大菱鲆周期蛋白依赖激酶基因cdk1、cdk6克隆及表达分析

通过同源克隆以及5′/3′RACE的方法扩增得到大菱鲆(Scophthalmus maximus)细胞周期蛋白依赖激酶基因cdk1和cdk6的全长c DNA序列,在m RNA水平上分析了它们组织表达特征,并对比分析了静水压处理对其胚胎期表达的影响。结果显示,cdk1基因全长c DNA序列为1281 bp(Gen Bank登录号:KP339306),编码区为912 bp;cdk6基因c DNA全长1400 bp(Gen Bank登录号:KT186374),编码区长度为978 bp。组织RT-PCR分析表明,cdk1基因表达具有广泛性,在性腺、肾脏等生长发育较快的组织中表达量较高;cdk6基因也在多个组织中表达,在性腺中表达量最高。通过Real time RT-PCR检测基因在胚胎中的表达水平发现,静水压处理组cdk1、cdk6在胚胎发育中,总体变化趋势与对照组类似。大菱鲆胚胎对照组中cdk1在原肠期以前相对神经胚期及以后时期表达量较高,静水压处理组基因表达变化与对照组趋势相同;对照组中cdk6在原肠期出现表达高峰,但静水压处理组在原肠期表达量相对较低。静水压处理对cdk1和cdk6的表达量的影响不同,这可能与基因还有除调控细胞周期的其他功能有关。为解析这两个基因在大菱鲆胚胎发育中的作用及其机制提供了参考。     

心痛方对急性心肌梗死大鼠CaMKⅡ mRNA表达及钙离子浓度的影响

目的：探究心痛方对心肌梗死大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA表达及钙离子（Ca^{2+）浓度的影响。方法：将50只SD大鼠随机分为5组，分别为假手术组、模型组、心痛方高剂量组、心痛方低剂量组、硫氮卓酮组，采用结扎冠状动脉的方法建立急性心肌梗死大鼠模型，运用RT-PCR法测定各组大鼠心肌组织CaMKⅡ mRNA的表达，激光扫描共聚显微镜法检测心肌组织内Ca2+浓度，HE染色法测定心肌梗死面积。结果：与模型组比较，心痛方高、低剂量组与硫氮卓酮组CaMKⅡ mRNA表达及Ca2+浓度均降低、心肌梗死面积缩小(P<0.01或P<0.05)；与心痛方低剂量组比较，心痛方高剂量组、硫氮卓酮组CaMKⅡ mRNA表达、Ca2+浓度均降低(P<0.01)，心痛方高剂量组心肌梗死面积缩小(P<0.05)；与硫氮卓酮组比较，心痛方高剂量组CaMKⅡ mRNA表达、Ca2+浓度均降低(P<0.01)，心痛方高、低剂量组心肌梗死面积均缩小(P<0.01或P<0.05)。结论：心痛方能下调急性心肌梗死大鼠CaMKⅡ mRNA的表达，降低胞内Ca2+浓度，从而拮抗钙超载对心肌细胞的损害，缩小心肌梗死面积。}     

电针联合补肾活血方对PCOS模型大鼠性激素和妊娠率的影响

目的：观察电针联合补肾活血方对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的作用机制。方法：将280只大鼠随机分为正常组（A组）、模型组（B组）、克罗米芬组（C组）、克罗米芬+补佳乐组（D组）、克罗米芬+电针组（E组）、克罗米芬+补肾活血方组（F组）、克罗米芬+电针+补肾活血方组（G组）。B、C、D、E、F、G组大鼠予以皮下注射脱氢表雄酮（DHEA）20 d建立PCOS模型,造模成功后C、D、E、F、G组分别给予相应药物干预,A、B组不作任何处理,连续干预5 d。观察大鼠动情周期的改变情况以及血清性激素［促卵泡生成激素（FSH）、促黄体生成激素（LH）、睾酮（T）、LH/FSH］水平、孕鼠数、总着床率、平均着床胚泡数。结果：动情期角化上皮细胞明显增多,未角化上皮细胞明显减少（P＜0.05）。各项性激素指标、总着床率、平均着床胚泡数方面,G组与A组比较,差异无统计学意义（P>0.05）;B、C、D、E、F组与A组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。总着床率、平均着床胚泡数方面,E、F、G组与B组比较,G组与C、D、E、F组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结论：电针、补肾活血方联合克罗米芬能有效改善PCOS大鼠性激素水平,提高PCOS大鼠总着床率和平均着床胚泡数。     

