细基江蓠及其繁枝变种的RAPD和ITS分析

对细基江蓠及其繁枝变种各12个个体进行随机扩增多态性(RAPD)DNA分析,对比多态位点比例、平均杂合度以及遗传距离,并构建UPGMA聚类图;通过PCR扩增出核糖体RNA基因(rDNA)转录间隔区(ITS),纯化后直接测序,利用生物信息学方法进行序列分析和核苷酸变异研究.比较分析结果表明,细基江蓠的杂合度和多态位点比例均高于细基江蓠繁枝变种,其遗传多样性相对较丰富;实验中8条随机引物扩增出特异的RAPD带,可用做细基江蓠及其繁枝变种的分子鉴定标记;ITS序列在这两种海藻中变异极小;RAPD和ITS聚类分析研究结果表明,细基江蓠及其繁枝变种均聚集为一枝,与同属不同种的龙须菜和真江蓠分开,提示细基江蓠和及其繁枝变种为同一个种,从而在DNA水平上支持了传统形态分类的观点.     

细基江蓠繁枝变型琼胶的研究

我国的江蓠约有２０多种。已深入研究过的有：真江蓠、细基江蓠、龙须菜、芋根江蓠、海南江蓠、节江蓠、绳江蓠、缢江蓠、凤尾菜和扁江蓠等［１－３］。近年来，在我国养殖数量最大的一种是细基江蓠繁枝变型（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａｔｅｎｕｉｓｔｉｐｉｔａｔａ（ＣｈａｎｇｅｔＸｉａｆ．ＬｉｕｉＺｈａｎｇｅｔＸｉａ）。该种江蓠比较容易养，故在海南、广东和广西沿海地区养殖较多，成为目前南方琼胶厂使用较多的一种原料。但对这种江蓠所含琼胶的性质和组成尚未研究过，故笔者对此进行了全面的研究。１材料与方法１．１材料细基江蓠繁枝…     

细基江蓠繁枝变种北移越冬研究

细基江蓠(Gracilaria tenuistipitata Chang et Xia)是江蓠属的一个重要物种,其繁枝变种体(G.tenuistiptata vat.liui Zhang et Xia)具有重要的养殖经济价值。在我国沿海地区,主要分布在海南岛北部沿岸的潮间带海区。鉴于该变种体具有生长较快、可营养枝体进行繁殖、能适应在人工裁培条件下的塘池养殖、管理操作技术难度不大、经济效益较好、适合群众性各种规模放养等特点,因     

细基江蓠繁枝变种与益生菌净化养殖废水的研究

通过室内实验和室外排水沟实验研究了细基江蓠繁枝变种Gracilarla tenuistipitatavar.liui与益生菌(光合细菌Rhodopseudomonas capsulata和芽孢杆菌Bacillus lichenifirmis24h内对集约化对虾养殖废水的协同净化作用。室内实验显示益生菌和细基江蓠繁枝变种对灭菌后的养殖废水有净化作用,净化效果表现为:混合组(江蓠 益生菌)>江蓠组>益生菌组>对照组;室外排水沟实验中江蓠组与混合组都显示对养殖废水的净化有明显作用,但两组之间各项指标(除TN外)差异不显著(p>0.05),而益生菌组与对照组的各项指标之间的差异也不显著(p>0.05)。这并不能否定江蓠与益生菌之间的协同作用,而可能与排水沟水体的异养细菌数高(检出数为104—105CFU.ml-1)有关。     

光照和温度对细基江蓠繁枝变型的生长及生化组成影响

实验研究光照、温度对细基江蓠的生长率及生化组成等指标的影响。结果表明 ,光照、温度及其相互作用均显著影响以上指标。在该实验条件下 ( 15～ 30℃ ,12 0 0～ 12 0 0 0 lx) ,细基江蓠繁枝变型 ( Gracilaria tenuistipitata var.liui)在光照为 10 0 0 0 lx,温度为 2 5℃时生长率最大 ,光照对生长的影响大于温度 ,而且在适宜的温度范围内 ,随着温度的升高 ,细基江蓠繁枝变型生长的光饱和点也增高。光强是影响藻红素、叶绿素 a及碳水化合物 /蛋白质比率的主要环境因子 ,它与藻红素、叶绿素 a含量负相关 ,与碳水化合物 /蛋白质比率正相关。温度则是调节蛋白质及藻红素 /叶绿素 a比率的主要因素 ,它与蛋白质的含量负相关 ,与藻红素 /叶绿素 a比值正相关。温度和光照对碳水化合物的含量影响不明显     

