中国对虾中一种与肝胰腺细小病毒混合感染的呼肠孤病毒的初步鉴定

于１９９１年９月在青岛市沙子口镇对虾养殖场采集中国对虾病虾，采用酒石酸钾－甘油密度梯度离心法从病虾肝胰腺中分离出一种呼肠孤科病毒，并通过电子显微镜观察和提取分析病毒基因组核酸等方法初步鉴定，结果显示，该病毒在酒石酸钾－甘油密度梯度离心纯化时与肝胰腺细小病毒混合存在，病毒颗粒为有包膜的正二十面体立体对称结构；带包膜的完整颗粒直径在６４－６６ｎｍ；裸露核衣壳平均直径为５３．２ｎｍ，病毒基因组由分成１０     

中国对虾育苗期球形病毒的感染及垂直传播途径的初步探讨

１９９４－１９９５年山东文登市高岛盐厂对虾育苗池和养虾池,随机和定点采集中国对虾的卵,无节幼体,蚤状幼体,糠虾幼体,仔虾及幼虾,成虾样品,利用透射电子显微镜对其进行病毒的检测。结果表明,卵细胞中含有大量的卵黄,没有明显的细胞分化,卵细胞质中有球形病毒感染;无节幼体的肝胰腺和上皮细胞的分化程度较低,有大量球形病毒分布;糠虾幼体已有明显的肝胰腺和上皮细胞的分化,肝胰腺上皮细胞的胞质中发现有球形病毒包涵     

中国对虾一种C型杆状病毒的纯化技术及形态特征研究

染病中国对虾于１９９５年７月取自青岛崂山对养殖场。为探索对虾杆状病毒分离纯化技术，采用组织超薄切片技术对染病对虾进行电镜观察：被病毒感染的对虾经组织匀浆、差速离心和密度梯度离心，纯化出杆状病毒粒子；纯化的杆状病毒经钨酸钾负染色，于透射电子显微镜下观察形态结构。结果表明，中国对虾中肠组织     

用DAPI染色检出对虾肝胰腺细小样病毒

对虾肝胰腺细小样病毒（Ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｐａｒｖｏ－ｌｉｋｅｖｉｒｕｓ,ＨＰＶ）病是我国流行较广泛的一种对虾病毒性疾病,发病时可使对虾在４～８周内累积死亡率达５０％～８０％,野生和养殖对虾均可患此病,但有些对虾从幼体阶段携带此病毒一直到成虾阶段也不死亡。对ＨＰＶ病毒的检出一般常用ＨＥ染色法和孚尔根染色法,在光学显微镜下观察细胞核内的病毒包涵体。或者用电子显微镜对可疑组织作超薄切片观察其病毒颗粒［１］。研究发现在组织切片中用ＤＡＰＩ（４,６－Ｄｉ－ａｍｉｄｉｎｏ－２－Ｐｈｅｎｖｌｉ…     

中国对虾一种C型杆状病毒随机扩增多态性DNA分析

于１９９４年和１９９５两年的７月从青岛崂山上马镇养虾场中染病的中国地虾中分离纯化出一种Ｃ型杆状病毒。为建立中国对虾病毒的鉴别和检测技术，利用随机扩增多态性ＤＮＡ技术对电泳纯化的病毒ＤＮＡ进行分析和研究。将病虾匀浆、经差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化获得完整病毒粒子；从病毒中提取ＤＮＡ后再进行电泳纯化，收集长度完整，均一的病毒ＤＮＡ：在其他参数保持不变的情况下，对Ｏｐｅｒｏｎ生产的１０碱基随机引物Ｋ试     

''''93中国对虾流行性肝胰腺坏死综合症研究 Ⅰ.病毒和类支原体合并感染对虾肝胰腺

本文首次报道今年浙江省对虾大范围流行性肝胰腺坏死综合症及患病对虾肝胰腺组织中类支原体与病毒的合并感染。     

“虾康一号”防治虾病的应用研究

随着我国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）养殖生产的发展，虾病日趋严重。１９９３年，由于虾病发病早、范围广、死亡率高，给我国对虾养殖生产带来严重损失。因地理水质环境及致病因子不同，虾病及症状十分复杂。但发病范围广死亡率最高的是“头胸甲白斑，肝胰腺肿大综合症”。其特点是在头胸甲壳上出现白斑，有的体色微红，内部解剖发现肝胰腺肿大，有的红肿有的白浊。病理检查，从肝胰腺分离出大量弧菌，同时在血淋巴、心肌间质、整个中肠管壁和鳃上也发现大量细菌。有的从肝胰腺、胃壁和中肠细胞中发现病毒或病毒包涵体。这种…     

