对虾白斑杆状病毒(WSBV)对斑节对虾的实验感染与病理学研究

用取自发病虾塘患典型白斑病的病虾为毒源 ,对健康斑节对虾Penaeusmonodon进行人工感染 ,按Koch氏法证实了对虾白斑杆状病毒 (WSBV)是白斑病的病原。对人工感染WSBV后患典型白斑病的斑节对虾的胃、肠及皮下结缔组织进行石蜡切片和超薄切片 ,研究WSBV引起的组织病理变化和宿主细胞感染WSBV后的超微病变过程。结果表明 :感染WSBV后病虾的不同组织均存在广泛的变性、坏死 ,上皮细胞大量解体、脱落 ;部分细胞核肿大、游离 ;结缔组织糜烂 ,呈现空泡化 ;未发现包涵体。透射电镜照片显示 :感染WSBV后的病虾在感染前期 ,靶细胞核膨胀 ,核仁消失 ,核外膜破损 ,染色质靠边分布 ,内质网断裂 ,核糖体脱落 ,线粒体肿胀 ,高尔基体萎缩 ,溶酶体空泡化 ;感染中期 ,病毒粒子在细胞核内大量复制 ,直至充满整个核 ,细胞核内无结构化 ,核膜及质膜皱缩 ;感染后期 ,核胀破 ,病毒粒子从核内释放 ,细胞核呈空囊状 ,胞质内髓样结构明显 ,细胞器解体 ,细胞功能丧失。     

利用WSBV的引物扩增中国对虾的杆状病毒DNA

利用台湾报道的ＷＳＢＶ的ＰＣＲ引物,成功地扩增出了１４００ｂｐ左右的中国对虾的杆状病毒的ＤＮＡ片段,与预计的产物长度吻合。该引物对经初步离心处理的病虾组织也能扩增出特异性ＤＮＡ条带,而对正常虾组织ＤＮＡ、昆虫杆状病毒（ＡｃＭＮＰＶ）ＤＮＡ进行扩增,均获得阴性结果。说明该引物的特异性较高,对中国对虾的杆状病毒的检测具有一定的实际应用价值。实验结果同时说明ＷＳＢＶ与中国对虾的杆状病毒有同源序列存在,具有一定的保守性;用该引物进行的ＰＣＲ扩增为中国对虾的杆状病毒与其他相关病毒的比较研究提供了一种技术手段。     

暴发性流行病病原对中国对虾越冬亲虾人工感染的研究

从典型的白斑症病虾中,分离出一种杆状病毒,属对虾白斑病杆状病毒［３］。为了探讨对虾暴发性流行病的发病机理及传播机制,作者于１９９６～１９９７年冬季,采用青岛地区当年夏季暴发典型白斑症的病虾,对中国对虾健康的越冬亲虾进行了白斑病杆状病毒的感染试验。１　材料和方法１．１　病虾标本与病原分离具典型白斑症状的病虾,于１９９６年８月取自青岛城阳区红岛邵格庄发病的虾场,保存于－７０℃。剥离病虾的胃、肠及鳃组织约１０ｇ,加液氮充分研磨,加９０ｍｌ０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ（０．２ｍｏｌ／ＬＮａ_２ＨＰＯ_４－Ｎａ…     

白斑综合症杆状病毒致病性特征

对白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）致病性特征的研究结果表明：ＷＳＢＶ的致病性与斑节对虾Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ个体大小无关,ＷＳＢＶ的致病力与感染方式和病毒数量有关;在盐度为１４、温度为２８－３２℃的海水中,游离ＷＳＢＶ在４ｈ内失去感染活性;体长７ｃｍ的白斑综合症死亡斑节对虾,其携带的ＷＳＢＶ在５７ｈ失去感染活性;体长７ｃｍ死亡斑节对虾经２８℃空气干燥,其携带的ＷＳＢＶ在５０ｈ失去感染活性;ＷＳＢＶ不能通过体表感染健康斑节对虾,而斑节对虾摄食一定数量病毒才能导致感染;水不能作为游离ＷＳＢＶ的载体传播ＷＳＢＶ。     

白斑综合症杆状病毒致病性特征

对白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）致病性特征的研究结果表明,ＷＳＢＶ的致病性与斑节对虾个体大小无关,ＷＳＢＶ的致病力与感染方式和病毒数量有关,在盐度为１４,温度为２８￣３２℃的海水中,游离ＷＳＢＶ在４ｈ内失去感染活性;体长７ｃｍ的白斑综合症死亡斑节对虾,其携带的ＷＳＢＶ在５７ｈ失去感染活性;体长７ｃｍ死亡斑节对虾经２８℃空气干燥,其携带的ＷＳＢＶ在５０ｈ失去感染活性;ＷＳＢＶ不能通过体表感染健康斑节     