细基江蓠繁枝变型(Gracilaria tenuistipitata var.liui)铁限制的生理生态学反应

将细基江蓠繁枝变型在铁限制条件下连续培养60天，分析海藻体内铁、色素、各种元素(N、P、C等)及总氨基酸水平的变化特征、铁限制对细基江蓠繁枝变型光反应系统的影响以及铁限制的细基江蓠繁枝变型对N、P和Fe^3 的吸收动力学特征。结果表明，在铁限制培养60天过程中(海水中铁的总浓度为451mol／L)，细基江蓠组织中铁的含量和色素水平均随着铁限制时间的延长极显著地呈现指数下降。组织铁含量仅为对照组的5．26％，叶绿素和藻红素含量分别为对照组的7．9％和33．8％。在铁限制培养过程中，组织中的N：P比由起始的29．53降低到23．68，而C：N比值几乎保持恒定。比生长率与组织中铁含量呈显著的正相关，铁限制使完整组织低温下的荧光发射强度受到不同程度的影响，荧光发射峰位蓝移，光系统Ⅰ与光系统Ⅱ的荧光发射强度之比PSⅠ：PSⅡ降低。在适度铁限制条件下(铁限制培养30天)，细基江蓠对Fe^3 的还原和吸收能力都明显增强，铁限制海藻铁吸收速率的大小与铁限制的培养过程中以及铁吸收实验过程中介质的氮源种类有关，即在以NO3^-—N为惟一氮源进行铁限制培养后，在以NH4^ —N为氮源的介质中铁的吸收速率远大于在以NO3^-—N为氮源的介质中铁的吸收速率。铁限制在不同程度上影响了细基江蓠对氯、磷的吸收能力，尤其对NO3^-—N的吸收影响较大，其最大吸收速率(Vmax)降低为对照组的33．4％。     

细基江蓠繁枝变型对水体硝态氮变化的生理响应

通过静态模拟实验,比较研究了6个硝态氮(NO3--N)摩尔浓度水平(0,10,20,40,60,80μmol/L)下培养的细基江蓠繁枝变型(Gracilariatenuistipitatavar.liuiZhangetXia)的丙二醛(MDA)、游离脯氨酸含量以及硝酸还原酶(NR)、超氧化物酶歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性的变化。结果表明,随着水体NO3--N摩尔浓度的逐渐增加,细基江蓠繁枝变型NR、SOD和POD的活性均呈现先增加后下降的显著变化(P<0.05),膜脂过氧化产物MDA含量随水体NO3--N摩尔浓度的变化则呈相反的趋势(P<0.05);游离脯氨酸含量则与水体NO3--N摩尔浓度呈正相关(r=0.9161)。综合分析结果认为,单独以硝态氮为氮源时,20μmol/L的供氮水平能使细基江蓠繁枝变型处于相对最佳的生理状态。     

细基江蓠繁枝变种提取琼胶的研究——高温稀碱前处理

在不同温度(26℃,60±15℃,85±5℃)条件下,分别用不同重量百分比浓度(0,2,5,10,20,40％)的NaOH液对海南省琼山县的细基江蓠繁枝变种Cracilaria tenuistipitatavar.liui进行前处理工艺研究。结果表明,85±5℃,5％NaOH处理5h的效果最好,得胶率(Y)15％,凝胶强度(S)约为600g/cm~2。     

细基江蓠繁枝变种在浙江越冬的研究

应用从湛江引入,并在浙江自然越冬后生长正常的,以及从海口新引入的细基江蓠繁枝变种,作为实验材料进行越冬保种研究。本文首次报道了不同的种藻密度、培养液比重、水层、光强、底质及人为低温处理,对存活和生长的影响。结果表明:新引入的种藻具生长快、对环境的剧烈变化敏感;已越冬的种藻更能适应低温低比重的条件。以0.3m左右的水层,比重1.010,避免直射强光的低光照,能够安全保种越冬。低温干冻比水冻更易致死。可以经受7天的0℃低温。砂质的底质有利于越冬保种。在浙江普通的育苗室内就可以进行越冬,越冬后,死亡率低于0.07％/d。     

细基江蓠(Gracilaria tenuistipitata)对海水池塘养殖区Cu~(2+)生物修复的初步研究

随着海水养殖业迅速发展,食用海产品重金属(如Cu、Cd等)超标问题日益突出。作为提取藻胶原材料及海洋养殖动物饲料的细基江蓠,可以大规模生长在海水池塘养殖区,有望用于该水域重金属污染的生物修复。本实验通过研究细基江蓠(Gracilaria tenuistipitata)在5个不同Cu2+浓度梯度(0、0.05、0.2、0.8、2.0mg/L)环境下的自身生长状况,及其对Cu2+的吸收富集情况,初步探究了细基江蓠对海水池塘养殖区Cu2+的生物修复能力。实验结果显示细基江蓠对Cu2+有较强的耐受性和吸收富集能力,在0.8mg/L Cu2+浓度下细基江蓠既能保证正常生长,又能吸附水体中最大量的Cu2+。     

细基江蓠脂肪酸组成研究

研究表明,南海细基江蓠Gracilaria tenuistipitata中主要含有C_9—C_(30)一元饱和脂肪酸,其中n-十六酸含量占脂肪酸组分的40％以上。单烯和二烯酸的含量较低,缺乏多烯酸及前列腺素类化合物。此外,还含有少量二元酸类、4-及5-羰基羧酸,其中后两者是首次在红藻中发现。南海细基江蓠的脂肪酸组成特征与南海海域水质较清、光照充足及水温较高等环境因素有关。     

