对虾白斑综合症病毒VP37基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测

把对虾白斑综合症病毒(White syndrome spot virus,WSSV)黏附蛋白VP37的基因C末端截去102个碱基后设计了一对引物,通过PCR扩增出目的片段。用其构建酵母双杂交诱饵载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用和自激活活性。结果获得截短的VP37基因片段,并成功克隆入酵母双杂交系统PGBKT7 DNA-BD载体中,测序结果表明序列完全正确。把重组载体转化酵母菌AH109并检测自激活作用。结果显示表达的融合蛋白没有激活ADE2,HIS3这2个报告基因,但激活了MEL1,该融合蛋白对酵母菌AH109无毒性。可利用其它2种报告基因将其应用于酵母双杂交系统,筛选cDNA文库中与之相互作用的基因。     

海洋新菌的分类与鉴定方法

细菌的分类鉴定与细菌的研究和应用有着同等重要的地位。目前从自然界中可以培养的细菌总量不到1%,大多数海洋细菌的分类鉴定仍需建立在纯培养基础上。本文对目前可培养海洋细菌的分类鉴定方法做了系统的综述,详述了系统发生树的构建,汇总了生理生化分类特征,概述了主要的遗传学分析方法,包括16S rDNA序列分析,G+C含量测定,DNA-DNA杂交,MLST(多位点序列分型,Multi Locus Sequence Typing)以及核酸指纹图谱等,并指出每种方法适用的范围以及应用时需要注意的事项。另外,本文还提出了新菌分类鉴定的一般步骤。文章最后对目前海洋细菌分类鉴定的发展趋势进行了总结和展望。     

对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白VP664的鉴定研究

对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白VP664是至今知道的分子量最大的结构蛋白，全长18234bp，预计编码6077个氨基酸．从编码vp664基因的两端各选600bp，分别命名为vp664n、vp664c进行原核表达，成功表达纯化了目的蛋白并制备抗体．蛋白印记杂交（Western blot）实验中蛋白特异抗体只与完整的病毒和核衣壳裂解蛋白中的VP664蛋白反应，而不和膜蛋白反应，证明VP664基因所编码的蛋白在完整病毒颗粒上定位于核衣壳．     

白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28单链抗体的酵母表面展示及其抗病毒特性的初步研究

白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾养殖业中危害最大的病原微生物之一,对对虾养殖业造成了巨大的经济损失,但目前尚无有效防治手段.本研究从WSSV囊膜蛋白VP28免疫的小鼠细胞中分别扩增到重链可变区基因和轻链可变区基因,大小为351 bp和342 bp.两基因序列通过Linker序列连接后,构建到酵母表面载体pYD1中,得到重组质粒pYD1-vp28scfv.将该重组质粒在酿酒酵母EBY100中诱导表达,通过免疫荧光实验发现,重组蛋白VP28scFv在酿酒酵母EBY100表面实现展示.进一步通过结合实验表明该展示蛋白具有WSSV的结合活性.本研究在结合酿酒酵母可作为饲料添加剂的特性基础上,对WSSV囊膜蛋白VP28单链抗体的抗病毒特性进行了应用,从而为WSSV的防治提供了新思路.     

