青蟹前脑神经分泌细胞的特点，为甲壳动物系统演化处于较低的地位提供了形态学证据。     

锯缘青蟹人工繁育技术研究

锯缘青蟹(Scylla serrata)是我国南方地区主要的经济蟹类之一,名优养殖品种。随着青蟹养殖技术的改进和养殖规模的扩大,特别是虾池综合养殖模式迅速的推广,捕捞自然蟹苗已远不能满足生产的需求,青蟹苗种已成为养殖青蟹、甚至南方部分地区虾池养     

中国对虾(Penaeus chinensis)糠虾肌肉组织中球形病毒的超微结构研究

本文用电镜技术对中国对虾糠虾肌组织进行病毒检测,在平滑肌和横纹肌组织中均检出一种球形病毒粒子,直径为80－100nm,具有核包涵体;平滑肌组织中,病毒粒于存在于肌纤维和核膜中,核内具有不规则形态病毒包涵体;横纹肌组织中,病毒粒子存在于肌浆网和肌浆中。病变肌组织中,肌纤维变形,肌浆网膨胀,核膜水肿。     

中国和越南青蟹线粒体16S rRNA基因序列分析

为确定我国青蟹的分类地位及其资源的合理利用与保护提供理论依据，对中国和越南青蟹的线粒体16S rRNA基因片段序列进行了测定，并同Genbank中其他青蟹的序列进行了比较，分析研究了青蟹种内和种间的遗传差异及其分类地位。结果显示：中、越青蟹个体间序列差异极小，与Genbank中Scylla paramamosain同源片段序列的相似性达到99％以上．而与其他3种青蟹的差异达3．91％～8．41％。所得序列与S．paramamosain，S．serrata，S．olivacea及s．tranquebarica的遗传距离分别为0．002，0．075，0．087，0．042，种间遗传距离远大于种内距离。序列特征、遗传距离和系统进化分析结果都表明本文研究的中国和越南青蟹均为S．paramamosain。     

海水养殖蟹体内与外部环境中菌群结构的PCR-DGGE比较——以三疣梭子蟹和锯缘青蟹为例

利用PCR-DGGE指纹图谱技术和UPMGA聚类分析,对三疣梭子蟹Portunus trituberculatus、锯缘青蟹Scylla serrata的鳃组织及养殖环境中的菌群结构进行了对比分析。结果表明:三疣梭子蟹、锯缘青蟹鳃组织及养殖环境水样在指纹图谱上分别显示出21,21,23和21条信号强度不同的条带,条带的数量反映出三疣梭子蟹养殖环境中的菌群最为丰富,条带信号的强度,反映出不同样品中存在各自的优势菌种;可将4个样品中的菌群划分为2个群落,其中三疣梭子蟹和锯缘青蟹鳃组织中的菌群聚为一类,其相似度为75%,2种蟹养殖环境中的菌群聚为一类,相似度为69%。首次尝试利用16S rDNA的PCR-DGGE指纹图谱技术分析了2种健康蟹体内和各自养殖环境中微生物结构的差异性,从而寻找蟹体内的益生菌,将有助于建立一种不依赖于分离培养的原位研究蟹体内菌群组成的分子诊断技术,为今后研究锯缘青蟹、三疣梭子蟹与养殖水体微生物及相关蟹病害的关系提供基础科学依据。     

血卵涡鞭虫在养殖锯缘青蟹中的寄生

利用光镜和电镜对2005年9月浙江三门湾地区某养殖场发生的养殖锯缘青蟹规模性死亡病蟹进行观察，并对病原进行分子生物学鉴定。组织病理学研究发现，病蟹蟹体消瘦，肌肉白浊，头胸甲内可见大量乳白色液体，血淋巴细胞的量急剧减少，代之以大量寄生原虫，该原虫在病蟹的肝胰腺、鳃、心脏、肌肉等部位大量寄生，引起这些组织发生以坏死为主的变质性病变。电镜下，乳白色液体及病变组织内可见大量寄生虫体，其形态特征、内部结构及宿主表现的症状，与血卵涡鞭虫相类似。采用Small等^[5]的血卵涡鞭虫ITS特异引物，扩增出分子量为300bp左右的条带，并对其进行了测序及序列相似性比较，确定该寄生原虫为一种血卵涡鞭虫Hemntodinium sp。血卵涡鞭虫是海水甲壳类的重要病原寄生虫，我国尚未有该寄生虫病的研究报道，文中首次发现其在养殖锯缘青蟹中的寄生，为靳一步研究该寄生虫病积累了资料。     

