检测海洋弧菌的酶联免疫吸附试验研究

研究建立中国对虾病原菌┐副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）快速检测技术。间接ＥＬＩＳＡ技术中的副溶血弧菌的特异抗血清由家兔制备，羊抗兔ＩｇＧ用碱性磷酸酶标记，酶的底物为对磷酸基硝基苯。将该技术标准化后，测定了抗血清与１３株其它副溶血弧菌菌株及２９株其它弧菌标准菌株的交叉反应，并进行了苗期对虾样品中副溶血弧菌的检测     

养殖中国对虾肝胰脏细小病毒病的免疫金银染色法诊断研究

80年代以来 ,肝胰脏细小病毒病在养殖中国对虾中广泛流行并造成了一定的损失。作者采用免疫金银染色 (immunogold silver staining,IGSS)技术 ,对患病对虾肝胰脏中的细小病毒(Hepatopancreatic parvovirus,HPV)进行了免疫组织化学的研究。结果表明 ,经 IGSS染色的病虾肝胰脏上皮细胞核内出现了黑色的、圆形或椭圆形、大小为 3～ 15μm的结构。由于该结构与 H- E染色切片上出现的肝胰脏细小病毒包涵体在发生部位、形态和大小上皆一致 ,故而认为该结构为HPV包涵体。证明 ,免疫金银染色法是一种可应用于中国对虾肝胰脏细小病毒病诊断的有效方法。     

用ELISA检测中国对虾的白斑综合症病毒(WSSV)

随着对虾养殖业的发展,对虾疾病越来越受到人们的关注,尤其对虾病毒性疾病已成为各国学者研究的焦点之一。由于没有有效的抗病毒药物,早期预防就显得更为重要,而这依赖于快速、敏感的诊断方法。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是1972年由Engvall等在酶免疫试验(enzyme immunoassay,EIA)的基础上发展起来的。目前,在病毒等疾病有关的抗原抗体系统的定性或定量测定领域内已被广泛应用。本文通过病毒纯化,免疫新西兰兔,获得多克隆抗血清,并对抗体进行纯化、酶标记,建立了双抗体夹心直接ELISA的检测方法。     

中国对虾弧菌病的间接荧光抗体诊断技术研究

于１９９４年８月－１９９５年５建立中国对虾病原菌－副溶血弧菌的间接荧光抗体检测技术，其中副溶血弧菌的特异抗血清由家兔制备，羊抗兔免疫球蛋白用异硫氰酸荧光素标记，并以罗丹明标占血清白蛋白为背影染色。     

中国对虾肝胰脏细小病毒病的直接荧光抗体法诊断研究

中国对虾肝胰脏细小病毒（ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅ,ＨＰＶＤ）是一种广泛流行于中国对虾中的危害性较大的疾病。由于该病没有特异的肉眼症状,因此早期、快速诊断方法的研究就十分重要。作者曾完成了ＳＰＡ协同凝集试验法和免疫金银染色法的诊断研究。本文用直接荧光抗体法进行研究,观察其诊断效果。结果是,将抗ＨＰＶ的荧光抗体滴加到对虾肝胰脏组织涂片以后,在某些样品的肝胰脏上皮细胞中出现了圆形、椭圆形,大小６～１３μｍ的黄绿色荧光物。经比较,该荧光物的大小和形状与同一样品病理组织切片上经Ｈ－Ｅ染色后上皮细胞中出现的ＨＰＶ包涵体是一致的。由此认为,这些存在于肝胰脏上皮细胞内的荧光物是ＨＰＶ包涵体,而直接荧光抗体法用于诊断中国对虾ＨＰＶ是有效可行的。     

中国对虾组织细胞中的过氧化物酶体

运用电镜细胞化学技术，研究中国对虾(Penaeus chinensis)组织细胞中的过氧化物酶体，透射电镜下观察中国对虾的淋巴器、肝胰腺、触角腺和中肠4种组织。观察显示：过氧化物酶体主要存在于肝胰腺细胞和触角腺的迷路上皮细胞中。在肝胰腺的R-细胞中过氧化物酶体的形成与粗面内质网、脂滴和胞质溶胶有密切关系。肝胰腺中的R-细胞和触角腺的迷路上皮细胞富含过氧化物酶体，提示这两个组织在对虾降解外来有毒物质的过程中发挥着重要的作用。     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)造血激素的组织分布及细胞定位分析

