褐藻酸钙凝胶固定化木瓜蛋白酶的研究

STUDIESONIMMOBILIZATIONOFPAPAINBYCALCIUMALGINATEGELS褐藻酸盐凝胶是固定化酶和固定化细胞的理想载体,已广泛地应用于纺织工业,塑料工业,食品和医药工业中[1~3]。本实验以褐藻酸钙凝胶作为载体,用包埋的方法来固定木瓜蛋白酶。通过正交设计试验法探讨了最佳固定化条件,测定了固定化酶的催化特性和动力学性质：固定化酶的最适pH值,最适温度和表现米氏常数。并且还对固定化酶的热稳定性,固定化酶的半衰期,固定化酶和游离态酶的活性进行了比较;初步探讨了固定化酶在工业生产上应用的可能性。1材料和方法1．l…     

固定化木瓜蛋白酶的研究及其应用

从 8种载体材料中选取自制的氨基含量约 2 .878mmol/ g的甲壳质作为固定化载体 ,采用吸附交联法 ,以戊二醛为交联剂 ,对木瓜蛋白酶进行固定化。 17.5 mg/ g的固定化酶 /载体比例 ,p H6 .5 ,5℃下 ,先吸附 10 min,再以 0 .7%的戊二醛终浓度交联 12 h,所得固定化酶酶活回收可达5 2 .0 % ,酶活力为 3.5 4 U / g。固定化酶在 6 5℃以下 ,溶液酶在 5 5℃以下稳定 ;固定化酶在 p H7.0以下稳定 ,溶液酶在 p H6 .0以下稳定 ;5℃条件下 ,固定化酶贮藏半衰期为 183d;以酪蛋白为底物 ,固定化酶的操作半衰期可达 2 7d。用固定化酶水解甲壳胺 ,产物分子量小于 10 0 0 0的甲壳胺低聚糖得率约为 4 5 .5 5 %。     

多酚氧化酶的固定化及其酶学性质的研究

以壳聚糖/蒙脱土插层复合物为载体,采用吸附法和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(PPO),考察了固定化酶的最佳制备条件及其酶学性质。结果表明,吸附法固定化多酚氧化酶(A-PPO)的最佳制备条件为pH=5.0,酶与载体质量比20mg/g,固定化时间6h,固定化酶的载酶量为12.12mg/g,单位载体酶活为12.76×103 U/g,酶活回收率为81.7%。交联法固定化酶(C-PPO)的最佳制备条件为pH=4.0,酶与载体质量比75 mg/g,固定化时间6h,固定化酶的载酶量为18.33mg/g,单位载体酶活为2.78×103 U/g,酶活回收率为12.9%。A-PPO和C-PPO的最适酶促反应条件为pH=8.0,温度分别为40和30℃。与游离多酚氧化酶相比,固定化酶的操作稳定性、贮存稳定性均有所提高。固定化酶重复使用5次后,可保留37.6%以上的相对酶活。PPO,A-PPO和C-PPO的米氏常数Km值分别为0.48,0.56和3.06mmol/L,较游离酶的Km值均有所增加;最大反应速率Vmax分别为2.70,2.08和0.18U/g,较游离酶的Vmax值均有所减小。     

海藻酸钠凝胶(C_6H_7NaO_6)_x交联Ca~(2+)包埋风味酶的工艺优化及应用稳定性研究

以海藻酸钠为载体,Ca2+为交联剂,对风味酶进行固定化。以固定化酶活力回收率为指标,在单因素试验基础上,通过响应面分析方法优化了固定化风味酶的工艺,并考察了固定化风味酶使用的稳定性。通过对回归模型进行分析,确定最佳的固定化工艺参数为海藻酸钠浓度2.43%,加酶量(酶液体积/海藻酸钠体积)1:1.76,固定化时间2.89 h,此时固定化酶的活力回收率可达81.88%,考虑到实际操作时对参数精度的控制水平,将固定化酶的优化工艺确定为海藻酸钠浓度2.50%,加酶量(酶液体积/海藻酸钠体积)1:2,固定化时间3.00 h,固定化酶的活力回收率达到80.05%±1.33%。优化工艺下制得的固定化风味酶最适使用温度为60?C,热敏感性降低,稳定性提高;最适p H 8.0,比游离酶向碱偏移了1.0,酸碱适用范围增大;可多次使用,冷藏条件下储藏3周后活力依然保持在80%以上。     