心痛方对急性心肌梗死大鼠NCX mRNA表达及Ca2+浓度的影响

目的：探究心痛方对心肌梗死大鼠心肌组织内钠钙交换蛋白（NCX mRNA）的表达及钙离子（Ca^{2+）浓度的影响。方法：将50只SD大鼠分为假手术组、模型组、心痛方高剂量组、心痛方低剂量组、硫氮卓酮组，采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法建立急性心肌梗死大鼠模型。运用RT-PCR法检测各组大鼠心肌细胞内NCX mRNA的表达，激光扫描共聚显微镜法检测大鼠心肌组织中的Ca2+浓度，HE染色法测定大鼠心肌梗死面积。结果：在下调NCX mRNA表达方面，心痛方高、低剂量组与假手术组、模型组、硫氮卓酮组比较，差异有统计学意义（P<0.01）；在降低MFI方面，心痛方高、低剂量组与假手术组、模型组比较，差异有统计学意义（P<0.05），且心痛方高剂量组在降低MFI方面还优于硫氮卓酮组（P<0.01）；在减少心肌梗死面积方面，心痛方高、低剂量组与模型组、硫氮卓酮组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：心痛方能下调急性心肌梗死大鼠NCX mRNA的表达，降低胞内Ca2+的浓度，从而抑制钙超载对心肌细胞的损害，减少心肌梗死面积。}     

补肾活血方治疗老年性骨质疏松症35例临床观察

目的：观察补肾活血方治疗老年性骨质疏松症的临床疗效。方法：将70例老年性骨质疏松症患者随机分为2组，各35例，治疗组采用补肾活血方治疗，对照组采用钙尔奇D片治疗，1个月为1个疗程，治疗3个疗程后比较2组患者的视觉模拟评分（VAS）、骨密度及临床症状缓解情况。结果：总有效率治疗组为85.7%，对照组为60.0%，2组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。2组VAS评分、骨密度水平治疗前后组内比较及治疗后组间比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：补肾活血方治疗老年性骨质疏松症临床疗效确切。     

补肾活血中药联合维生素D对PCOS不孕患者内分泌及抗氧化作用的影响

目的：观察补肾活血中药联合维生素D对多囊卵巢综合征（PCOS）不孕患者内分泌及抗氧化的作用。方法：选取PCOS不孕患者90 例作为研究对象,以随机数字表法分为中西医结合组、中药组、西药组,每组各30 例。中西医结合组给予补肾活血中药联合维生素D辅助干预治疗,中药组仅予补肾活血中药治疗,西药组给予克罗米芬治疗。将3个月经周期定为1个疗程。治疗1～2个疗程后比较3组患者排卵率、妊娠率、性激素［包括雌二醇（E₂）、促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成素（LH）、雄激素（T）］和25-羟维生素D（25OHD）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果：中西医结合组及中药组均可有效提高E₂2及25OHD水平,降低T及MDA水平,对FSH、LH有调节性作用,可进一步提高妊娠率,且在调节内分泌方面中西医结合组较中药组、西药组疗效更佳（P＜0.05）。结论：补肾活血中药联合维生素D辅助治疗PCOS不孕患者,可以明显改善内分泌代谢及氧化应激状态,提高临床妊娠率。     

疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡及Bax、Bcl-2的影响

目的：研究疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231三阴性乳腺癌（TNBC）细胞凋亡及相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达的影响。方法：给大鼠灌胃疏肝健脾解毒方制备含药血清,设置空白对照组、含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组及阳性对照组,以流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot测定Bcl-12、Bax蛋白表达量。结果：各给药组凋亡率及Bax、Bcl-12蛋白表达水平与空白对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;含药血清低、中、高剂量组Bax、Bcl-2蛋白表达水平与阳性对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：疏肝健脾解毒方对MDA-MB-231 TNBC细胞具有凋亡诱导作用,其机制可能与干预Bax、Bcl-2蛋白表达有关。     