造血激素(astakine)是一种具有促进造血组织细胞分化和增殖作用的甲壳动物细胞因子,参与甲壳动物的造血活动,对于只依赖于非特异性免疫的甲壳动物抗感染能力有重要的意义。本实验室前期成功克隆凡纳滨对虾造血激素(LvAST)的基因Lvast。为了进一步了解其功能,本文通过实时荧光定量PCR技术检测了Lvast表达的组织分布,同时还用Dlight标记抗LvAST抗体进行了LvAST在对虾细胞和组织中的免疫荧光定位分析。荧光定量PCR测定结果说明,Lvast主要在肝胰腺、鳃和肌肉中大量表达,而淋巴器官和血淋巴细胞中表达量较低;免疫荧光结果显示,LvAST可同时存在于血淋巴细胞内和血淋巴细胞膜表面,不同的血淋巴细胞表面的LvAST分布呈现出明显差异,可能具有重要的血细胞分类意义。LvAST蛋白在肝胰腺、鳃、肌肉、淋巴器官等组织中均有分布,并且肝胰腺组织中分布较多,淋巴器官组织中分布较少。     

凡纳滨对虾造血激素的组织分布及细胞定位分析

造血激素（astakine）是一种具有促进造血组织细胞分化和增殖作用的甲壳动物细胞因子,参与甲壳动物的造血活动,对于只依赖于非特异性免疫的甲壳动物抗感染能力有重要的意义。本实验室前期成功克隆凡纳滨对虾造血激素（LvAST）的基因Lvast。为了进一步了解其功能,本文通过实时荧光定量PCR技术检测了Lvast表达的组织分布,同时还用Dlight标记抗LvAST抗体进行了LvAST在对虾细胞和组织中的免疫荧光定位分析。荧光定量PCR测定结果说明,Lvast主要在肝胰腺、鳃和肌肉中大量表达,而淋巴器官和血淋巴细胞中表达量较低;免疫荧光结果显示,LvAST可同时存在于血淋巴细胞内和血淋巴细胞膜表面,不同的血淋巴细胞表面的LvAST分布呈现出明显差异,可能具有重要的血细胞分类意义。LvAST的蛋白在肝胰腺、鳃、肌肉、淋巴器官等组织中均有分布,并且肝胰腺组织中分布较多,淋巴器官组织中分布较少。     

兔抗对虾白斑症病毒(WSSV)独特型抗体的制备及其特性分析

以前期已制备的抗WSSV囊膜蛋白单克隆抗体4G9(Ab1)杂交瘤细胞生产小鼠腹水,腹水经辛酸-硫酸铵法、ProteinG亲和层析法纯化后,用以制备兔抗血清,所得血清经纯化得到粗提的兔抗WSSV独特型抗体(Ab2)。采用竞争酶联免疫吸附实验、间接免疫荧光法、斑点免疫印迹和蛋白免疫印迹等实验方法分析了Ab2特性,结果表明:Ab2能识别Ab1并与WSSV竞争Ab1的抗原结合位点,是具有模拟WSSV特性的抗独特型抗体;Ab2能与中国对虾血细胞结合,并能部分阻断WSSV与血细胞膜的结合;其与中国对虾血细胞膜上结合的蛋白分子量分别为94.5、51.5和27.0kDa,由此推断,这三个蛋白为WSSV在中国对虾血细胞膜上的结合蛋白。本研究结果可为进一步研究WSSV侵染机理提供资料。     

中国对虾肝胰腺细小病毒的纯化与鉴定

于１９９１年９月－１９９３年底，利用在青岛市沙子口对虾养殖场采采的中国对虾病虾肝胰腺样品，采用一种改进的酒石酸钾－甘油密度梯度离心法，对原先称之为肝胰腺细小样病毒的一种对虾病毒进行纯化。通过电子显微镜观察，提取病毒核酸用不同核酸酶处理并结合电泳等方法，对病毒的基本生物物理和生物化学特性作鉴定，结果表明，用酒石酸钾－甘油密度梯度离心法，可获得良好的病毒纯化效果；纯化后的病毒颗粒显示正二十面体立体对称     