固定化鲅鱼乙酰胆碱酯酶的制备及部分性质测定

酶的固定化是酶传感器制备过程中重要的1个环节.研究采用直接共价法固定鲅鱼乙酰胆碱酯酶（AChE）.制备方法为：0.1g CNBr活化的Sepharose 4B凝胶用1mmol/L的HCl充分溶胀后,与活力为10U的AChE溶液混合,于4℃下150r/min振荡8h.所制备的固定化酶活力回收率较高（96%）,对pH值和温度变化的适应能力均优于非固定化酶;在3个月保存期内,前者的活力损失13%,而后者的活力则下降89%.这说明固定过程能够大大提高AChE的抗逆性和保持酶活力的稳定,有利于酶传感器的制备.     

树脂固定化海洋脂肪酶ADM47601的研究

以海洋脂肪酶ADM47601为研究对象,以树脂为载体,进行了固定化酶的研究。筛选了21种树脂,确定D316型阴离子交换树脂为载体。通过正交试验得到了固定化的最佳条件,每克载体加脂肪酶10 000 U,pH7.5,25℃,150 r/min,固定化时间3 h,固定化酶活力回收率可达65.53%±1.06%。固定化脂肪酶最适作用pH为7.5,在pH6.0~9.0的范围内能够保持85%的活力。最适作用温度40℃,在50℃下贮存1 h后依然保持66%的活力。25℃保存半衰期为55 d,操作8次仍然能维持60%以上的活性,且在多种有机试剂中能够稳定的保持活性。固定化脂肪酶Km和Vmax值分别为4.86×10~(–5) mol/L和1.31×10~(–5) mol/(L·min),对底物亲和性较好。     

海洋脂肪酶ADM47601固定化方法的研究

采用海藻酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇和明胶等材料, 进行对脂肪酶ADM47601的固定化研究。结果表明, 使用壳聚糖固定化脂肪酶, 在最优条件为2% (W/V)壳聚糖, 10% NaOH, 1%乙酸, 0.25%戊二醛, 每克载体添加840U脂肪酶时, 最大固定化酶活力回收率为87.06%。使用海藻酸钠-明胶固定化脂肪, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为54.45%。使用聚乙烯醇固定化脂肪酶, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为33.22%。使用海藻酸钠固定化脂肪酶, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为17.11%。对比四种不同固定化酶方法, 脂肪酶活力回收率高度高低顺序为: 壳聚糖吸附交联法>海藻酸钠明胶协同包埋法>聚乙烯醇-硼酸法>海藻酸钠包埋法。     

生物降解甲壳质的研究

介绍了利用生物 (主要是微生物 )降解甲壳质的一些研究进展 ,着重讨论了在甲壳质降解中起重要作用的几丁质酶的基本性质和分子生物学特征。指出了生物处理海洋资源 ,开发有用活性物质的应用前景。     