几种理化因子对斑节对虾白斑杆状病毒(WSBV)感染力的影响

将部分纯化的ＷＳＢＶ暴露于不同理化条件下,通过人工感染的方法测定ＷＳＢＶ的感染力。结果表明,病毒在纯水中１ｈ能保持感染活性,全在３ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ的高盐溶液中１ｈ失去感染力;ＷＳＢＶ在３０℃中４ｈ感染活性丧失,在７０～９０℃中１０ｍｉｎ均失去感染力;当环境ｐＨ值为５以下或１２．６以上时,ＷＳＢＶ在１ｈ后丧失感染活性;ＮＰ０－４０,Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００,ＣｌＯ２或甲醛等均能灭活ＷＳＢＶ。     

实验感染白斑杆状病毒(WSBV)的斑节对虾血液病理学研究

用光镜观察经人工感染白斑杆状病毒 (White Spot Baculovirus,WSBV) 后患典型白斑病的斑节对虾 Penaeus monodon 的血淋巴涂片,研究了WSBV导致的淋巴细胞数量及结构异常;通过检测感染WSBV后患病虾与健康虾的血清主要生化指标,首次揭示了两者的主要差异及WSBV在宿主体内增殖的时间过程.结果表明:患病虾淋巴细胞明显减少,无颗粒细胞难以找到,颗粒细胞和小颗粒细胞分别为健康虾的11.7%和4%;颗粒细胞内出现深染区、空白区或异样突起.血涂片上偶尔发现有大型固定性吞噬细胞.在患病虾血清主要生化指标中,Ca2+含量比健康虾显著升高,患病虾为15.93mmol·L-1,健康虾为10.71mmol·L-1;相反,患病虾血清中总蛋白(Tp)、总磷(PB)及乳酸脱氢酶(LDH)均比健康虾个体低,3者含量依次为:52.07g·L-1,0.34mmol·L-1和35.27IU·L-1,在健康虾个体血清中为:66.29g·L-1,0.66mmol·L-1及82.36IU·L-1;而K+,Mg2+含量无显著差异.血清中Ca2+,PB及TP的含量可以作为斑节对虾感染WSBV后出现白斑病的血清生化特征.斑节对虾感染WSBV后不同时间内血清主要生化指标显示其增殖的时间顺序可能为:24h内主要进行核酸复制,24-48h主要进行囊膜蛋白质的合成,病毒从入侵宿主细胞到从细胞内释放的过程约需48h.     

核酸斑点杂交分析法检测对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)

于１９９５年７月在青岛晨阳对虾养殖场采集患当性流行病的中国对虾样品,提纯ＨＨＮＢＶ并研制了一组地高辛标记的ＨＨＮＢＶ核酸探针。采用核酸斑点杂交方法了此组核酸探针的灵敏度和特异性。结果表明,此组探针检测ＨＨＮＢＶＤＮＡ的灵敏度为６２．５ｐｇ,对４６９ｎｇ病虾胃中的病毒可以检出;此组探针与３．７５μｇ健康对虾组织和２ｎｇ健康对虾ＤＮＡ均无交叉反应,１９９７年,应用此组特异性核酸探针检测了发病虾池对虾及     

斑节对虾 弧菌病的病理学研究

对患有典型弧菌病症状的养殖斑节对虾进行了病理学研究，取病虾血淋巴制作血涂片，并取鳃、肝胰腺、肌肉等组织作组织病理和超微病理观察，同时取肌注感染后的患病对虾测定血淋巴中超氧化物歧化酶（SOD）的活力，结果显示，患病对虾的血细胞数目急剧减少，胞质浓染，透明细胞很难找到，血细胞形态多样，有的伸出伪足或形成异样突起，患病对虾锶、肝胰腺、心脏、肌肉以及胃肠等组织内均出现程度不同的炎症反应，以肝胰腺最为严重，组织中充满大量的浓染血细胞，细胞肿胀，细胞核核质边聚，线粒体肿胀，变性、严重时整个细胞呈溶解状态，此外，在鳃和肝胰腺组织中还发现溶酶体增多的现象，肌注感染2h后，感染对虾的SOD活力即开始显著下降，之后缓慢回升，至48h恢复大部分活力。     

