锯缘青蟹NAGase在DMSO溶液中的失活动力学

以二甲亚砜（DMSO）为效应物，研究其对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活力的影响，结果表明，酶的剩余活力随着DMSO浓度增高而迅速下降，当DMSO浓度达4．0moL／dm^3时，酶活力几乎完全丧失，该酶在低于2mol／dm^3的DMSO溶液中的失活作用表现为可逆过程，导致酶活力丧失50％的DMSO浓度（IC50）为0．75mol／dm^3应用酶失活过程的底物反应动力学方法测定了游离酶（E）和酶-底物络合物（ES）在不同浓度DMSO溶液中的微观失活速度常数k＋0和k’＋0，k＋0明显大于k’＋0，说明游离酶较酶-底物络合物对DMSO更为敏感，底物对酶被DMSO失活有保护作用．随着DMSO浓度增加，逆向微观复活速度常数k-0不断下降，这说明NAGase在高浓度DMSO中失活的可逆性减弱。     

不同养殖期的凡纳滨对虾外壳膜NAGase基本性质比较

以不同生长期的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的外壳为材料，分离提取外壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC3．2．1．52，NAGase），测定分析不同生长期的外壳膜NAGase的酶比活力及其性质的变化．结果表明：不同生长期的酶活力、最适温度、催化反应的动力学参数（Km、vm）、活化能等均存在差异．不同生长期酶的最适pH均为5．5．不同生长期的对虾外壳膜NAGase对Cu^2＋、Zn^2＋和Hg^2＋的敏感性也不同．Cu^2＋对养殖8周对虾外壳膜NAGase的激活作用最为显著，可以使酶活力提高到400％．Zn^2＋对不同生长期的酶活力均有抑制作用，但对成体对虾酶抑制作用最为显著，可以使酶活力下降80％．Hg^2＋对各个生长期的酶活力影响效果也不一样，当浓度为0．1mmol／dm^3时，仅对养殖6、8、9周的对虾的酶有激活作用，当Hg“浓度为1．0mmol／dm^3时，五个生长期的虾皮NAGase活力均受到不同程度抑制．     

维生素对凡纳滨对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的效应研究

以凡纳滨对虾中提取的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52)为研究对象,以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,考察了几种养殖常用维生素对该酶活力的影响.结果表明,VB12、烟酸、核黄素等对酶活力基本上没有影响;而VB1、VB6、抗坏血酸等对该酶活力均有不同程度的抑制作用.随着抑制剂浓度增大,酶活力呈指数下降,测定导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为16.0、13.5、37.5mmol/dm3.进一步研究了VB6的抑制作用动力学,结果显示:VB6对酶的抑制作用为非竞争性可逆抑制,其对酶抑制常数(KI)为 15.2mmol/dm3.该研究对凡纳滨对虾的人工养殖具有一定的参考价值.     

文蛤抗癌多肽对N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶活力的影响

从文蛤体中分离纯化得到了抗癌多肽,研究该多肽对N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响,结果显示文蛤抗癌多肽对该酶有明显的抑制作用.在本文中,我们将深入地研究其抑制作用机理和抑制效应类型,结果表明:随着文蛤多肽加入量的增大,该酶活力呈指数下降,测得导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为112.9 μg/cm3,该多肽对酶的抑制作用是一种可逆过程,抑制机理表现为混合型抑制类型,对游离酶(E)的抑制常数(KI)和酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为77.03和697.44μg/cm3,说明文蛤抗癌多肽与游离酶的结合导致酶活力的丧失,明显的强于对酶-底物络合物的抑制效应,底物的存在对该酶被文蛤抗癌多肽抑制作用起了保护作用.     

抗菌类药物对锯缘青蟹N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶活力的影响

研究了几种抗菌类药物对锯缘青蟹（Scylla serrata）N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（简称NAGase,EC 3.2.1.52）活力的影响.其结果表明：链霉素、卡那霉素、青霉素钾、庆大霉素和磺胺嘧啶对该酶活力均没有明显的影响.头孢拉定对该酶有显著的激活作用,当其浓度为4.5mg/cm^3时,可使酶活力提高200%.而氟哌酸和恩诺沙星对该酶均有抑制作用,其中恩诺沙星对该酶的抑制作用较强,随着抑制剂浓度增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的抑制剂浓度（IC50）为0.44mg/cm^3.恩诺沙星对该酶的抑制作用类型表现为非竞争性可逆过程,抑制常数KI为0.35mg/cm^3.该研究对锯缘青蟹的人工养殖具有一定的参考价值.     