锯缘青蟹秋苗土池越冬的试验研究

本文报道１９９３和１９９４年秋季作者培育的部分锯缘青蟹仔蟹苗土池越冬试验。结果表明人工培育的青蟹苗在闽南地区的自然条件下,可以在室外土池完全越科,成活率可达６０－８０％,水温是影响青蟹生命活动的主要因素;由于越冬期间青蟹营养积累不足,导致难以顺利地完成越冬后的第一次生长蜕壳,造成大量死亡,这是影响青蟹越冬存活率的主要因素之一;越科后期病死青蟹肝胰组织进行涂片处理,发现６只受检蟹中２只肝胰组织中有日     

盐度胁迫对锯缘青蟹血清及组织、器官中PO和SOD活性的影响

采用酶学方法测定了盐度(5、15、25、35)胁迫下锯缘青蟹血清中酚氧化酶(PO)及其肌肉和肝胰腺中超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化.结果表明,盐度胁迫显著影响青蟹血清PO活性(p＜0.05).S5、S15低盐度处理组青蟹血清中PO活性显著高于S25、S35高盐度处理组(p＜0.05),同一处理组青蟹血清中PO活性除S15处理组随胁迫时间延长而持续下降外,其余各组呈现出有升有降的变化.各处理组在盐度低于或高于25时,青蟹肌肉中SOD活性升高,且胁迫至72h前,随着胁迫时间延长,SOD活性下降;青蟹肝胰腺中SOD活性随着盐度升高而降低,且同一处理组青蟹肝胰腺中SOD活性则随着胁迫时间的延长而呈现出先降后升的趋势.这表明环境盐度胁迫对青蟹体内SOD活性影响显著,且表现出明显的时间效应性.由此可见,盐度胁迫显著影响青蟹的PO、SOD活性,进而影响青蟹免疫力.     

锯缘青蟹幼体性分化的解剖学及组织学实验研究

锯缘青蟹（Ｓｃｙｌｌａ ｓｅｒｒａｔａ［Ｆｏｒｓｋａｌ］）背甲宽×长为２．３×１．５ｃｍ的幼蟹，其上部性征已开始发生分化，雌性个体腹部宽度增大，副性征也有胆显的差异，在雄性个体腹足呈单肢型而雌体呈双肢型。但是，在幼蟹生殖腺仍见不到组织学上的差异。腹部肢是分辨幼蟹性别是为直观，适宜的指标。本文还讨论了青蟹两性生殖系统形态结构及其功能上的差异问题。     

寄生性病原血卵涡鞭虫(Hematodinium sp.)感染山东半岛养殖梭子蟹的初步研究

寄生性病原血卵涡鞭虫(Hematodinium sp.)逐渐成为危害我国沿海养殖三疣梭子蟹、锯缘青蟹、脊尾白对虾等蟹虾类的致病性病原。为研究血卵涡鞭虫在我国北方的感染、流行情况,2012年7—11月间,作者从山东半岛三疣梭子蟹的主要养殖区域和邻近海域随机采集梭子蟹样品,进行了血淋巴、组织病理、电镜和分子生物学检测,首次在从胶南和莱州湾养殖区采集的梭子蟹中发现了血卵涡鞭虫感染。在感染血卵涡鞭虫的梭子蟹血淋巴中,共发现了该寄生性病原的四个生活史阶段:丝状滋养体、单细胞滋养体、滋养体聚合体和多核孢子体;该区域发现的血卵涡鞭虫(Hematodinium sp.)形态上与其他报道Hematodinium spp.类似,与在我国东南沿海报道发现的血卵涡鞭虫有亲密的遗传关系;人工感染实验表明该寄生性虫具感染性并对宿主的主要器官造成显著的病理变化。该研究表明血卵涡鞭虫感染养殖蟹类不仅局限于我国东南沿海,在我国北方的养殖蟹类中也存在;这些养殖区普遍采用的混合养殖模式可能一定程度上加剧了该寄生性病原的传播、扩散,因此其传播扩散方式亟需进一步调查研究。     