基于包埋法固定化漆酶的酶学性质及其催化氧化海水养殖废水中四环素的效能与途径

本研究以海藻酸钠、聚乙烯醇、明胶作为包埋材料,活性炭作为吸附剂,采用吸附-包埋法固定化漆酶,研究了游离漆酶和固定化漆酶的酶学性质,探讨了氧化还原介体类型及浓度、盐度对固定化漆酶降解四环素的影响,考察了四环素可能的降解途径。结果表明：与游离漆酶相比,固定化酶对pH和温度的变化表现出出色的适应能力,制备的固定化酶具有良好的热稳定性,60℃培养3 h后保留了其初始催化活性的76.31%,而游离漆酶仅保留不到20%的活性;4℃储存30 d固定化酶保留了51.41%的相对活性,表明固定化酶具有优异的储存稳定性。漆酶-SA系统在去除四环素(Tetracycline, TC)方面表现的更加优越,在3 mmol·L^-1丁香醛(Syringaldehyde, SA)存在的条件下,固定化漆酶对四环素的去除率为91.69%;盐度影响漆酶处理四环素的效果,但在30的盐度条件下,固定化酶能达到接近90%的TC去除率,满足水质净化的需要,漆酶催化氧化四环素的最佳pH为7。运用超高效液相色谱质谱联用仪,分析了降解产物,认为氧化、脱氢、脱甲基是漆酶氧化四环素的主要反应过程。     

牡蛎源菌株蛋白酶共价固定及其防污性能评价

含酶防污涂层材料由于良好的环境友好性而受到广泛关注,蛋白酶是含酶防污涂层材料中的关键防污活性酶之一。本文基于海洋微生物产出蛋白酶对海洋环境具有较好的适应性和二氧化硅微球易于在防污涂层中作为填料应用的背景,选择牡蛎表面生物膜分离菌株所产蛋白酶作为防污活性酶,以正硅酸乙酯为原材料,采用反相乳液聚合法制备活性表面纳米二氧化硅微球(NPSiO2),通过3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)对NPSiO2进行氨基化处理,并通过戊二醛将牡蛎源菌株产出蛋白酶共价固定于NPSiO2表面,制备出纳米二氧化硅微球共价固定化蛋白酶(NPSiO2-P)。相对于游离酶,固定化蛋白酶对温度、pH值的适应性明显提高,储存稳定性良好。以典型污损生物贻贝和底栖硅藻为评价生物,考察了固定化蛋白酶的防污性能。研究结果表明,固定化蛋白酶对硅藻、贻贝足丝的附着具有明显的抑制作用,同时可显著降低硅藻在材料表面的附着强度。     

海洋石油降解菌群的固定化及石油降解特性

为克服岸滩溢油生物修复过程中海浪冲刷等不利环境对石油降解菌(群)岸滩定植的影响,本文利用聚乙烯醇(PVA)和海藻酸钠作为载体对石油降解菌群DC10进行固定化,通过研究细菌固定化微球的机械性能、传质性能及石油降解特性等参数,确定石油降解菌群的最优固定化条件。实验结果表明:6%PVA,2%海藻酸钠及0.5%活性炭制备的凝胶可以通过蠕动泵方便快捷制备细菌固定化微球,其粘度小、易成型、机械强度高。海洋石油降解分析表明,与游离菌体(FB)相比,固定化菌群12d石油降解率提高了近7%;GC-MS分析显示,石油烷烃和芳烃降解效果显著。实验证明,石油降解菌群DC10经过固定化处理,其石油降解活性提高,连续降解能力增强,该研究为溢油岸滩的生物修复提供新的技术方法。     

氨基多糖多孔微球载体制备及其脲酶固定化特性

以脱乙酰度为 95 % ,分子量分别为 98KDa和 1 1 30 KDa的氨基多糖为载体材料 ,采用三聚磷酸钠固定的方法制成氨基多糖微球 ,并以此氨基多糖微球为载体用戊二醛交联法进行脲酶固定化研究。结果表明 :在 3%复合氨基多糖溶液中大、小分子量氨基多糖质量比为 1∶ 5时微球载体机械强度较好 ,表面光滑。用 Ca CO3 (w/w=1 /1 )处理则可得到表面具有蜂窝状结构的多孔微球载体 ;光滑表面微球载体与多孔微球载体对脲酶的固定化效率分别是 5 1 .5 %和 6 8% ;用 1 .5 cm× 1 5 cm柱进行尿素转化时间 1 2 min,光滑表面微球载体固定化脲酶和多孔微球载体固定化脲酶对尿素溶液(30 0 mg/L)转化率分别为 91 .8%和 99.99%。这一结果说明 ,利用多孔微球载体可有效地提高载体对脲酶的固定化效率 ,并且能彻底的分解尿素 ,提高尿素转化率     