金属离子对锯缘青蟹NAGase活力的影响

本文研究了几种金属离子对锯缘青蟹（Scylla serrata）N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活力的影响．其结果表明：Li^＋、Na^＋和K^＋对酶活力没有明显影响，Mg^2＋、Ca^2＋和Ba^2＋对该酶均有激活作用，激活程度依次为Ca^2＋〉Ba^2＋〉Mg^2＋．Al^3＋、Fe^3＋、Cd^2＋、Pb^2＋和Hg^2＋对该酶具有一定的抑制作用，2．0μmol／dm^3的Hg^2＋可以使酶活力完全丧失．Co^2＋对酶的效应是先激活后抑制，Mn^2＋对酶仅有轻微的激活作用．Cd^2＋和Fe^2＋对锯缘青蟹NAGase的抑制作用都呈竞争性-反竞争性混合Ⅱ型效应，Cd^2＋的抑制常数Ki和KiS分别为23．9、5．0mmool／dm^3，Fe^3＋的抑制常数Ki和KiS分剐为395．5、135．6μmol／dm^3．Ki〉KIS说明酶一底物络合物（ES）与抑制剂的亲和力比游离酶（E）与抑制剂的亲和力大．     

深海沉积物宏基因组文库中产蛋白酶克隆CAPRO2的筛选及酶学性质分析

利用选择性筛选培养基从所构建的深海沉积物宏基因组文库中筛选得到一株产蛋白酶的克隆（CAPR0002）,对其进行了酶学性质分析．结果表明该酶的最适作用温度为65cc,最适作用pH值为9．0．该蛋白酶具有较好的热稳定性,在40cC以下的温度中可长期保持稳定,在50℃中处理6h后仍能保持60％的活力,在60℃下保温30rain后仍能保持约60％的活力．Ca^2＋、Mg^2＋、sr^2＋、co^2＋对该蛋白酶有明显的促进作用,而且ca^2＋的存在可明显提高该蛋白酶的热稳定性,ca^2＋、sr^2＋、c0^2＋这3种离子均在3．0mmol／dm^3。浓度时具有最高的促进作用,当浓度高于3．0mmol／dm’时,这3种离子对酶活力的促进作用减弱．Hg^2＋、Fe^2＋、cu¨对酶有明显的抑制作用．CAPR02蛋白酶在pH值为7。5～9．5时活力较高,pH值为7。5时可保持约80％的活力,pH值为9．5时保持60％的活力,而在pH值高于9．5的条件下酶活力下降较快,pH值为10．0时活力降为约15％,表明CAPR02属于碱性蛋白酶．丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF、E一64和AEBSF对CAPR02蛋白酶均无抑制作用,显示该酶不属于丝氨酸蛋白酶,而EDTA对酶有明显的抑制作用,表明该酶属于金属蛋白酶．     

锯缘青蟹NAGase的催化机理的判断

以p-硝基苯酚-β-D-氨基葡萄糖苷（pNP-NAG）为底物，研究产物类似物：p-羧基苯酚和苯酚对青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase，Ec3．2．1．52）活力的影响．结果表明：p-羧基苯酚和苯酚对该酶有抑制的作用，IC50分别为20．0和100．0mmol／dm^3．p-羧基苯酚和苯酚对酶的抑制均表现为竞争性类型，其抑制常数K1分别为5．03和25．67mmol／dm^3．结合产物N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖（NAG）抑制作用表现为反竞争性类型，判断NAGase水解pNP-NAG反应为有序双双反应（Ordered Bi Bi）．     

毒死蜱和重金属对近海沉积物碱性磷酸酶和过氧化氢酶活性的影响

选择连云港近海临洪河口河心浅滩沉积物,采用不同浓度毒死蜱和重金属于室内培养,研究了毒死蜱和重金属对沉积物碱性磷酸酶和过氧化氢酶酶活性及其动力学特征的影响。研究结果表明:1)碱性磷酸酶活性受毒死蜱影响显著,峰值出现在10-200mg/kg浓度区间,培养第三周时V_(max)显著下降,酶活性抑制作用最显著。2)毒死蜱对过氧化氢酶激活作用的峰值出现在50mg/kg处。培养三周,过氧化氢酶活性逐渐回归正常值。3)Cd处理对沉积物碱性过氧化氢酶和过氧化氢酶抑制作用显著,明显强于Pb处理以及Cd、Pb复合处理,而Pb在相当程度上缓解了Cd对两种酶的抑制作用。4)酶活性可以用来指示沉积物的早期污染状况。     

悬浮物对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)幼鱼肝脏溶菌酶、超氧化物歧化酶和鳃丝Na+-K+-ATPase活力的影响

在实验室条件下构建不同的悬浮物浓度环境，采用试剂盒分析方法研究了不同浓度悬浮物对半滑舌鳎幼鱼肝脏溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）和鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力的影响。养殖水体中悬浮物浓度添加量分别为0（对照）、50、100、200和400mg／L，每5天采样测定一次，实验周期为25天。结果表明，当悬浮物浓度添加量为50和100mg／L时，肝脏LSZ和SOD活力与对照组无显著差异（P〉0．05），当添加量为200和400mg／L时，肝脏LSZ和SOD活力与对照组有显著差异（P〈0．05）；实验后期各实验组鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力与对照组均有显著差异（P〈0．05）。在悬浮物效应的25天内，各实验组肝脏LSZ活力呈峰值变化，10天时除100mg／L浓度添加组外均达到最大值；而肝脏SOD活力在50和100mg／L浓度添加组略有升高，在200和400mg／L浓度添加组则基本呈下降趋势；鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力前10天各实验组较对照组无显著变化，之后则显著降低，后期基本趋于稳定，其活力低于初始水平；实验结束时，各实验组其肝脏LSZ、SOD和鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力相对于对照组都受到了不同程度的抑制，其中各实验组鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力抑制率分别达到了27．6％、65．2％、57．0％和71．1％。