感染溶藻弧菌及白斑综合症病毒后凡纳滨对虾不同组织的Toll样受体基因表达变化研究

为研究不同类型Toll样受体基因在凡纳滨对虾免疫调控机制中的作用,实验首先通过荧光定量PCR方法检测了凡纳滨对虾3种Toll样受体基因在不同组织中的表达情况。结果表明凡纳滨对虾3种Toll样受体基因m RNA在各组织中均有表达。其中,Toll1基因在肌肉,血淋巴,心脏和鳃均有较高表达,心脏表达量最高;Toll2基因在血淋巴,心脏和鳃均有较高表达,其中在鳃表达量最高;Toll3基因在鳃和心脏有较高表达,其中在鳃表达量最高。实验还对人工感染溶藻弧菌及白斑综合症病毒后凡纳滨对虾3种Toll样受体基因在不同免疫组织的表达变化差异进行研究。感染白斑综合症病毒后凡纳滨对虾血淋巴及鳃中3种Toll样受体基因表达量均显著提高,并在各自达到表达峰值后逐渐下降直至恢复到感染前水平。感染溶藻弧菌后凡纳滨对虾血淋巴中3种Toll样受体基因表达量均显著提高;鳃中Toll1及Toll3表达量分别于感染后3h和12h有显著提高,而Toll2表达量无显著提高。由此推测3种Toll样受体基因均可能参与白斑综合症病毒感染所引起的免疫调控;而在溶藻弧菌感染所引起的免疫调控中,除了Toll1,Toll3参与鳃的免疫调控外,Toll2基因还参与血淋巴中的先天性免疫调控。长期感染白斑综合症病毒或溶藻弧菌后,凡纳滨对虾3种Toll样受体基因在血淋巴与鳃中的表达量均显著升高,这可能与虾体在长期感染过程中,需要不断保持较高免疫水平有关。     

数理统计学方法在中国水产资源研究中的应用概述

数理统计学方法对于水产资源学的发展发挥了极其重要的推动作用。数理统计方法在中国水产资源学的应用．起步于50年代．发展于60到80年代，90年代以后进入了一个崭新的发展阶段。作为一个发展中国家，同世界其他国家相比．我们将面临着更多的机遇与挑战。     

天然气水合物的测井识别和评价

地球物理测井作为传统的资源评价方法，在天然气水合物勘探中是有效评价手段。从国内外对天然气水合物的研究现状出发，简要地总结了天然气水合物的地球物理特征，介绍了利用电阻率测井和声波速度测井识别含天然气水合物储集层的方法和对天然气水合物进行评价，对现有的测井评价模型进行了讨论，指出了对天然气水合物储集层的地球物理测井评价模型还有待于进一步探讨。     

天津海岸带的研究现状

天津作为环渤海经济区的中心城市,海岸带的建设及合理开发是经济发展的重要基础。总结了天津海岸带的特点和研究现状,阐述了海岸带调查的技术方法以及研究内容,结合天津海岸带地区发展的内部条件和外部环境,提出了天津海岸带地区发展的基本特征和存在的问题,针对发展中的问题,提出了天津海岸带地区发展的方向。     

牙鲆胃肠道及肝脏GnRH受体的免疫组织化学研究

利用免疫组织化学ABC法，对牙Ping胃肠道及肝脏促性腺激素释放激素（GnRH）受体的表达及分布特点进行了研究。结果显示：胃肠道粘膜上皮、腺上皮及肝细胞呈GnRH受体免疫反应阳性，阳性反应物分布在细胞膜和细胞质中，细胞核呈阴性反应。提示：牙Ping胃肠道上皮细胞及肝细胞能够表达GnRH受体，说明GnRH可能通过其受体影响牙Ping消化系统的功能。     

鱼类食物组成的研究概况

对鱼类食物组成的研究具有重要的生态学意义,这方面的研究正在逐步展开,涌现出许多新的研究方法。鱼类食物组成研究包括三个基本实验步骤:①样品采集,②食物组成分析,③实验结果汇总与分析。本文以这三个步骤为柜架,对国内外相关的研究方法进行了介绍,并且对国内鱼类食物组成研究的发展前景做了一个展望。     