贝类神经内分泌和免疫系统对环境胁迫的响应

贝类养殖在中国海水养殖业中占有重要的地位，其产量占中国海水养殖总量的80%以上，也是出口创汇的主要对象。近年来栉孔扇贝(Chlamys farreri)等贝类的大规模死亡制约了相关产业的发展，而导致栉孔扇贝(C.farreri)大规模死亡的直接病因是一种球形病毒(贺桂珍等， 2003；王崇明等，2002)，养殖海区生态环境的胁迫作用是其大规模死亡的重要诱因(张福绥等，1999)。在多种胁迫因子的协同作用下，贝类抗病力下降、病原体大量繁殖，从而引起大规模死亡。因此，系统地研究贝类神经内分泌和免疫系统对环境胁迫作用的响应是十分必要的。 胁迫反应指胁迫因子引起的机体在生物体、组织及分子水平上的行为学、细胞学和生化反应，包括神经内分泌反应、免疫反应以及多种行为反应(Bayne et al.，1975)。贝类胁迫反应尤其是神经内分泌反应及免疫反应的研究刚刚起步，国内相关报道很少。本文作者综述了国际有关贝类神经内分泌反应及免疫反应的研究进展，以期为国内在此领域的研究提供参考依据。     

凡纳滨对虾对多巴胺免疫响应的研究

研究凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)对多巴胺的免疫响应。结果表明:注射多巴胺对凡纳滨对虾血细胞数量、吞噬率和血淋巴酚氧化酶、溶菌、类α2-巨球蛋白活力影响显著(P<0.05),而对照组各免疫指标无明显变化。在实验时间内,多巴胺处理组各指标均呈峰值变化,3类血细胞、总血细胞数量和血淋巴类α2-巨球蛋白活力在3h时分别达到最小值和最大值,而血淋巴酚氧化酶、血细胞吞噬率和血淋巴溶菌活力于6h时分别达到最大值和最小值,同时各免疫指标变化与多巴胺的注射剂量具有明显的负、正相关性;其中颗粒细胞、半颗粒细胞数量和血淋巴酚氧化酶、类α2-巨球蛋白活力在12h后趋于稳定,透明细胞、总血细胞数量和吞噬率于18h后保持稳定,而溶菌活力在24h后保持平稳,稳定后各免疫指标均恢复至对照组水平。这说明多巴胺对凡纳滨对虾血细胞具有明显的调节作用,能在短时间内引起对虾免疫力的显著下降,并表现出明显的剂量效应性。     

螺旋藻多糖对小鼠S-180肉瘤的免疫抑制作用

研究了螺旋藻多糖对小鼠S-180肉瘤的抑制作用。结果显示：螺旋藻多糖在50—200μg／g的剂量范围对小鼠S-180肉瘤均有一定的抑制作用，具有明显升高小鼠外周血白细胞的功能，促进荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化作用，并有较好的剂量—效应关系，促进荷瘤小鼠脾NK细胞对靶细胞的细胞毒作用。提示螺旋藻多糖可通过全面调节机体的免疫功能，刺激T细胞、NK细胞等功能来达到控制和杀灭肿瘤细胞的目的。     

紫球藻胞外多糖抗辐射的生物学活性研究

研究了单细胞红藻紫球藻（Porphyridium sp.)对^60Coγ－射线辐射后小鼠免疫功能的影响。紫球藻胞外多糖（Plysaccharide of Porphyridium sp.PSP）在体内对小鼠免疫功能具正调节作用，具体表现为显著提高小鼠脾细胞增殖水平，自然杀伤（Natural Killer Cell,NK细胞）杀伤活性和白细胞介素2（Interleukin 2,IL-2)活性。IL－2可以激活T细胞，增强NK细胞的活性，改善^60Coγ－射线辐射引起的免疫功能低下而对机体造成的不利影响，使小鼠的免疫功能达到甚至超过正常水平。     

免疫添加物对大黄鱼血液白细胞数量及其吞噬功能的影响

采用低聚糖益力素、稳定型维生素C、渔用多维等免疫、营养添加物定期投喂大黄鱼，以粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、吞噬百分率、吞噬指数等为指标，跟踪检测试验大黄鱼血液中白细胞组成数量和吞噬细胞吞噬能力的变化。研究结果表明，免疫添加物可以提高大黄鱼血液中白细胞数量和吞噬细胞的吞噬能力，增强大黄鱼的非特异性免疫功能，促进大黄鱼的健康生长。     