关于褐藻胶作为固定化载体的研究

包埋法是固定化技术中比较成功而且多为工业应用的方法。褐藻胶(Algin)的钙盐能够形成天然的凝胶,因此,褐藻酸钙(Calcium-Alginate)是包埋法固定化技术中人们普遍采用的载体之一。 褐藻胶应用于固定化技术,1973年始于美国。其后,1975年联邦德国的科学家Hackel     

甲壳质/壳聚糖硫酸酯研究进展

人们希望能够找到或合成能够代替肝素的物质,以解决肝素资源有限问题,在众多的衍生物当中,甲壳质、壳聚糖磺化修饰成为最诱人的领域,由于壳聚糖具有独特的分子结构,比其他多糖更适合于制备肝素类物质,因此科学家对甲壳质、壳聚糖选择性磺化,对它们的构效关系,生物活性与应用开发进行了大量研究,以期在海洋药物领域获得突破。１甲壳质／壳聚糖硫酸酯的理化性质甲壳质是一种天然高分子多糖,存在于各种节肢动物（虾、蟹、昆虫等）的甲壳中,在褐煤中曾找到约２５０×１０４ａ前各种甲虫翅膀的残余,可见甲壳质对细菌作用十分稳定。这…     

海藻生物吸附金属离子的机理和影响因素

本文在前文“海藻生物吸附金属离子技术的特点和功能”的基础上，进一步阐述了生物吸附的机理，影响生物吸附的因子，生物吸附剂的洗脱及固定化等问题．通过对这些工作的了解，使我们对正在发展的海藻生物吸附技术理论基础和实际应用研究有更确切的认识、这些理论基础研究工作正是为对该项技术发展的进一步研究打下实际应用基础。     

微绿球藻固定化培养及其对对虾养殖水质调控

用褐藻酸钙作固定化载体,初步探讨了胶球直径、不同接种量、CaCl2溶液浓度、褐藻酸钠浓度等固定化条件对微绿球藻(Nannochloris oculata)生长及其对养殖水质的影响。结果表明,微绿球藻固定化培养的最好条件是胶球的直径为2.5mm、微藻接种量为1×106 Cell/mL, CaCl2溶液的质量分数为3%,褐藻酸钠溶液质量分数为2%。在此条件下制备的固定化藻珠, 微绿球藻生长率较高,生长周期较长。实验期间固定化微绿球藻的生物量增加了约17倍,证明了它的生理活性不会因固定化而受干扰。引入固定化的微绿球藻不但可以降低养殖水体中氨氮、亚硝酸氮等有害因子的浓度,还能提高水中溶解氧含量,使水体环境长时间处于良好的动态平衡状态。     

几丁质和脱乙酰几丁质的吸附特性及其用于水中痕量铜的测定

THEUTILIZATIONOFCHITINANDCHITOSANINDETERMINGTHECONTENTOFTRACECUPRICION测定铜含量的方法有多种,如二乙氨基二硫代甲酸钠,原子吸收分光光度法等。几丁质（缩写为CT）广泛地存在于动植物中,它是一种天然的大分子含氮多糖化合物,是β-1,4连接的乙酰氨基葡聚糖,它具有吸附离子的能力,能富集金属离子,故对水的净化具有应用潜力[1]。近年来国人对CT的研究日渐增多,在食品、医药、环保、农业、造纸、印染、日用化工以及酶制剂等方面,已陆续见诸报道。自然界甲壳质产量达100×108t,但实际用量仅2000t…     