虎斑乌贼(Sepia pharaonis)FMRFamide G蛋白偶联受体基因的克隆与表达定位研究

以FMRFamide为典型代表的FMRFamide相关肽,是目前已知的最大的神经肽家族。FMRFamide广泛参与多种生理过程,包括摄食、心跳、渗透平衡、变态、防御和免疫等。采用同源克隆法与RACE技术获得了虎斑乌贼FMRFamide的G蛋白偶联受体基因cDNA全长序列(命名为SpFaGPCR,OL765295),SpFaGPCR cDNA全长1514bp,包括222bp的5''-非编码区(5''-UTR)、35 bp的3''-UTR以及1257bp的开放阅读框(ORF),共编码418个氨基酸。预测相对分子量(MW)为49.8kDa,等电点(pI)为9.76,具有7个跨膜结构域、糖基化位点7个、磷酸化位点36个。同源序列比对分析表明,SpFaGPCR与曼氏无针乌贼的FaGPCR氨基酸序列相似度最高达98%。系统发育分析显示SpFaGPCR与双壳纲的FaGPCR聚为姐妹支。荧光定量结果显示SpFaGPCR在视叶、视腺、脑、缠卵腺中表达量相对较高(P<0.05)。进一步利用原位杂交技术检测到虎斑乌贼视叶的髓质区、视网膜的感光细胞和缠卵腺的瓣叶外层具有明显的阳性杂交信号。实验结果为进一步探讨FMRFamide通过FaGPCR的介导参与虎斑乌贼生理代谢功能奠定了前期基础。     

海底沉积物分析测试方法标准的研究

依据海底沉积物分析测试方法标准研究的总体设计，完成了40个分析项目的21份验证报告，进行了实验室间精密度协作性检验工作，在海底沉积物CaCo3,H2Os^-，H2O^ 的分析方法研究中取得新进展，并建立了ICP－AES法测定海底沉积物中常量、微量、稀土元素分析方法。     

海底地理实体命名专题图编制方法探讨

结合我国向海底地名分委会(SCUFN)提交海底地名提案的工作,介绍了海底地名专题图编制关键技术与难点,并对Arcgis、Global Mapper和Surfer制图平台进行对比。鉴于Arcgis以空间数据库的形式分析和管理海底命名信息具有显著优势,Global Mapper在格网数据的加载、实时三维显示和数据裁剪方面表现出色,Surfer在制作三维图方面具有操作简单、图形美观等优势,将三者优势结合起来,制定了海底地理实体专题图的编制方案,实现数据联合应用。编制方案能达到满足海底命名图件制作要求、提高制图效率的目的,为我国海底地名专题图编制工作提供技术参考。     

海洋多糖分子修饰方法研究概况

分子修饰是通过化学、物理学及生物学等手段对化合物分子进行结构改造 ,以获得众多结构类型衍生物的方法。海洋多糖经分子修饰可改变其结构 ,从而提高其生物活性或降低其毒副作用。因此 ,海洋多糖的分子修饰研究引起了高度重视。近些年 ,海洋多糖分子修饰方法研究已取得很大进展 ,降解、硫酸酯化、脱硫酸根、乙酰化、羧甲基化、磷酸酯化、硬脂酰化等方法也已被广泛应用［９ ,１０］。本文着重对近年来海洋多糖分子修饰方法的研究作一综述 ,以期对该领域的研究有所启示。１降解海洋多糖分子量很大 ,几十万到几百万不等。海洋多糖的分子量对其…     

海洋超微型浮游植物多样性研究方法进展

海洋超微型浮游植物 (Ｕｌｔｒａｐｈｙｔｏｐｌａｎｋｔｏｎ)是一类粒径微小 (＜５～１０μｍ)的光能自养型浮游生物 ,它包括所有的微微型浮游植物 (Ｐｉｃｏｐｈｙｔｏｐｌａｎｋｔｏｎ，０．２～２ μｍ)和部分微型浮游植物 (Ｎａｎｏｐｈｙｔｏｐｌａｎｋｔｏｎ，２～２０μｍ) ;由原核浮游植物及真核浮游植物组成。微微型原核浮游植物主要是单细胞的蓝细菌 (藻 ) (聚球藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ)和原绿球藻Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｓ。海洋超微型光合真核生物主要包括定鞭藻类、金藻类、隐藻类和绿藻类等。现有的研究结果表明…