对虾发光病的病因学与病理学特征

对虾人工养殖中流行发光病，病因学研究证明为一种致病性亮弧菌ＩＶｉｂｒｉｏｓｐｌｅｎｄｉｄｕｓＩ所致。细菌杆状，稍弯，大小为０．４－０．６×１．５μｍ，单极鞭毛运动，革兰氏染色阴性（Ｇ－），对葡萄糖发酵产酸，氧化酶、接触酶、精氨酸双水解酶、淀粉酶均为阳性，对弧菌抑制剂０／１２９敏感，在弧菌选择性培养基（ＴＣＢＳ）上生长良好。ＤＮＡ的Ｇ＋Ｃ为４４．７ｍｏｌ·Ｌ（－１）（ｔｍ值为７２．２℃）。虾体被感染后，组织细胞变性、坏死，血窦与组织间隙充塞细菌，血液淋巴细胞的吞噬和凝固等机能改变，体色灰白，游动缓慢，抗病力下降，衰竭而死。     

白斑综合症杆状病毒（WSBV）PCR检测方法的改进及应用

斑节对虾Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ白斑综合症是由白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）所致。患有典型斑综合症的斑节对虾,用两种提取病毒模板ＤＮＡ的方法,进行ＰＣＲ扩增：一咱是用传统的方法,即蛋白酶Ｋ,ＣＴＡＢ等消化,酚／氯仿抽提,乙醇沉淀得到ＤＮＡ;另一咱是用改进的煮沸法提取病毒ＤＮＡ。对比发现且一种方法稳定性及敏感性比前者高,重复性好。用后一种方法对病虾 的复眼进行检测,ＰＣＲ结果为阳性。应用后一种     

长毛对虾特汉虫病的研究

对长毛对虾Penaeus penicillatus特汉虫病的症状、病原体特征、组织病理研究结果表明,该病原体——对虾特汉虫(Thelohania penaei)孢子椭圆形或梨形,6.6×2.3—4.1μm。孢子发育过程具有年幼的营养体和产孢体、孢子母细胞和孢囊。病症:病虾卵巢被对虾特汉虫入侵并被取代变白,虫体扩散病虾全身发白,摄食大降而失去正常生理机能,导致死亡。雄性虾不受感染。病情延续三个月。     

中国对虾镰刀菌病的症状和病理组织学研究

提出1、中国对虾(Penaeus chinensis)镰刀菌病在鳃、甲壳和附肢上的症状;2、在肌肉、中肠腺等组织器官形成的病灶;3、切片的染色观察。指出镰刀菌寄生在鳃组织破坏虾的呼吸功能,是镰刀菌病引起中国对虾死亡的主要原因。     

斑节对虾杆状病毒（MBV）病诊断研究

对潮阳县古埕村养殖斑节对虾Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ的成体病虾在光学显微镜下作病理组织诊断表明，被病原体感染的肝胰脏腺泡管和导管的上皮细胞核肥大，其内包含一些近似圆球形的包涵体，分别用苏木精－曙红、姬姆舍、孚尔根和Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｂｒｅｅｎ＇ｓ Ｇｒａｍ等染色剂作比较染色。致病细胞发育分：（１）指环期：（２）未成熟包涵体期：（３）成熟包涵体期。该病毒包涵体的形状、大小和形成部位、致病细胞发     

暴发性流行病病原对中国对虾亲虾人工感染及对子代影响的PCR检测

１９９７年４月在山东海阳市近海捕获１０尾中国对虾,采用患暴发性流行病的虾池中的病虾为毒种,进行人工感染试验采用两次了聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法,对感染亲虾的胃、腮、卵巢,以及卵和各期幼体进行跟踪检测,对经人工感染的１０尾亲虾组织的ＰＣＲ检测结果表明,６尾虾的胃样呈阳性,其中４尾为第１次检测出阳性;１尾虾的产呈阳性;２尾虾的卵巢样呈阳性,且其所产的孵子也呈阳性;每尾亲虾产卵所孵化出来的各期纪体,     