中国对虾肝胰腺细小病毒感染的免疫病理学研究

于１９９２－１９９３年,用兔抗对虾肝胰腺细小病毒ＩｇＧ和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔ＩｇＧ建立免疫组织病理检测技术,并用来肝胰腺小病毒感染和中国对虾肝胰腺组织作病理学分析,该方法利用抗原－抗体之间特异性结合的特点,首先令兔抗肝胰腺细小病毒抗体与相应的病毒成分结合,然后以酶标记的羊抗兔免疫球蛋白抗体与已结合到病毒上的抗体作用,并通过酶显色反应,揭示病毒和相应病变结构的存在,结果显示,免疫酶染色技术将病     

斑节对虾一种新球形病毒的研究

应用电镜超薄切片技术，发现斑节对虾肝胰腺上皮、肠上皮和淋巴样细胞质中一种新的球形形病毒，称之为斑节对虾球形病毒。病毒粒子为球形，直径２８－３５ｎｍ，核衣壳直径２１－２８ｎｍ，囊膜光滑无纤突，包涵体多数为球形，体积差异颇大，外有单位膜包被。ＭＳＶ与ＭＢＶ混合感染，造成严重理变化。     

病毒虾池底泥对对虾的影响试验

１９９３年全国暴发的对虾流行病，主要是由病毒病引起的，其传播速度之快，流行面之广，危害之大，前所未有①现已认识到，对虾病毒病是通过多种途径传播的。其中，虾池底泥是其传播途径之一。室内试验证实：病毒通过虾池底泥的传播．可使健康虾感染对虾肝胰腺小病毒病（ＨＰＶ）②鉴于病毒可通过底泥传播、扩散，危害养虾业。因而．如何采取有效措施，严格控制病毒传播，减轻对生态环境的威胁，并进而预防病毒的感染，是当前对虾养殖业的重要研究课题。１材料与方法１．１材料１．１．１对虾对虾于１９９３年７月１０日取自青岛流亭镇双埠…     

Studies on pathogen of explosive epidemic disease of shrimp Ⅱ.Purification of pathogen

ThisworkisfundedbyagrantfromtheNationalKeyTaskProjectsof8thand9thFive-yearplanprogram.INTRODUCTIONInthepastyears,studiesonthevirusesofpenaeidshrimpshavemadegreatprogressinvari-ouscountries.Rightnow,aboutl4virusesofpenaeidshrimpswerefound,i.e.BP(Baculoviruspenaei,Couch,1974),MBV(Penaeusmonndonbaculovirus,Lightneretal.,1983)orPBV(Penaeusplebejusbaculovirus,Lesteretal.,1987),BMN(Baculovirusmidgutglandnecrosisvirus,Sanaetal.,1981),PHRV(Penaeushybridrod-shapedvirus,Owensetal.,199l),…     

白斑综合症病毒膜蛋白VP124参与病毒的感染

白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾的最主要病毒病原之一,给对虾养殖造成了巨大的经济损失。WSSV分别与三种该病毒膜蛋白VP39,VP124和VP187的特异性抗血清在体外作用后,再注射到螯虾体内,进行中和试验。结果显示,注射同或未同VP124抗血清作用的WSSV,8 d后螯虾的死亡率分别是100%和60%,WSSV的感染能够被抗VP124抗体中和。进一步利用定量PCR分析上述三种特异性抗血清对病毒感染的影响,结果显示,VP124抗血清可抑制WSSV在螯虾体内的增殖。所有结果表明,VP124在病毒的感染中起作用。     

一株海洋牟勒氏角毛藻（Chaetoceros muelleri）病毒的分离与初步鉴定

以海洋赤潮藻为材料,从宁波市象山港附近海域采取水样,经反冲超滤法对水样进行浓缩处理后,用其对培养的赤潮藻细胞进行感染,分离到了一株能裂解牟勒氏角毛藻的病毒,经反复的液体感染,建立了稳定的藻病毒-宿主藻系统,命名为牟勒氏角毛藻病毒。该病毒具有很强的感染力,稀释10^8倍以后仍然具有明显的感染效果。病毒纯化后,电镜观察显示...     