海参低聚肽对肾阳虚小鼠的影响

分析海参低聚肽和海参粉的基本营养成分,研究并比较了海参低聚肽和海参粉对氢化可的松致肾阳虚小鼠的作用。小鼠随机分为空白、阴性、阳性对照组(丙酸睾酮,5mg/kg)、海参低聚肽组(0.5g/kg)和海参粉组(0.5g/kg)。连续灌胃24 d后测定小鼠的体温、体重、自主活动次数和低温游泳时间,以及胸腺、脾脏指数和肾上腺、包皮、精囊、睾丸的指数以及精子浓度。结果显示,与阴性对照组相比,海参粉显著增加肾阳虚小鼠的自由活动次数、低温游泳时间、睾丸指数和精子浓度,具有一定抗疲劳和补肾壮阳作用;海参低聚肽显著增加肾阳虚小鼠的体温、体重、自由活动次数和低温游泳时间,还能显著增加睾丸指数、精囊指数和精子浓度,使其接近阳性对照组和空白对照组的水平,具有显著的抗疲劳和补肾壮阳作用,且海参低聚肽的效果明显好于海参粉。     

丹荔输通汤对慢性输卵管炎模型大鼠干预作用的实验研究

目的：观察丹荔输通汤对慢性输卵管炎模型大鼠的干预作用。方法：84只SD大鼠按体质量编号,随机抽取11只为空白组,余73只采用苯酚明胶造模法制备输卵管炎性阻塞性模型。将造模成功的66只实验大鼠随机分为6组,即模型组、中药高剂量灌胃+灌肠组（中药高剂量组）、中药中剂量灌胃+灌肠组（中药中剂量组）、中药低剂量灌胃+灌肠组（中药低剂量组）、中药中剂量灌胃组（中药灌胃组）、西药对照组（西药组）,每组各11只。模型组灌胃等容积0.9%氯化钠注射液,中药高、中、低剂量组及中药灌胃组分别给予灌胃、灌肠丹荔输通汤,对照组灌胃阿奇霉素混悬液与等容积0.9%氯化钠注射液。连续干预30d。观察各组大鼠的输卵管形态、组织病理学及肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平。结果：干预后,肉眼观察发现,与模型组相比,各用药组输卵管组织形态可见不同程度的改善。组织病理学结果显示,中药高剂量组输卵管形态及功能基本正常,中药中剂量组、中药灌胃组、西药组输卵管轻度炎症表现。与空白组比较,模型组TNF-α、IL-6表达升高,与模型组比较,各给药组TNF-α、IL-6表达均降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与西药组比较,中药高、中剂量组TNF-α、IL-6表达降低（P<0.05）;中药高、中剂量组TNF-α、IL-6水平低于中药低剂量组、中药灌胃组,中药中剂量组TNF-α、IL-6水平低于中药灌胃组,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：丹荔输通汤治疗慢性输卵管炎可能通过调节TNF-α、IL-6而抑制炎性反应,从而改善全身及局部组织炎症状态。     

健脾补肾中药方对结直肠癌裸鼠移植瘤模型Klotho及铜死亡相关蛋白的研究

目的：探讨健脾补肾法对结直肠癌裸鼠移植瘤模型Klotho及铜死亡相关蛋白FDX1及LIAS的影响。方法：将16只裸鼠皮下移植瘤模型分为对照组和中药组,每组各8只,对照组用0.4 ml0.9%氯化钠注射液灌胃,中药组用0.4 ml健脾补肾类中药颗粒灌胃。2组裸鼠培育14 d后,免疫组化检测肿瘤组织Klotho及铜死亡相关蛋白FDX1、LIAS的表达情况。结果：2组造模后致瘤率均达100%,中药组裸鼠精神及活跃程度较好;2组灌胃14 d后各死亡1只。2组裸鼠肿瘤的质量及体积比较,差异无统计学意义（P>0.05）。中药组裸鼠肿瘤组织中Klotho蛋白、FDX1蛋白阳性表达显著高于对照组（P<0.05）;2组裸鼠肿瘤组织中LIAS蛋白表达均呈阴性,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：健脾补肾法可上调结直肠癌裸鼠移植瘤模型抑癌基因Klotho蛋白及铜死亡相关蛋白FDX1的表达。