四种蟹成蟹消化酶的研究

比较中华绒螯蟹、锯缘青蟹、三疣梭子蟹和长江华溪蟹胃、肠、肝胰腺的五种消化酶（胃蛋白酶、类胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶）活力,结果表明四种蟹的类胰蛋白酶比活力是胃蛋白酶的７～１７倍,淀粉酶是纤维素酶的３０～１８３倍,脂肪酶活力较低。消化酶活力大小具有器官特异性和种间差异。     

锯缘青蟹幼体饵料蛋白质的营养价值评价

本文分析测定了锯缘青蟹幼体从刚孵化至大眼幼体各发育阶段及其饵料轮虫和卤虫无节幼体的氨基酸组成，并使用必需氨基酸指数(EAAI)来评价饵料蛋白质的质量.结果表明，青蟹各期幼体的氨基酸组成基本趋于一致，且与饵料转换不存在明显的相关性.对于各期幼体，饵料轮虫和卤虫无节幼体的必需氨基酸指数均大于90，可以认为，轮虫和卤虫无节幼体能够满足锯缘青蟹幼体对饵料中必需氨基酸的营养需求.     

锯缘青蟹精子塞的人工模拟

采用模拟人工授精、组织学及电子显微镜观察等方法,研究了青蟹精子塞的形成机制。结果发现,青蟹精子塞为雄性精液和雌性纳精囊开口处的分泌物在短时间内发生剧烈反应的产物,它们在短时间内从液态变为胶状结构,证明了精子塞是雌雄蟹的共同产物。雌雄蟹形成的精子塞的作用是,将精液颗粒、精荚等紧密联系在一起,部分精荚被拉伸破裂;有助于防止后续的雌雄交配,保护或保持精荚的完整及具有营养作用。     

基于线粒体12S rRNA序列探讨4种青蟹系统发育关系及中国沿海青蟹的分类地位

研究青蟹属4种青蟹的系统发育关系,阐明分布于中国沿海青蟹的分类地位,本研究采集了青蟹属4种青蟹以及中国沿海的青蟹样品,测定分析了其线粒体12S rRNA部分片段序列。结果表明4种青蟹的12S rRNA基因片段长度存在差异,每一种的个体都单独聚为1支,中国沿海的青蟹样品全部与Scylla paramamosain聚为1支,结果提示分布于中国沿海的青蟹主要是S.paramamosain。S.serrata,S.paramamosain和S.tranquebarica3个种间的亲缘关系较近,这3个种形成1个单系群并且具有很高的自展置信值。S.olivacea与其他3个种互为单系,与以上3种青蟹的亲缘关系较远。     

对虾WSSV人工感染螯虾及其检测

用对虾白斑综合症病毒（WSSV）人工感染淡水克氏原螯虾（Procambarus clarkii),感染组螯虾3-6d内全部死亡,核酸探针点杂交两次检测感染螯虾的鳃、胃、血淋巴,阳性检出率分别为92%（92%）,89%（86%）,81%（75%）,对照为11%（3%）,3%（5%）,0（0）;光镜下可观察到感染螯虾的胃、鳃组织的靶细胞核肿大,嗜酸性着染,电镜下病变组织细胞核可见形态大小与WSSV一致的病毒粒子;病毒核酸原位杂交两次检测感染螯虾的胃、鳃、阳性检出率均为100%,对照阳性检出率均为0。结果表明：对虾WSSV可感染淡水克氏原螯虾,病毒核酸原位杂交是一种敏感特异的病毒检测方法。