Study on purification and ultrastructure of a baculovirus in Penaeus chinensis

ThisworkwassupportedbytheNationalClimbingProjectB(GrantNo.PDB6-6-1).INTRODUCTIONMorethantenkindsofviruseswhicharepathogenictopenaeidshrimphavebeenrePortedsinceviralpathogenwasfirstobservedincellsofPenaeusduorarumin1974(Couch,l974).TheviraldiseaseshavedonegreatharmtoChineseshrimpculturesincel993whenanepidemicdiseaseofprawnsbrokeoutfromsouthtonorthalongthecoast.Theshrimpproductiondroppedsharplyfrom22OOOotonsin1992to87OOOtonsinl994and53OOOinl993(Wangetal.,1997).Itisurgentthatfastdia…     

文蛤一种球形病毒的分离纯化及细胞病理变化观察

为研究一种球形病毒引起的文蛤(Meretrix meretrix)细胞病理变化及该病毒的分类地位,作者运用透射电镜对异常死亡文蛤的细胞病理变化及感染的病毒粒子进行了超微结构观察,并通过差速离心、酒石酸钾超速离心和氯化铯密度梯度离心结合等方法对首次对该病毒粒子进行了分离纯化。结果表明:患病个体的鳃、消化盲囊、消化道和外套膜均大量存在一种病毒颗粒,该病毒呈球形,无囊膜,直径45~55 nm,核心与核衣壳间无明显界限,未发现病毒包涵体,该病毒存在于细胞间质及被破坏的细胞质中。该病毒粒子的感染引起的细胞病理变化主要表现为:细胞核染色质集聚,溶酶体增多,线粒体肿涨,粗面内质网膨胀,肌原纤维排列混乱,细胞结构变得无规则直至解体。病毒粗提液于4℃150 000 g氯化铯密度梯度离心20 h可该病毒粒子提纯,经纯化后负染显示,该病毒粒子呈球形,二十面体对称,无囊膜,直径在60~75 nm,表面结构粗糙,壳粒结构较明显,该病毒粒子在氯化铯中的浮密度为1.554~1.582 g/m L。本文结果为文蛤死亡病原的研究提供了基础资料。     

东山九孔鲍病毒病病毒的分离观察

运用电镜负染和超薄切片技术，在福建东山患病的九孔鲍的肾组织细胞，肝细胞和肠上皮细胞中可见有大小为100nm的具包囊的六角形病毒颗粒，病鲍组织匀浆后，经蔗糖分步超速离心，RNA酶及DNA酶消化去除组织内DNA，RNA后，获得纯化的病毒颗粒，又经蛋白酶K消化后得到病毒的核酸，以DNaseⅠ或RNaseA分别消化，经1%（m/n)的琼脂糖凝胶电泳证实该病毒为DNA病毒。     

白斑综合症病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因的克隆及在蓝藻中表达载体的构建

用蔗糖密度梯度离心法分离纯化白斑综合症病毒（WSSV）。设计并合成引物，提取WSSV中国株的基因组DNA作为模板，通过PCR，扩增克隆出VP28基因，利用BamHI和EcoRI切点将VP28基因插入克隆载体pUC19 的多克隆位点上，得到VP28基因的重组克隆质粒，对其进行双向DNA测序。测序结果表明，该基因含有615个核苷酸，与GenBank中已有不同来源的WSSV的序列片段同源性为100％。利用BamHI切点将VP28的基因插入到穿梭表达载体启动子PpsbA的下游，EcoRI酶切鉴定，得到正向连接的可在蓝藻表达的重组穿梭表达载体，命名为pRL-VP28。     

从中国对虾分离纯化的一种杆状病毒及其超微结构的研究

从患病和濒死的中国对虾(Penaeus chinensis)头胸部分离提纯出一种杆状病毒,同时经对病虾的鳃、胃和中肠组织进行超薄切片及电镜观察,亦在上述组织的细胞核内发现大小相同、形态一致的大量杆状病毒粒子.成簇的病毒粒子主要在核内装配,并导致细胞结构的病变.病毒粒子大小约为320～400nm×100～130nm,两端钝圆,中部膨大,有囊膜,分内外两后,核衣壳大小为250～300nm×70～100nm.细胞内未观察到有核型多角体或颗粒体类包涵体存在.根据病毒学分类原则,该病毒应属于杆状病毒属无包涵体杆状病毒亚群,即杆状病毒C亚群.