实验感染白斑杆状病毒（WSBV）的斑节对虾血液病理学研究

用光镜观察经人工感染白班杆状病毒（White Spot Baculovirus,WSBV)后患血型血斑病的斑节对虾Penaeus monodon的血淋巴涂片,研究了WSBV导致的淋巴细胞数量及结构异常,通过检测感染WSBV后患病虾与健康虾的血清主要生化指标,首次提示了两的主要差异及WSBV在宿主体内增残的时间过程,结果表明：患病虾淋巴细胞明显减少,无颗粒细胞难以找到,颗粒细胞和小颗粒细胞分别为健康虾的11．7％和4％,颗粒细胞内出现深染区,空白或异样突起,血涂片上偶尔发现有大型固定性吞噬细胞,在患病虾血清主要生化指标中,Ca^2 含量比健康虾显升高,患病虾为15．93mmol\L^-1,健康虾为10．71mmol.L^-1,相反,患病虾血清中总蛋白（Tp),总磷（PB）及乳酸脱氢酶（LDH）均比健康虾个体低,3含量依次为：52．07g.L^-1,0.34mmol.L^-1, 和35.27IU.L^-1,在健康虾个体血清中为：66．29g.L^-1,0.66mmol.L^-1及82.36IU.L^-1,而K^ ,Mg^2 ,含蛳无显差异,血沮中Ca^2 ,PB及TP的含量可以作为斑节对虾感染WSBV后出现白班病的血清生化特征,斑节对虾感染WSBV后不同时间内血清主要生化指标显示增残的时间顺序可能为：24h内主要进行核酸复制,24－48h主要进行囊膜蛋白的合成,病毒从入侵宿主要细胞到从细胞内释放的过程约需48h.     

一种对虾杆状病毒形态及形态发生的研究

以患病死亡的甲壳上具白斑的斑节对虾(Penaeusmonodon)虾头及从中提取的病毒悬液分别感染中国对虾(Penaeuschinensis)幼虾及日本对虾(Penaeusjaponicus)。感染后此2种对虾均发病死亡 ,且甲壳上均有白斑。电镜下对人工感染的中国对虾幼虾及日本对虾的组织器官进行观察发现了大量的病毒。此病毒为杆状 ,具囊膜 ,无包涵体 ,大小为295nm×105nm。此病毒的形态发生起始于细胞核 ,并可分为4个阶段 :病毒基质的形成、囊膜的形成、病毒的装配和完整的病毒粒子的形成。病毒的装配过程是与其大量迅速繁殖相适应的。     

中国对虾支原体的电镜研究

1990年7～8月,舟山地区的对虾养殖场暴发了流行性对虾黑鳃褐斑综合症,造成对虾大量死亡。作者根据这一病情,对病虾的主要器官组织进行了电镜观察。结果发现,病虾鳃丝细胞中有支原体感染。寄生部位为鳃呼吸上皮细胞的细胞质和核周腔。支原体多形态,呈近圆形、细长条形不等,无细胞壁,仅有单一膜包围,中心为一电子密度较低的区域。     

中国对虾弧菌性红腿病的细胞病理研究

中国对虾(Penaeus chinensis)弧菌性红腿病是近年来我国华东地区一些对虾养殖场新发生和流行的一种危害严重的病害.本文报道应用光学和电子显微镜研究病虾的腹肢、中肠、心脏、血细胞、鳃等组织细胞的病理改变,病原菌内外部微结构和SMZ处理后菌体微结构的变化.结果表明,病虾血淋巴涂片上能看到少量细菌,血细胞数明显减少,腹肢的真皮层沉积着放射状或树枝状的橘红色色素颗粒.在超薄切片中可见许多寄生弧菌集聚或散布于心肌细胞间质、中肠、腹肢及鳃丝等组织的细胞质中.从病虾血淋巴中被分离培养的细菌鉴定为鳗弧菌(Vibrio anguillarum),人工感染试验进一步证实其为红腿病的病原体.该细菌系一种无芽孢的短弧菌,革兰氏染色阴性,菌体大小为(0.6～0.9)μm ×(1.5～2.5)μm,有一根单端生鞭毛.鞭毛具有鞘和轴结构,菌体内部具有原核细胞超微结构特性,经SMZ处理后,菌体膨胀,核区体积增大,致密染色质颗粒增多,透明斑变少,严重者细胞壁大部分或全部消失,细胞破裂甚至解体.而未经SMZ处理的菌体无此变化.健虾组织中,未见病理变化及细菌存在.这为该病的诊断和有效的防治研究提供了重要的科学依据.     

对虾暴发病的实验室生态学研究

于１９９４,１９９５年在实验室条件下探讨了溶藻弧菌、副溶血弧菌、和非－０１霍乱弧菌的单一菌株与对虾病毒感染的关系;在此基础上,进一步探讨了２３．５￣２５℃和２９．５￣３１℃温度条件下用病虾匀浆感染时,实验水体中细菌数量、弧菌数量的消长情况及其与对虾感染病毒的关系。结果表明,３种弧菌单独感染均可使对虾致病,但在与对虾病毒匀浆共同感染时,感染结果有较大差异,其中溶藻弧菌与对虾病虾匀浆的共同感染结果比单