海藻生物吸附金属离子技术的特点和功能

生物吸附技术是环境领域近年来迅速发展起来的处理工业污染废水的新技术。它以各种生物（菌类或藻类）吸附废水中的重金属离子，具有吸附容量大、选择性强、效率高、消耗少，并能有效地处理含低浓度重金属离子废水等优点。本文对国内外当前生物吸附金属离子技术的研究与应用进展作了综述，包括生物吸附技术的优越性，生物吸附剂的分类与来源，生物吸附的机理，影响生物吸附的因子，生物吸附剂的洗脱及固定化等问题。通过对这些工作的了解，使我们对方兴未艾的海藻生物吸附技术理论基础和实际应用研究有更确切的认识。这些理论基础研究工作为该项技术进一步研究发展打下了实际应用基础。     

甲壳多糖及单糖的制备工艺研究

甲壳质(chitin)，又名甲壳素，几丁质，主要存在于虾、蟹、蛹及昆虫等动物外壳中。其衍生物壳聚糖(chitosan)又名甲壳胺或脱乙酰甲壳素，是甲壳质经脱乙酰化反应制得的产物，是最基本、最重要的甲壳质衍生物。 壳聚糖具有良好的吸湿性、成膜性、气透性、降解性、生物相溶性、无毒副作用以及不污染环境的优良性质，广泛应用于环保、食品、化工、医药、纺织、造纸、卷烟、农业、化妆品、印染、生物医学、酶制剂、保健品、金属回收等许多行业中。因此甲壳质作为一种纯天然的自然资源，对其开发和应用具有极其深远的意义。但甲壳质及其壳聚糖的高度不溶性极大地限制了它们的应用，必须对它们进行化学深加工，或结构修饰，引入或改变其分子链上的某个基团，或者完全降解或部分降解其分子链，从而得到一些具有特殊性质、水溶性有所改善的衍生物产品来满足人们的使用需要，因此甲壳单糖随之问世。 D-氨基葡萄糖盐酸盐(GAH)是甲壳质或壳聚糖的降解产物，其结构为D-葡萄糖分子中C2-羟基被氨基所取代，因氨基显碱性，与盐酸结合成盐。D-氨基葡萄糖盐酸盐是重要的生化试剂和医药中间体，其用途十分广泛：对人体具有重要的生理功能，它参与肝肾解毒，发挥抗炎护肝的作用；它能促进抗生素药剂的注射功能，也可作为糖尿病患者的营养补助剂，大剂量使用对宿主组织无害，但对体内恶性细胞却是一种细胞毒；它促进人体黏多糖的合成，改善关节软骨的代谢及修复；此外，它还可作为化妆品和饲料的添加剂。目前，国内、外对D-氨基葡萄糖的需求日益增加。 本文论述了甲壳质和壳聚糖的制备技术，并着重研究了单糖的最优化制备方法，通过正交实验，进行了3因素6水平72(36×2)个实验；同时研究了抽滤工艺和脱色工艺对产品质量的影响，为今后高质量的生产D-氨基葡萄糖盐酸盐及工业化提供了技术指导。     

甲壳质及其衍生物生理活性研究进展

甲壳质是自然界中含量丰富且具有重要生物活性的一种天然多糖 ,其分子的部分基团进行修饰后可产生多种衍生物 ,这些衍生物既保留甲壳质的部分活性功能 ,又具有其本身独特的生理作用 ,因此 ,甲壳质及其衍生物在研究与开发应用方面具有广阔的前景 ,成为目前多糖领域中的研究热点。下面就甲壳质及其衍生物的生理活性研究作一综述。１伤口促愈活性甲壳质及其衍生物在伤口愈合过程中有作用已得到证明。已研究发现 ,伤口愈合的过程中 ,上皮细胞、内皮细胞、巨噬细胞和成纤维细胞的作用都很重要 ,甲壳质及其衍生物对这些细胞均有不同程度的影响。Ｍ…