有机污染对中国对虾体内外环境影响的研究

于１９９４－１９９５年分二批人工配合饵料作为有机污染源，进行有机污染对中国对虾体内外环境影响的研究，结果表明：１．经１０ｄ，试验池水中的ＤＯ含量明显降低，而ＣＯＤＮＨ３－Ｎ，ＮＯ２－Ｎ等迅速增加，分别是对照的２．５，２．１，１１．３倍，Ｈ２Ｓ含量轻２８ｄ后为对照组２．１倍，同时，试验组各菌群的密度也分别比对照组增加２－３个数量级，２．试验且虾的超氧化物歧化酶，酚氧化酶及溶菌酶的活性比对照组显著下降     

迟缓爱德华氏菌对牙鲆免疫器官的影响

当经口腔灌注大量迟缓爱德华氏菌后,牙Ｐｉｎｇ的头肾和脾脏内的免疫细胞活性增强,表现为单核细胞数量增加,颗粒细胞内产生大量的颗粒以及颗粒吞噬作用的增强。研究结果还表明,病菌也会对免疫器官产生损害,可造成细胞水肿,膜性结构破坏及细胞坏死。本文详细观察了牙Ｐｉｎｇ肾、脾、肝、肠及血液的显微结构和肾、脾、肝的超微结构的变化,研究结果对疫苗的应用提供了良好的细胞学基础。     

互花米草总黄酮对小鼠免疫功能的影响

互花米草总黄酮(TFS)是从盐沼植物互花米草中分离得到的一种免疫活性物质。在研究TFS对小鼠免疫功能的影响时发现TFS156.25×10~(-6)ip qd×8导致由环磷酰胺引起的免疫抑制小鼠的胸腺重量增加。TFS154.25×10~(-6)sc qd×5还显著提高C_(57)/BL和昆明小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。TFS 3.125,12.5ug/ml在体外可明显促进由ConA诱导的~3H-TdR参入的淋巴细胞转化。     

扇贝多肽在体外对免疫细胞活性的影响及其抗紫外线的氧化损伤作用

采用噻唑盐（MTT）比色方法研究在紫外线辐射损伤条件下扇贝多肽对免疫细胞的保护作用，并探讨扇贝多肽对胸腺细胞和脾细胞活性的影响，结果表明，扇贝多肽具有抗紫外线氧化损伤的作用，可减轻或抑制紫外线对胸腺细胞和脾细胞的氧化损伤，并且呈剂量依赖性，扇贝多肽在0.5%-10.0%的浓度范围内，其抗氧化能力随浓度的增高而增强，在正常条件下可显著增强免疫细胞的活性，并且可拮抗雌激素对免疫细胞的抑制作用。提示扇贝多肽不仅具有抗氧化损伤作用，而且具有免疫增强使用。     

饲料中铁对美国红鱼(Sciaenops ocellatus)生长和免疫的影响

采用单因子实验设计方法,进行了饲料中添加铁对美国红鱼生长(增重率、存活率、特定生长率和饲料效率)、免疫反应(血清溶菌酶活性、总补体活性和超氧化物歧化酶活性(Superoxide dismutase,SOD)和组织中铁积累量影响的研究。结果表明,各饲料组美国红鱼的成活率(93.33%-95.00%)无显著性差异(P>0.05);饲料铁含量在327.2、368.1mg/kg时饲料效率显著高于285.3、303.5、443.7mg/kg组(P<0.05);随着饲料中铁含量从285.3mg/kg增加到327.2mg/kg,美国红鱼的增重率和特定生长率显著升高(P<0.05),而饲料中铁含量达到443.7mg/kg之后,其增重率和特定生长率显著下降;以特定生长率为指标,通过回归拟合分析美国红鱼最佳生长性能的饲料铁含量为330mg/kg左右。各饲料组肌肉中铁积累量无显著性差异(P>0.05);随着饲料中铁含量从285.3mg/kg增加到443.7mg/kg,美国红鱼肝脏中铁积累量显著增加(P<0.05)。饲料铁含量在368.1mg/kg时血清溶菌酶活性达到最高值,并显著高于285.3、303.5、327.2mg/kg组(...