盐度对细基江蓠繁枝变型的生长、琼胶产量和组成的影响

在实验室中用盐度为21和33的两种水体培养细基江蓠繁枝变型4个星期，测定了江蓠的生长率，并用水和不同浓度的乙醇溶液分级提取法分析了琼胶的产量和组成情况。结果显示，江蓠在盐度为21的水体中生长较好，其日平均生长率比高盐度（33）组的高约58%；在盐度为33下的琼胶产量较高，平均可达藻体干重的31%，琼胶组成中以冷水提取物和40%的乙醇提取物产量最高，分别占琼胶总产量的20%以上，盐度对琼胶的组成有影响，在21的盐度下，高温高压提取物和60%的乙醇提取物产量高于同等条件下盐度为33的江蓠，而其冷水提取物产量则较低。     

Effect of salinity on the growth,and agar yield and composition of Gracilaria tenuistipitata var liui Zhang et Xia

Gracilaria tenuistipitata vahang et Xia is cultivated at two different salinites(21,33) in the laboratory for 4 weeks,The daily growth rate is determined.The total agar yield and fractional agar composition are analyzed.Results show that algae grow faster in low salinity.The total agar yield is higher under high salinity conditions than under low salinity conditions.Among the eight fractions extracted,the yields of cold water extract and 40% ethanol extract are about the highest.In low salinities the yields of autoclaved extract and 60% ethanol extract are higher,while the yield of cold water extract is lower relative to high salinities.     

江蓠总DNA提取及其PCR扩增方法的建立

通过对CTAB法、SDS法和植物基因组提取试剂盒3种方法提取江蓠Gracilaria总DNA的得率比较,并将得到的总DNA用于限制性酶切和PCR扩增反应进行纯度检测,选择出适合江蓠属总DNA的提取方法,建立了江蓠RAPD、ISSR和ITS等遗传多样性和系统学研究的分子生物学方法.实验结果表明,SDS法和植物基因组提取试剂盒均适用于江蓠总DNA的提取;其中SDS法适用于新鲜和冰冻材料的总DNA提取,不仅得率和纯度高,且方法稳定性好,提取时间较短,在本实验中是江蓠总DNA提取的最佳方法.植物基因组提取试剂盒的得率低,但质量好,操作快速简便,适用于大量新鲜样本总DNA的提取.CTAB法由于相对耗时长且产物稳定性差,不推荐在江蓠中使用.     

一种绿色真江蓠的分子鉴定

应用rDNA-ITS和线粒体cox1片段扩增序列,分析了厦门杏林湾的2株绿色未知江蓠（Gracilaria sp.;四分孢子体GR-1和雌配子体GR-2）及2株紫褐色真江蓠（G.vermiculophylla;四分孢子体PU-1和雌配子体PU-2）.运用MEGA5.0估算了4个供试样本与GenBank中相似度最高序列的遗传距离并构建了系统发育树.ITS序列分析显示绿色未知江蓠GR-1、GR-2都与真江蓠聚集在一起,推断两者与真江蓠的亲缘关系非常近.cox1片段序列分析表明,绿色未知江蓠GR-1、GR-2和紫褐色真江蓠PU-1、PU-2都与索引的真江蓠聚集在相同类群.其中GR-1、GR-2与真江蓠JQ619142、JQ619143的相似度都为100%,它们之间的遗传距离范围在0.000～0.002,低于种群内部的遗传距离范围0.000～0.015,从分子水平上确定了绿色未知江蓠是真江蓠.联合ITS和cox1片段序列的分子标记适用于真江蓠的种质鉴定.     

江蓠属海藻龙须菜的基础研究与大规模栽培

江蓠属的龙须菜是1种重要的产琼胶海藻。从2000年在广东汕头南澳岛栽培成功以来,迅速在福建、浙江、山东和辽宁沿海得到发展,成为继海带、紫菜和裙带菜之后又一个新兴的海藻栽培产业群。本文综述了龙须菜遗传学研究成果及龙须菜栽培产业建立和发展的关键因素,包括龙须菜南移栽培,981龙须菜良种培育的技术要点。     

龙须菜微卫星DNA的初步研究

为从龙须菜中分离含微卫星DNA的片段采用了2种方法,总共筛选了1 100个克隆。其中应用地高辛标记探针,通过菌落原位杂交方法,筛选得到13个克隆,测序结果显示仅有1个克隆含有微卫星DNA;PCR方法筛选出28个克隆,测序显示有23个克隆含有微卫星DNA。在总共测序的24个克隆中共有77个微卫星序列,每个克隆中含有的微卫星DNA在1～7个不等。核心序列重复次数在10次(含10次)以上的微卫星有38个,重复次数在10～38不等,重复次数在7～9次之间的微卫星有39个。在获得的微卫星序列中GA重复占97%,CA重复仅占3%。完全型微卫星55个,占71.4%;不完全型微卫星21个,占27.3%;复合型微卫星1个,仅占1.3%。龙须菜微卫星DNA的含量较低。